软枣猕猴桃多聚半乳糖醛酸酶提取条件的优化

以软枣猕猴桃为实验材料,确定多聚半乳糖醛酸酶最优提取条件和最适活性分析条件。在提取过程中,以酶比活力为指标确定缓冲液的最适pH值、离子浓度、DTT添加量对PG提取效果的影响,通过正交试验确定最佳提取条件。结果表明：最优提取条件为pH5.5、0.05mol/L 乙酸缓冲液为提取液,加入0.1mol/L NaCl、1mmol/L DTT;最适活性分析条件为反应温度40℃、反应时间90min。     

三疣梭子蟹酚氧化酶的生化特性研究

对三疣梭子蟹酚氧化酶的生化特性进行研究。结果表明：以邻苯二酚为底物,酚氧化酶在pH7.8～8.4时最稳定,最适pH 值为8.2。温度55℃时,酚氧化酶活力最大,在25～40℃时,热稳定性最好。酶促褐变反应动力学符合米氏方程,温度为30℃,pH7.2 时,米氏常数Km=0.531mol/L,最大反应速率0.049 A530nm/min。选用的12 种抑制剂对三疣梭子蟹酚氧化酶均有一定的抑制效果,以植酸抑制效果最强,焦亚硫酸钠、L- 半胱氨酸、草酸次之,抗坏血酸效果较好。     

圆蘑菇多酚氧化酶的特性研究

采用0.2 mol/L磷酸盐缓冲溶液匀浆法从圆蘑菇中提取多酚氧化酶(PPO),并对该多酚氧化酶的酶学特性进行研究.实验结果表明,以邻苯二酚为底物,该酶的最适pH为6.4,最适温度为30℃,Km值为0.032 3 mol/L,Vmax值为0.0164 U/min,100 ℃热处理1.5 min可完全钝化PPO的活力,10 mmol/L的EDTA、L-半胱氨酸或柠檬酸亚锡二钠能有效抑制PPO活力.     

金银花叶多酚氧化酶的酶学特性

对金银花叶多酚氧化酶(PPO)的酶学特性进行研究。以新鲜金银花叶片为原料,采用溶剂法从中提取多酚氧化酶粗液,研究不同的温度、pH值、底物浓度、抑制剂等因素对PPO活性的影响,建立酶促褐变动力学方程。研究结果表明,金银花叶PPO的最适温度45℃,最适pH6.5,安全、经济的褐变抑制剂柠檬酸;当以邻苯二酚为底物时,金银花叶PPO活性与底物浓度关系符合米氏方程的酶促反应动力学规律,最大反应速度Vmax=313U/min,Km=0.0197mol/L。     

茯苓多酚氧化酶酶学特性及褐变抑制

以茯苓为供试材料,采用分光光度计法测定多酚氧化酶(PPO)活力,研究pH值、温度、底物浓度以及抑制剂等因素对茯苓PPO活性的影响。结果表明,茯苓PPO最适pH值为6.5,最适温度为35℃,最适底物浓度为0.06 mol/L。PPO酶促反应动力学符合米氏方程,动力学参数Km=0.024 4 mol/L,Vmax=121.95 U/min。NaCl、抗坏血酸、L-半胱氨酸和柠檬酸溶液对茯苓PPO均有抑制作用,随着质量浓度的升高,抑制效果越好;相同质量浓度下,L-半胱氨酸抑制作用最强,其次是抗坏血酸和柠檬酸,最后是NaCl。     

介孔分子筛MCM-41固定糖化酶的研究

以介孔分子筛MCM-41为载体、戊二醛为交联剂,对糖化酶进行了固定化.考察了固定化温度和时间、给酶量、pH值以及戊二醛浓度等因素对固定化效果的影响,并对固定化酶的酶学性质进行了研究.结果表明,糖化酶最佳固定化条件是:酶与载体比例为50mg/g、固定化温度20℃、固定化时间8h、pH值6.1、戊二醛浓度7.5％,此条件下固定化酶的相对酶活力为47％.固定化酶的最适作用温度和最适作用pH值没有改变,同游离酶一样,分别为60℃和4.6,米氏常数Km由原来的0.031 mol/L降为0.018mol/L.     

