响应面法优化超声波辅助蛋白酶水解合浦珠母贝肉的条件研究

利用响应面法优化超声波辅助酶解合浦珠母贝肉的工艺条件。单因素试验研究超声波功率、温度、超声时间对水解度的影响,在此基础上,应用Box-Behnken 中心组合设计建立数学模型,以水解度(DH)作为响应值,进行三因素三水平的响应面分析(Minitab)。结果表明,超声波辅助酶解合浦珠母贝肉的最佳工艺条件为：超声波功率160W、处理温度50℃、处理17min 后,水解1h 后产物水解度为31%,平均肽链长度3.2,与预测值的相对误差为0.5%。     

响应面法优化合浦珠母贝肉水解工艺

采用响应曲面法对合浦珠母贝肉的酶解工艺进行优化。以水解度为评价指标,分别考察加酶量、液料比、酶解时间和酶解温度对水解效果的影响。结果表明,贝肉最佳水解条件为加酶量5 680 U/g、液料比2.8∶1(m L∶g)、酶解时间6.5 h、酶解温度55℃,在此条件下水解度为(44.27±1.23)%,与预测值基本吻合。该工艺简单方便,水解效果好,可用于指导生产实践。     

罗非鱼排酶解工艺的研究

选用中性蛋白酶酶解罗非鱼排,制备蛋白水解液。以水解度为优化指标,考察初始pH值、酶解温度、料液比、加酶量、酶解时间对水解度的影响,在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken中心组合设计和响应面分析法,确定最佳工艺条件;并在最佳工艺条件下,考察水浴、高压蒸汽、超声波和微波等预处理方式对水解度的影响。结果表明:最佳工艺条件为温度49℃,加酶量1 824U/g,水解时间6h,此时罗非鱼排水解度(DH)可达33.7%;除了110℃的高压蒸汽和180w功率的超声波预处理有助于罗非鱼排的进一步水解,其它的预处理方式均不利于罗非鱼排的后续水解。     

三种物理法辅助蛋白酶水解合浦珠母贝蛋白的效果评价

目的:研究了微波法(W)、超声法(U)与传统水浴法(H)3种模式辅助7种常用酶(Alcalase 2.4L蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶和枯草蛋白酶)酶解合浦珠母贝蛋白的效果。方法:通过RPHPLC法与Tricine-SDS-PAGE电泳实验,结合水解度、DPPH·清除率、·OH自由基清除率等评价指标。结果:物理辅助酶解能有效促进水解,微波结合木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和枯草蛋白酶处理,其作用效果优于超声波法和传统水浴法;Alcalase 2.4L蛋白酶与复合风味蛋白酶在三种辅助模式下相似。结论:综合各指标结果得出,微波助解合浦珠母贝蛋白最佳的酶为Alcalase 2.4L蛋白酶与复合风味蛋白酶。     

米曲霉和鲁氏酵母协同发酵优化合浦珠母贝肉酶解液风味

为改善合浦珠母贝肉酶解液风味,采用米曲霉和鲁氏酵母对合浦珠母贝肉酶解液进行协同发酵,并采用正交试验法对其工艺条件进行优化。以发酵液风味值及游离氨基态氮含量为指标,研究菌种比、接种量、发酵温度和发酵时间对合浦珠母贝肉发酵液风味改善的影响。结果表明,米曲霉和鲁氏酵母协同发酵工艺的最佳条件为:米曲霉∶鲁氏酵母=1∶2、接种量4%、发酵温度32℃、发酵时间80 h,该条件下,所得合浦珠母贝肉酶解发酵液的风味值评分与游离氨基态含量分别为96. 77与2. 83 g/L,分别比发酵前提高了59. 40%与26. 34%,贝肉酶解液风味得到显著改善。该研究结果对以合浦珠母贝肉为原料开发海鲜调味料提供了理论基础。     

响应面法优化微波辅助提取贻贝蛋白的工艺研究

研究微波对中性蛋白酶水解贻贝蛋白条件的影响,探讨了在一定的微波功率/时间,加酶量、酶解温度和时间对蛋白质回收率的影响。单因素实验先确定因素水平,再通过响应面确定最佳的工艺条件,酶解条件分别是时间为118.8min,加酶量为0.754%,微波功率为189.7W,温度分别为46.9℃,该条件下得到的最大蛋白质回收率为74.83%。     

