蛹虫草液体发酵产虫草素研究

以蛹虫草液体发酵菌丝体为原料,通过超声、微波方法提取蛹虫草中的虫草素,超声提取时间为20min;微波功率为200W,微波提取时间为110s,提取得到虫草素结晶体,含量是0.006mg/g.以虫草素为指标,通过正交试验确定蛹虫草液体发酵条件,虫草素含量最高的方案为:接种量15％,温度25℃,转数140r/min,培养时间96h.     

不同谷物培养基质对蛹虫草有效成分的影响

以蛹虫草菌种为材料,高粱、糜子、油莎豆3 种谷物为培养基质,测定谷物蛹虫草菌丝共生体和蛹虫草子实体的主要活性成分,研究不同培养基质对蛹虫草有效成分含量的影响。结果表明,油莎豆培养的蛹虫草菌丝共生体产纤溶酶酶活最高,为312.26 U/g;油莎豆培养的蛹虫草子实体产虫草素含量最高,为7.34 mg/g。高粱培养的蛹虫草子实体麦角甾醇含量最高,为6.10 mg/g;糜子蛹虫草菌丝共生体粗多糖含量最高,为72.5 mg/g。高粱适合作为培养高产麦角甾醇的蛹虫草子实体的培养基质,糜子适合作为培养高产粗多糖的菌丝共生体的培养基质,油莎豆适合作为培养高产虫草素的蛹虫草子实体和高产纤溶酶的菌丝共生体的培养基质。     

不同固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响

通过测定不同固态培养基培养蛹虫草子实体的生长情况,虫草素、虫草酸、虫草多糖含量,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率及2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基清除能力,研究不固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响。结果表明,不同固体培养基培养蛹虫草子实体的活性物质与抗氧化活性差异显著（P＜0.05）,其中小米+麦麸培养基培养蛹虫草子实体的生长情况较佳,出芽时间最快,为12 d,子实体最长,为（6.50±0.15） cm,鲜质量最重,为（8.58±0.07） g,其虫草素和虫草酸含量最高,分别为（6.53±0.06） mg/g和（7.66±0.21） mg/g;薏仁米培养基培养蛹虫草子实体虫草多糖含量最高,为（59.07±1.89） mg/g,薏仁米＋麦麸培养基抗氧化活性最强,DPPH自由基清除率和ABTS自由基清除率分别为（66.84±0.77）%、（68.28±0.26）%。     

微波法提取虫草素研究

对蛹虫草固体培养物中的虫草素进行微波提取,用HPLC法测定提取液中的虫草素含量,通过正交试验,确定了微波提取虫草素的最佳条件为:提取液用量10ml,固液比1:200,中火处理3min,样品中虫草素的测定值达12.16mg/g。本法提取时间仅为超声波提取的1/40,且提取率高于超声波提取。     

HPLC法同时测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇的含量

建立一种利用高效液相色谱法同时测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇含量的方法,并对沈阳、广东、江苏3个产地的蛹虫草进行测定结果的比较。结果表明,虫草素、腺苷和麦角甾醇分别在5μg/mL～65μg/mL、5μg/mL～35μg/mL和25μg/mL～300μg/mL范围内线性关系良好,江苏的虫草素含量最高,为1.3 mg/g,广东的含量最低,为0.5 mg/g,广东的腺苷和麦角甾醇含量最高分别为1.9、5.8 mg/g。不同产地蛹虫草中的腺苷、虫草素和麦角甾醇的含量差异较大;该方法准确性高,重复性好,适用于蛹虫草中腺苷、虫草素和麦角甾醇的含量测定,为其质量评价提供参考。     

虫草枸杞复合发酵工艺研究

在蛹虫草液体培养过程中加入枸杞汁,进行虫草枸杞复合发酵,对发酵过程中虫草菌生长曲线及发酵产物有效成分含量进行了测定。确定了虫草枸杞复合发酵最佳工艺条件为:蛹虫草发酵72 h时向培养基中添加5 g/L的枸杞匀浆液,发酵周期144 h。在此工艺条件下,复合发酵产物产量较虫草菌丝体升高了112.12%,达11.73 g/L。其中虫草素含量11.23 mg/g,虫草酸含量178.21 mg/g,多糖含量30.73 mg/g,较虫草菌丝体分别提高了29.98%,64.46%和97.20%。复合发酵产物抗氧化能力较虫草菌丝体升高了44.62%。     

不同产地蛹虫草鲜干品核苷类含量测定

运用液相色谱法分别对山东、安徽、云南、湖北四种产地和烘干、冻干、新鲜三种加工后的蛹虫草中腺苷、虫草素、N-6-2羟乙基腺苷进行比较,考察不同地区、不同加工方法的蛹虫草核苷物质含量及种类差别,以期找到蛹虫草的较好来源及其加工方法。结果表明:热水提取法的效果明显比超声提取法好。云南产地蛹虫草中腺苷、虫草素、N-6-2羟乙基腺苷含量最高,分别为0.19,0.21和0.24 mg/g。新鲜蛹虫草超声水提后腺苷、虫草素、N-6-2羟乙基腺苷含量明显要比冻干、烘干含量高。     

