牛IgG电化学纳米免疫传感器的研制

研制特异性定量检测牛初乳制品及含牛IgG制品中牛IgG含量的电流型纳米免疫传感器。以成膜性及生物相容性良好的壳聚糖为媒介连接纳米金于玻碳电极,以比表面积大、吸附能力强、生物相容性好的纳米金固定兔抗牛IgG-HRP。通过循环伏安法及交流阻抗法表征电极组装各个过程的电化学特性,利用计时电流法测定PBS稀释的标准牛IgG。结果表明免疫前后稳定电流的变化率与标准牛IgG质量浓度的对数在0.1～10000ng/mL范围内线性相关,相关系数r=0.9976。该传感器稳定性及重现性良好,操作简单方便,成本较低,可用于含牛IgG制品中牛IgG含量的特异性定量检测。     

沙丁胺醇分子印迹电化学传感器的制备及应用

分子印迹膜作为一种人工抗体可以特异性的识别目标物从而提高传感器的选择性。在本文中,选用简便的电化学聚合法制备沙丁胺醇（sal）的分子印迹膜,构建一种灵敏度高、选择性好的电化学传感器。该实验首先通过恒电位沉积法（﹣0.2V）将纳米金粒子原位沉积到玻碳电极表面（制得AuNPs/GCE）,接下来,利用循环伏安法（CV）将功能单体邻苯二胺与sal电聚合在AuNPs/GCE表面,制备分子印迹聚合物膜。随后,使用0.5 M H2SO4洗脱分析印迹膜10 min后,得到沙丁胺醇分子印迹电化学传感器（Sal-MIP/AuNPs/GCE）。结果表明,该传感器对sal的响应范围为1×10-11~1×10-6mol/L,检出限为1×10-11 mol/L。其线性方程为△IP(μA)=34.079+2.9048lgc(mol/L),相关系数（R2）为0.9911,且具有较好的选择性。将此传感器应用于新鲜猪肉中sal的快速检测,采用加标回收法验证传感器的性能,发现该方法的回收率为94.41%~107.03%,相对标准偏差（RSD）为2.1~3.5%,有较好的应用价值。     

基于金纳米团簇/氧化石墨烯的高灵敏复合荧光纳米传感器检测水产品中重金属汞离子

目的 建立基于Apt@AuNCs/GO的高灵敏复合荧光纳米传感器检测水产品中汞离子(Hg2+)的方法。方法 以寡核苷酸序列为模板通过一步法快速合成具有直接特异性识别Hg2+能力的金纳米团簇(Apt@AuNCs); Apt@AuNCs作为荧光能量供体, 与氧化石墨烯(graphene oxide, GO)纳米片结合, 形成Apt@AuNCs/GO复合荧光纳米体系, 此时, Apt@AuNCs荧光被GO猝灭; Hg2+以T-Hg2+-T结构与Apt@AuNCs结合, 使得Apt@AuNCs脱离GO表面, 体系荧光得到恢复, 从而实现Hg2+的快速荧光法检测。结果 最佳检测条件为: 选择适配体序列为C12T2CT3CT2C4T2GT3GT2、GO质量浓度为0.30 mg/mL、激发波长为345 nm、GO与Apt@AuNCs孵育时间为35 min。该方法的Hg2+检出限约为0.189 nmol/L, 定量限约为0.63 nmol/L, 线性范围为0.5~10.0 nmol/L。选择小龙虾和鲢鱼作为实际检测样品, 通过标准加入法进行测试, 其加标回收率为87.18%~109.90%。结论 该复合荧光纳米体系无需复杂预处理, 实现了对实际样品中Hg2+的现场、简单快速且高灵敏的测定, 为水产品中Hg2+的检测提供了一种新思路。     

基于纳米金-石墨烯-壳聚糖复合物修饰电极的免疫传感器检测己烯雌酚

研究在磷酸缓冲介质(PBS)中,一种检测己烯雌酚抗原的新型免标记电化学免疫传感器的制备及应用。首先将纳米金(AuNP)修饰在电极上,然后将石墨烯(Gr)-壳聚糖(CS)复合物饰于玻碳电极表面,通过循环伏安法对修饰的电极进行表征。以[Fe(CN)6]3-/4-为氧化-还原探针,基于己烯雌酚抗原抗体反应引起[Fe(CN)6]3-/4-探针的电流响应的变化,来实现对己烯雌酚抗原的检测。己烯雌酚抗原的质量浓度在0.5～1500.0ng/mL范围,与峰电流呈良好的线性关系,相关系数为0.985,检测限为0.1ng/mL。该传感器具有良好的重现性和稳定性,用于动物组织和奶粉样品的测定获得满意结果。     