微波预处理对脱脂豆粕蛋白水解度的影响

为得到高水解度的脱脂豆粕蛋白酶解液,在相同酶解条件下,研究微波预处理对脱脂豆粕蛋白水解度的影响,并运用响应面法对微波预处理的功率、温度和持续时间进行优化。结果表明：微波预处理的最佳工艺条件为底物质量分数2%、功率414W、温度79.6℃、持续时间111s;而后经碱性蛋白酶Alcalase酶解水解度能达到30.46%,比未经预处理的样品水解度提高了18.45%,这说明微波处理是一种非常有效的酶解预处理手段。     

水相酶法从冷榨橄榄果渣中提取蛋白的研究

采用中性蛋白酶对预处理过的脱脂橄榄果渣进行酶解从而提取橄榄蛋白,以酶解温度、p H、加酶量、反应时间为单因素进行单因素酶解研究,并在单因素基础上以水解度为响应值对酶解条件进行响应面分析,得到酶解最佳工艺条件为:反应温度42.5℃、p H 7.0、加酶量为0.6%、酶解时间3.1 h,水解度达8.58%。     

风味蛋白酶水解合浦珠母贝肉制备抗菌肽人工神经网络法优化工艺

利用具有自学习特点的人工神经网络可实现对酶解过程的模拟仿真,研究从合浦珠母贝肉中制备抗菌肽的最佳工艺条件。采用3层(5-9-3)人工神经网络法对风味蛋白酶水解合浦珠母贝肉的工艺过程进行模拟和优化,并通过管碟抑菌法对产物的抑菌性质进行分析。结果表明：pH7.0、水解温度55℃、酶添加量1.6%、水解时间4h、料液比7:5,制备得到肽A,抑制鼠伤寒沙门氏菌最强,抑菌圈直径14.20mm,平均肽链长度2.6;pH7.0、水解温度55℃、酶添加量1.7%、水解时间4h、料液比3:2,制备得到肽B,抑制痢疾志贺氏菌最强,抑菌圈直径23.42mm,平均肽链长度2.8;pH6.5、水解温度60℃、酶添加量2.5%、水解时间4h、料液比7:5,制备得到肽C,对单核细胞增生李斯特菌的抑制效果最强,抑菌圈直径16.60mm,平均肽链长度2.5。3种抗菌肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌也具有较强的抑菌效果,抑菌率为74.3%～80.8%。本研究利用人工神经网络优化制备的贝肉抗菌肽克服了纯度低、提取率低等缺点,为合浦珠母贝肉抗菌肽的开发利用提供技术支撑。     

马氏珠母贝肉酶解产物对SD大鼠生化指标的影响研究

以马氏珠母贝肉为研究对象,采用正交实验对其酶解条件进行优化,并测定其酶解产物对SD大鼠血清生化指标的影响。结果表明:马氏珠母贝肉酶解的最优条件是酶用量0.6%、温度70℃、时间35min、pH8.0,在此条件下马氏珠母贝肉蛋白质水解度高达54.79%。马氏珠母贝肉酶解产物的调配试剂注射使SD大鼠血清中前白蛋白、载脂蛋白A1显著上升(p<0.05),谷丙转氨酶、谷草转氨酶、载脂蛋白B、肌酸激酶MB型同工酶、超敏C反应蛋白、葡萄糖、间接胆红素显著下降(p<0.05),结合相关研究结果,推测出马氏珠母贝肉酶解产物有保肝、保心血管的功效。     

花椒籽仁抗氧化肽水解用酶的筛选研究

采用Protamex、Alcalase2.4L、Flavourzyme500MG、Neutrase0.5L、木瓜蛋白酶5种酶制剂水解花椒籽仁蛋白制备抗氧化肽,以水解度(DH)、多肽含量和水解产物的总抗氧化能力(TAC)、DPPH自由基清除能力、在亚油酸体系中的抗氧化性为指标对水解过程进行了分析,结果表明,Alcalase2.4L蛋白酶是制备花椒籽仁抗氧化肽的最适水解酶,其水解物的水解度(DH)为20.42%,多肽含量为21.83mg/mL,总抗氧化能力(TAC)和DPPH自由基清除能力分别为0.44mmol/L、65.47%,此外在亚油酸体系中具有一定的抗氧化性。     