南美白对虾酚氧化酶催化不同底物的生化特性研究

为揭示南美白对虾酚氧化酶(phenoloxidase,PO)催化不同底物时的生化特性,本文以L-多巴、甲基多巴、邻苯二酚为底物,分别测定南美白对虾酚氧化酶催化这三种底物时的最适温度、最适p H,酶促动力学常数K_m、V_max值、活化能。结果表明,南美白对虾PO酶催化三种底物的最适温度分别为45、40、30℃,最适p H分别为6.8、7.2、8.0,酶促动力学常数K_m分别为2.5003、5.8661、1.8429 mmol/L,V_max分别为0.0624、0.1008、0.1692ΔA/min,活化能Ea分别为15.2158、18.1981、10.4696 k J/mol;邻苯二酚与PO酶的结合能力较强,但其结合受外界温度的影响较大;而PO酶与L-多巴和甲基多巴的结合受外界温度影响较小。由此可得,底物结构越简单,越容易与PO酶活性中心结合;底物与酶的结合能力越强,酶活化底物时所需的活化能越小;在PO酶研究中,如果影响因素有温度这一条件时,不应该选择邻苯二酚作为底物。     

介孔分子筛SBA-15固定糖化酶的研究

以介孔分子筛SBA-15为载体,戊二醛为交联剂,对糖化酶进行了固定化.考察固定化温度、时间、给酶量、pH值以及戊二醛浓度等因素对固定化效果的影响,并对固定化酶的酶学性质进行了研究.结果表明,糖化酶最佳固定化条件是:酶与载体比例50mg/g、固定化温度25℃、固定化时间4h、pH 5.1、戊二醛体积分数7.5%,此条件下固定化酶活力回收率为56%.固定化酶的最适作用温度为70℃,比游离酶高10℃.最适作用pH 4.1,比游离酶降低0.5个单位.米氏常数Km由原来的0.032mol/L降为0.022mol/L.用超声波对固定化酶进行处理,其酶活力提高了18%.所得最佳超声参数是:超声功率100W,温度70℃,时间5min.     

南美白对虾血淋巴脂肪氧合酶的分离纯化及其生化特性研究

用羟基磷灰石柱层析法分离纯化南美白对虾血淋巴脂肪氧合酶,同时进行酶学性质及其反应产物研究,为南美白对虾资源的综合利用、虾风味形成机制的研究提供依据。结果显示:以亚油酸为底物,南美白对虾血淋巴脂肪氧合酶最适温度为25℃,最适pH9.6,最适底物浓度0.25mmol/L,Vmax值为1.67×103U/mg蛋白·min,Km值为0.5mmol/L,1mmol/L的谷胱苷肽能有效提高酶液稳定性;该酶对3种不饱和脂肪酸的亲和力依次为C20∶4>C18∶2>C18∶3;利用正相高效液相色谱分析,南美白对虾血淋巴脂肪氧合酶催化亚油酸甲酯只形成13-氢过氧化物。     

不同对虾中多酚氧化酶的提取比较及在虾体的分布研究

用丙酮法和匀浆浸提法分别对南美白对虾和中华管鞭虾进行多酚氧化酶的提取,结果表明,在同样的提取条件下,中华管鞭虾的酶活大于南美白对虾,匀浆浸提法提取的酶活比丙酮法高1.5倍;同时对中华管鞭虾的提取条件料液比、缓冲液pH、浸提时间、水浴温度做了研究,通过正交实验得到当料液比1∶4,缓冲液pH8,浸提时间3h,水浴温度45℃条件下提取的酶具有最大的活性;进一步研究中华管鞭虾的多酚氧化酶在虾体中的分布情况,得出虾头部位多酚氧化酶含量较高,虾尾和虾身含量较低。     