基于纳米金电化学免疫传感器测定牛奶中的青霉素G

利用吸附法将青霉素G抗体固定于纳米金修饰的玻碳电极表面,制备用于检测青霉素G的电化学免疫传感 器,建立高度灵敏的一步直接电化学免疫法。纳米金的强吸附和导电作用,提高了青霉素G抗体的固定量和电化学 灵敏度。在优化条件下,该传感器的响应电流与青霉素质量浓度的对数在0.04～40.00 ng/mL范围内呈良好的线性关 系,相关系数为0.988 4,检测限为2.49 ng/mL,该法成功的实现了对牛奶中青霉素G的检测。     

纳米金修饰碳糊电极上沙丁胺醇的电化学研究

制备纳米金修饰碳糊电极,采用循环伏安法和方波伏安法研究沙丁胺醇(Sal)在修饰电极上的电化学行为。纳米金修饰碳糊电极与裸碳糊电极相比,显著提高Sal的氧化峰电流,氧化峰电位负移50mV,提高了测定Sal的灵敏度。实验表明：氧化峰电流与Sal浓度在0.471～64.2μmol/L范围内呈良好线性关系,检出限为0.15μmol/L(RSN=3)。对40.7μmol/L的Sal进行11次平行测定,RSD 1.7%。所建立的方法可用于血样和尿样中Sal含量的测定。     

电化学免疫生物传感器在食品中大肠杆菌O157:H7检测中的应用

针对食品中致病菌快速检测的需求,开发了一种电化学免疫方法用于检测食品中大肠杆菌O157:H7.大肠杆菌O157:H7的检测通过测量HRP酶催化之后的过氧化氢的氧化还原电流来实现.结果显示,该传感器能在5.2×10～5.2×106 CFU/mL的动态检测范围内实现食品中大肠杆菌的检测.该生物传感器被成功应用于实际样本(牛...     

基于纳米金/石墨烯修饰的超灵敏己二烯雌酚电化学生物传感器

利用纳米金/石墨烯复合纳米材料以及己二烯雌酚小分子修饰电极,研制了一种新型的超灵敏己二烯雌酚复合纳米电化学生物传感器;制备了己二烯雌酚抗原和多克隆抗体;并以K3Fe(CN)6为探针,利用己二烯雌酚抗体与半抗原之间的竞争反应实现了对己二烯雌酚的超灵敏电化学免疫检测。结果表明：纳米金/石墨烯复合纳米材料具有优异的增敏性和可修饰性。研制的复合纳米电化学生物传感器具有很高的检测灵敏度,己二烯雌酚质量浓度在1～6 000 ng/mL的范围有良好的线性关系,检测限可达到0.05 ng/mL;传感器修饰己二烯雌酚小分子具有简单、重复性和稳定性好的优点。对猪肉、鸭肉、牛肉以及奶粉实际样品进行了己二烯雌酚含量的分析,平均回收率在96.5%～103.7%之间,结果令人满意。     

用于快速检测沙丁胺醇的分子印迹传感器的制备及其在食品检测中的应用

首先通过电沉积纳米金,电聚合聚硫堇对玻碳电极表面进行了修饰,之后利用沙丁胺醇为模板分子,通过电聚合α-甲基丙烯酸,制备了一种选择性具有特异识别功能的纳米金/聚硫堇/沙丁胺醇分子印迹电化学传感器。实验采用循环伏安法和差分脉冲法,对不同的修饰电极进行了表征,优化电极的制备和测定条件,研究了印迹传感器对模板分子的选择性响应。结果表明:最佳制备条件下,模板分子:功能单体=1:4,聚合15圈,以0.5 mmol/L硫酸:乙腈(1:9,V/V)洗脱10 min,在pH=7.0的PBS溶液中进行DPV检测,线性范围为2.0×10~(-7)~1.0×10~(-4) mol/L,检测限为6.0×10~(-8) mol/L,S/N=3。该传感器灵敏度高,抗干扰能力强,重现和稳定性好。利用制备的分子印迹电化学传感器对食品中的沙丁胺醇进行了测定,回收率在86.5%~111.9%(n=3),结果令人满意。     