鱼鳞明胶酶解制备超氧阴离子清除活性肽的研究

研究了Alcalase2.4L水解鱼鳞明胶的工艺条件及产物的超氧阴离子清除活性。以水解度为指标,在单因素实验的基础上,通过响应面实验优化得到最佳酶解条件为温度54.5℃,pH7.7,底物浓度1.8%(W/V),加酶量1%(W/W),在此条件下水解2h的水解度为13.02%。对酶解产物进行体外超氧阴离子清除活性分析,结果表明,不同水解度的酶解产物表现出不同的抗氧化活性。在优化条件下水解4h,水解产物的超氧阴离子清除活性最高,IC50为0.36mg/mL,此时水解度为14.11%。     

鳄鱼骨双酶酶解产物的功能特性及其抗氧化活性

为了全面了解酶解时间、蛋白酶种类对鳄鱼骨蛋白酶解产物抗氧化性和功能特性的影响,采用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶及双酶(先加入木瓜蛋白酶,后加入碱性蛋白酶)在各自最适条件下对其进行酶解,制备了不同水解度的酶解产物,并对其功能特性及抗氧化性进行分析。结果表明:随着酶解时间的延长,酶解产物的亚铁离子螯合能力和还原力均有所增强。在酶解0.25 h时,酶解产物具有较强的清除DPPH自由基的能力,随着酶解时间的延长,木瓜蛋白酶酶解产物清除DPPH自由基的能力不断下降,碱性蛋白酶先下降后上升,而双酶酶解产物则没有显著变化。在2～4 h内相同酶解时间下,与单酶酶解产物相比,双酶酶解产物具有较强的亚铁离子螯合能力、还原力及清除DPPH自由基的能力(P<0.05)。在酶解产物的功能性质方面,随着酶解时间的延长,双酶酶解产物较单一酶酶解产物具有更好的溶解性、热稳定性及乳化性。结果表明,双酶酶解较单一酶酶解得到的产物具有较强的抗氧化性。     

酶法制备汉麻籽蛋白抗氧化肽

采用不同蛋白酶酶解汉麻籽蛋白,确定Alcalase 2.4L碱性蛋白酶是酶解汉麻籽蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解汉麻籽蛋白的优化条件为:底物浓度50 mg/mL、水解时间2 h、温度50℃、加酶量2.2%、pH 9.4。优化酶解条件下,水解度约为20%,10 mg/ mL酶解产物的DPPH自由基清除率为82.65%,显示出较好的抗氧化活性。     

Optimising the free radical scavenging activity of shrimp protein hydrolysate produced with alcalase using response surface methodology

Response surface methodology (RSM) was used to optimise the hydrolysis parameters of Acetes chinensis by Alcalase 2.4L in order to obtain a hydrolysate with potent radical scavenging activity. The parameters were temperature, pH and enzyme concentration/substrate concentration (E/S) ratio with degree of hydrolysis (DH) being the response. The results showed that the optimum condition was: temperature at 57 °C, pH at 8.0, E/S ratio at 2.6AU 100 g⁻¹ shrimp, hydrolysis time 3 h. The DH was 26.32%, the hydroxyl radical scavenging activity was up to 88.12% and the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity was 35.61%. The gel column filtration chromatography by a Sephadex G-25 column yielded five fractions. The molecular weight of the most potent free radical scavenging activity fraction ranged from 915 to 207 Da, its IC₅₀ for hydroxyl radical was 0.03 mg mL⁻¹, and IC₅₀ for DPPH radical was 8.86 mg mL⁻¹.     