毛蚶体内金属硫蛋白提取工艺优化

旨在建立一种金属硫蛋白(metallothionein,MT)的高效提取工艺。采用了Zn2+诱导毛蚶机体产生金属硫蛋白,比较诱导前后毛蚶体内MT含量的变化。探究毛蚶中金属硫蛋白的提取方法并优化提取因素,选用Tris-HCl缓冲液为提取剂。在单因素实验的基础上,选取对MT提取含量影响较大的因素包括提取液pH、提取液浓度、液料比、提取温度等进行试验。以MT提取含量作为响应值,根据Box-Behnken实验原理,在四因素三水平的基础上进行毛蚶金属硫蛋白提取工艺响应面优化分析。结果表明,最佳提取工艺参数为:液料比6∶1 mL/g,提取液 pH为8.45,提取温度 35 ℃,缓冲液浓度 0.18 mol/L。在此参数条件下,MT提取量为 0.695 mg/g,与模型的预测值基本相符。因此,本研究建立了从毛蚶中高效提取MT的工艺。     

无花果曲霉固态发酵中菊粉酶的提取工艺

对无花果曲霉固态发酵中菊粉酶的提取工艺进行了研究。主要研究了溶剂种类、提取时间、固液质量体积比、振荡频率和提取温度等因素对酶活的影响,确定了最佳提取工艺:以pH为4.5的0.1mol/L醋酸缓冲液为提取溶剂,提取时间40min,固液质量体积比1:20.5,振荡频率为207r/min,提取温度39.6℃,菊粉酶的提取得率相对于初始提取条件可以提高50%以上。     

凡纳滨对虾肌肉中组织蛋白酶L提取工艺优化及分离纯化

优化凡纳滨对虾肌肉中组织蛋白酶L提取工艺,分离纯化组织蛋白酶L并验证其对肌原纤维蛋白的降解作用.以凡纳滨对虾肌肉为原料,采用单因素试验、Plackett-Burman试验和双因素等重复试验对肌肉中组织蛋白酶L的提取工艺进行了优化.采用Tris-HCl缓冲液浸提、硫酸铵沉淀、Q-Seharose F.F阴离子交换层析、S...     

基于CdTe/CdS量子点荧光淬灭方法检测自来水和果汁中汞离子

本文基于巯基乙酸修饰的核壳型CdTe/CdS量子点建立了Hg2+的检测方法。对检测条件进行优化并利用荧光光谱仪和紫外-可见吸收光谱仪对量子点荧光强度进行表征。结果表明:在Tris-HCl缓冲溶液浓度为0.05 mol/L,pH8.0,室温反应15 min的条件下,不同浓度Hg2+(10-6~10-4 mol/L)对量子点具有较好的荧光猝灭效果,且随着Hg2+溶液浓度增加,其对量子点的荧光猝灭效果逐渐增强。该方法对Hg2+的理论检出限为2.667 nmol/L,低于自来水检测标准;对果汁样品中Hg2+的检测灵敏度为2.0×10-5 mol/L。因此,本研究为果汁体系中重金属的检测提供了一种新的思路和方法。     

响应面优化可溶态和膜结合态马铃薯多酚氧化酶提取工艺

以大西洋马铃薯为原料,分别用柠檬酸-磷酸盐缓冲液浸提和超声波辅助Tris-HCl缓冲液浸提法提取马铃薯中可溶态(sPPO)和膜结合态(mPPO)多酚氧化酶,以酶比活力为评价指标,在单因素实验基础上,通过响应面对sPPO和mPPO的提取工艺进行优化。结果显示:sPPO最优提取工艺为料液比1:3.2、浸提时间12 h、缓冲液pH7.1,在该条件下测定sPPO比活力平均值为(130.5±2.4) U/mg,三个因素对sPPO提取的影响大小依次为:浸提时间>料液比>缓冲液pH。mPPO最优提取工艺为料液比1:5.2、浸提时间7 h、缓冲液pH6.7,在该条件下测定mPPO比活力平均值为(686.4±7.9) U/mg,三个因素对mPPO提取的影响大小依次为:超声时间>料液比>缓冲液pH。所得响应面模型可以很好地预测和分析sPPO和mPPO提取工艺条件。     