基于电化学纳米免疫传感器检测牛乳中过敏原α-酪蛋白

基于电化学生物传感技术,以壳聚糖为桥联剂,结合纳米金及辣根过氧化物酶电信号放大系统,以FcεRI受体蛋白为通用分子探头吸附抗牛乳α-酪蛋白抗体IgE,构建了一种可用于牛乳中过敏原α-酪蛋白检测的纳米金免疫传感器,并且通过时间-电流曲线对牛乳α-酪蛋白进行了验证。结果表明:牛乳α-酪蛋白-免疫球蛋白E（immunoglobulins E,IgE）互作动力学曲线符合双曲线规律,结果符合双曲线拟合标准R2≥0.95,具有类似于酶-底物互作的底物饱和效应;参考米氏常数计算得到其联动变构常数Ka值为4.096×10?12 mol/L。本研究研发的生物传感器可结合变应原的特异性IgE并实现对过敏原的超敏感检测,该检测方法灵敏度高、成本低、响应快速,可为研究变应原导致的过敏反应提供一个新的检测技术手段。     

基于DMSA自组装单分子层的SPR免疫传感器检测沙丁胺醇

本文通过双巯基丁二酸(DMSA)作为单分子层连接表面等离子体共振(SPR)免疫传感器中芯片上的抗原,并以沙丁胺醇(SAL)为检测模型,构建了DMSA-SPR免疫传感器,将其检测效果与传统的巯基丙酸(MPA)-SPR传感器进行比较。结果表明,室温下,DMSA-SPR免疫传感器的抗原抗体识别效率增强近一倍,其线性范围达到5~150 ng/mL,定量限(LOQ)达到5 ng/mL。此传感器应用于猪肉中SAL检测的回收率达到94.9%~108.0%,并与超高效液相色谱-串联质谱仪(UPLC-MS/MS)检测结果具有很好的相关性。因此,该方法为提高SPR免疫传感器的灵敏度提供了新思路、新方法,并可广泛应用于其他小分子的检测。     

非共价作用石墨烯-金纳米复合材料修饰电极的制备及检测双酚A的方法研究

基于阳离子-π非共价作用力制备石墨烯-金纳米复合材料(graphene-AuNPs),研究基于该纳米复合材料修饰玻碳电极建立电化学传感定量检测水样中双酚A的方法。采用扫描电镜(SEM),EDS能谱和X-射线衍射(XRD)技术对该复合材料进行表征,同时制备基于纳米材料修饰的玻碳电极(graphene-AuNPs/GCE),研究双酚A在修饰电极表面的电化学行为,并将该传感器应用于实际样品中双酚A含量的检测。结果表明,所制备的复合材料结构稳定,分散无团聚现象,粒子尺寸大小均匀;所修饰的纳米材料电极对双酚A有明显的电催化性能,双酚A在修饰电极上的电流响应是裸玻电极的6.3倍。在优化条件下,双酚A在浓度为5.7~570 ng/m L和570~2280 ng/m L范围内与氧化峰电流呈线性,检测限为1.9 ng/m L(S/N=3)。将该修饰电极应用于水体样品中双酚A的检测,回收率在78.91~115.54%。     

基于石墨烯/离子液体构建免疫传感器快速测定食品中黄曲霉毒素B1

采用壳聚糖、石墨烯和1-丁基-3-甲基咪唑基四氟硼酸盐复合膜修饰玻碳电极,包埋固定黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）抗体,构建了一种免疫传感器,用于快速测定食品中的AFB1。在pH值为7.0含1 mmol/LK3[Fe(CN)6]和0.1 mmol/L KCl的磷酸盐缓冲溶液中,基于AFB1抗体与抗原之间的特异性免疫反应,以K3[Fe(CN)6]为探针,运用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究免疫反应对传感器响应电流的影响。在优化实验条件下,免疫传感器峰电流的降低值随溶液中AFB1质量浓度对数的增大而增大,且二者在0.1～8.1 ng/mL范围内呈线性关系,其检出限为0.04 ng/mL（RSN=3）。该免疫传感器的稳定性和重复性较好,利用该法对花生和玉米油样品中AFB1进行检测,回收率为94.73%～104.41%,检测结果与高效液相色谱法基本一致,用于食品中AFB1的快速检测是可行的。     

沙丁胺醇直接酶联免疫快速检测的方法

沙丁胺醇与瘦肉精同属于禁用的饲料添加剂,可以在动物体内大量残留,人体过量摄入会引起中毒反应。为了建立沙丁胺醇的快速检测方法,从硫酸沙丁胺醇出发制备了半抗原沙丁胺醇丁二酸衍生物,用混合酸酐法将半抗原与载体蛋白-钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)偶联作为免疫抗原制备了沙丁胺醇的多克隆抗体,建立了沙丁胺醇直接竞争酶联免疫检测方法,该方法抗体最佳包被抗体量为1μg/孔,酶标抗原稀释比例为1∶16000,掩蔽剂采用脱脂奶粉。所建立的方法具有很高的灵敏度和特异性I,C50为0.90ng/mLI,C15达到了0.05ng/mL,远低于国家残留限量标准,与沙丁胺醇的结构类似物基本没有交叉反应。