大豆蛋白的酶水解及类蛋白反应对其抗氧化活性的影响

采用Alcalase 2.4L FG 蛋白酶水解大豆蛋白,筛选并制备出ABTS+·清除率最高的水解物,其水解度为14.0%,对ABTS+·清除率为43.6%。以此水解物为底物,以修饰产物的游离氨基减少量为指标,应用响应面分析得到类蛋白反应的优化条件为：酶添加量1037U/g pro、底物质量浓度30g/100mL、温度20℃。在此条件下反应6h,水解物的修饰反应程度和抗氧化活性均为最大。制备反应程度不等的3 个修饰产物,进一步抗氧化活性分析表明：大豆蛋白水解物及其修饰产物的抗氧化活性好于大豆蛋白;修饰产物与水解物的DPPH 自由基清除能力、还原力、超氧阴离子自由基(O2 － ·)清除率差别不显著,但是对羟自由基(·OH)清除率差别显著。     

不同苦荞蛋白酶解产物抗氧化活性研究

以苦荞蛋白作为底物,采用碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以及胃蛋白酶加胰蛋白酶模拟体内蛋白消化,制备苦荞麦蛋白水解物。采用DPPH及ABTS~+·法比较不同的蛋白水解物与水解前苦荞蛋白的体外抗氧化活性。结果表明:不同蛋白酶水解产物水解度由高到低的顺序为:碱性蛋白酶胃蛋白酶~胰蛋白酶胃蛋白酶木瓜蛋白酶胰蛋白酶,其中碱性蛋白酶水解苦荞蛋白水解度达29.95%。苦荞蛋白本身具有一定的抗氧化能力,其中DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别达71.91%及11.25%,但均显著低于阳性对照Vc。随着水解程度的增加,苦荞蛋白水解产物抗氧化能力逐渐增强。其中,以碱性蛋白酶酶解产物抗氧化活性最高,其DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别为91.65%(0.5 mg/mL)及16.67%(1 mg/mL),均显著高于原苦荞蛋白。其中,碱性蛋白酶水解产物的DPPH自由基清除率在高浓度(0.5mg/mL)条件下,与阳性对照Vc持平。同时碱性蛋白酶酶解产物抗氧化性(DPPH清除率及ABTS~+·清除率)显著优于其他蛋白酶解产物。因此,苦荞麦蛋白采用碱性蛋白酶解制备苦荞水解产物可作为天然的抗氧化剂。     

石斑鱼肉肽的酶法制备工艺及其抗氧化性

以冰鲜石斑鱼肉为原料,采用碱性蛋白酶酶解的方法制备蛋白肽。以水解度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为评价指标,在单因素试验的基础上,运用正交试验设计优化肽的制备工艺;利用DPPH自由基法、2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis（3-ethylbenzothi azoline-6-sulfonic acid）ammonium salt,ABTS）自由基法、羟自由基（·OH）法和铁氰化钾还原法评价酶解物的抗氧化性。结果表明：石斑鱼肉肽的最佳制备条件为：酶解温度55 ℃、酶解pH 9、酶用量5 000 U/g、底物质量浓度8 g/100 mL、酶解时间5 h;石斑鱼肉肽酶解物具有较强的抗氧化性,清除DPPH自由基能力、ABTS+·能力、·OH能力和总还原力均随酶解物质量浓度的增加而增强;酶解物清除DPPH自由基、ABTS+·、·OH的半抑制浓度（IC50）值分别为（1.18±0.26）、（0.89±0.05） mg/mL和（0.35±0.02） mg/mL。     

响应面试验优化广昌白莲蛋白提取工艺及其酶解多肽抗氧化活性

以广昌白莲为原料,通过单因素试验和响应面试验优化超声波辅助提取白莲蛋白的工艺,并采用胃蛋白酶和碱性蛋白酶对白莲蛋白进行单酶和有次序双酶水解,研究其酶解产物的抗氧化活性。结果表明,广昌白莲蛋白的最佳提取条件为：在超声功率固定250 W条件下,料液比1∶14（g/mL）、提取温度35.5 ℃、提取时间58 min、NaCl浓度0.14 mol/L。所得蛋白提取率达到89.86%,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE）分析显示其分子质量主要分布在14～25 kD和35～60 kD之间;不同酶解方式显著影响了白莲蛋白的酶解效果及其酶解产物的抗氧化活性,其中先胃蛋白酶后碱性蛋白酶的双酶酶解为最佳方式,其蛋白水解度达到20%,其酶解产物（P-A）H的总还原能力（A700 nm）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力和·OH清除能力IC50值分别达到1.002、0.379 mg/mL和1.093 mg/mL,表明广昌白莲蛋白酶解产物具有较强的抗氧化活性。