Simultaneous determination of stevioside, rebaudioside A and glycyrrhizic acid in foods by HPLC

A method for the simultaneous determination of stevioside (Stev), rebaudioside A (RebA) and glycyrrhizic acid (GA) in foods was developed. These sweeteners were extracted from foods, except for dried fishes and shellfishes, by dialysis against Tris-HCl buffer (pH 9.0). Dried fishes and shellfishes were extracted with Tris-HCl buffer--methanol (2:8). The extracts were cleaned up with an Oasis MAX cartridge. The cartridge was washed with 0.05 mol/L sodium acetate (pH 4.0)--methanol (19:1), and the three sweeteners were eluted with 0.1 mol/L phosphoric acid--acetonitrile (1:1). Stev, RebA and GA in the eluate were chromatographed on a Develosil RPAQUEOUS-AR-5 (4.6 mm i.d. x 250 mm) column with 0.02 mol/L phosphoric acid-acetonitrile--methanol (90:55:5) as a mobile phase and monitored at 210 nm for Stev and RebA, and at 254 nm for GA. The recoveries of Stev, RebA and GA from 8 kinds of foods spiked at the level of 0.1 g/kg were 81.7-101%, 81.5-100% and 78.6-95.0%, respectively. The determination limits were 0.01 g/kg in samples.     

反胶束法萃取玉米胚芽蛋白及其功能性研究

研究了AOT/异辛烷反胶束法萃取玉米胚芽蛋白及玉米胚芽蛋白的加工功能性。在实验中分别考察了纤维素酶加酶量、AOT浓度、KCl浓度、缓冲液pH值、W0对玉米胚芽蛋白前萃率的影响,以及萃取时间、KCl浓度、缓冲液pH值对后萃率的影响,确定了前萃的最佳技术条件:加酶量为4 000 IU/g玉米胚芽、AOT浓度为3 g/50 mL异辛烷、萃取pH 6、KCl浓度0.1 mol/L、W0为25;后萃的最佳技术条件为:KCl浓度为0.5 mol/L、萃取pH 10.5,萃取时间40 min;对玉米胚芽蛋白的部分加工功能性进行研究,结果表明其吸油性(2.9 mL/g)、乳化性(54.5%)、乳化稳定性(86.5%)以及泡沫稳定性(58.3%)都较好,但吸水性和起泡性相对较差,玉米胚芽蛋白不但营养效价高,而且具有较好的加工功能特性,在食品工业中具有应用潜力。     

牦牛肉组织蛋白酶L提取工艺的优化

为了获得提取牦牛肉中组织蛋白酶L的最佳工艺参数,首先采用Plackett-Burman试验对影响酶活力的7个因素进行筛选,发现浸提缓冲液pH值、L-Cys浓度及(NH4)2SO4饱和度3个因素显著影响酶活力。基于该3个因素的最陡爬坡试验、中心组合设计及响应面分析结果表明:3个因素对酶活力的影响大小依次为浸提缓冲液pH值>(NH4)2SO4饱和度>L-Cys;最佳提取工艺为:浸提缓冲液pH值5.68、L-Cys浓度为6.48 mmol/L、(NH4)2SO4饱和度为76.63%。在此条件下,酶活力最高为13.98 U/mg。试验结果与模型预测值吻合良好,说明所建模型切实可行,为进一步研究牦牛肉组织蛋白酶L的提取工艺提供理论依据。