冬虫夏草与蛹虫草中虫草素和总糖含量测定

建立高效液相色谱法测定冬虫夏草与蛹虫草中虫草素含量的方法,比较不同产地冬虫夏草和蛹虫草中虫草素和总糖的含量。以水为溶剂超声波提取、高效液相色谱法测定虫草素含量;苯酚-硫酸法测定总糖含量。结果显示冬虫夏草中没有检出虫草素,而不同产地的蛹虫草中虫草素含量有一定区别,含量分别为1.39%、0.48%、0.11%;总糖含量是蛹虫草高于冬虫夏草,其中不同产地的冬草夏草总糖含量没有差别,而不同产地的蛹虫草总糖含量相差较大,分别为14.69%、20.61%、34.33%。     

虫草素的微波- 超声波协同提取

研究蛹虫草菌丝体中虫草素的提取工艺及检测方法。确定微波- 超声波协同提取法为虫草素提取的最佳方法,依据单因素和正交试验获得最佳的提取工艺：乙醇体积分数70%、提取功率200W、提取时间110s、料液比1:240(g/mL)。此时虫草素含量达9.228mg/g。采用紫外分光光度法测定样品中虫草素含量,回收率为97.41%～99.60%,RSD 为1.469%,准确度和精密度都较高,是一种方便、成本较低的检测方法。     

杂粮蛹虫草菌丝共生体中虫草素的优化提取及测定

目的:探讨杂粮蛹虫草菌丝共生体中虫草素的最优提取条件,并比较了不同光照时长对虫草素含量的影响,为其工艺条件的优化和综合利用提供依据。方法:采用单因素结合响应曲面法优化虫草素的水浴提取条件,高效液相色谱法测定虫草素含量。结果:最优水浴提取条件为:浸提时间6.59 h、浸提温度81.9℃、料液比1∶90,此条件下虫草素含量为6.0143 mg/g;不同光照时长条件下虫草素含量为3.8988~11.9629 mg/g,不同光照时长间差异具有统计学意义(p=0.000)。结论:实验确定了虫草素水浴提取的最优条件,并得出不同光照时长对虫草素含量有显著影响,为进一步优化杂粮蛹虫草菌丝共生体的培养条件提供参考依据。     

不同来源北冬虫夏草活性成分差异及其对小鼠免疫功能的影响

目的：探讨不同来源北冬虫夏草主要活性成分的差异,并评价其调节小鼠免疫功能的能力。方法：使用高效液相色谱法测定不同来源北冬虫夏草虫草素和腺苷的含量;通过测定小鼠免疫器官指数以及碳廓清实验和脾淋巴细胞增殖实验研究其对小鼠免疫功能的影响。结果：虫草素含量由高到低依次为蚕蛹虫草3.68 mg/g、小麦虫草2.86 mg/g、大米虫草2.63 mg/g、头状虫草0.95 mg/g;腺苷含量由高到低依次为蚕蛹虫草1.11 mg/g、小麦虫草0.79 mg/g 、头状虫草0.64 mg/g、大米虫草0.094 mg/g。碳廓清指数和脾淋巴细胞增殖能力研究结果表明4 种虫草均有提高小鼠免疫活性的功效,与空白组相比差异极显著,蚕蛹虫草和小麦虫草功效最佳;饲喂4 种虫草的小鼠免疫器官指数与空白组相比差异显著。结论：不同来源北冬虫夏草的虫草素和腺苷含量有所差异,蚕蛹虫草和小麦虫含量最高,其提高小鼠免疫功能的能力也最强。     

固体培养蛹虫草核苷类次生代谢物的产率

为提高固体培养蛹虫草核苷类代谢物的产率，用高效液相色谱法对培养物的虫草素和腺苷含量进行检测，从菌株、氮源、氮源水平、加水量、培养时间和光照等方面进行研究，在以20％豆粉为氮源、按1：1加营养液、接种Cm-2菌株、遮光培养35d的条件下，培养物的虫草素含量可达5．49mg／g，高于蛹虫草全草，为保健食品增加了新品种和新原料。     

高产虫草酸蛹虫草菌株的分离鉴定及培养条件优化

该研究以蛹虫草子实体为研究对象,采用组织分离法从中分离纯化高产虫草酸的蛹虫草菌株,通过分子生物学技术对其进行鉴定,并以虫草酸含量为响应值,利用单因素试验和响应面法对其培养条件进行优化。结果表明,分离得到一株高产虫草酸的菌株YCC-1,并被鉴定为蛹草拟青霉（Paecilomyces militaris）,菌株YCC-1产虫草酸的最佳培养条件为接种量7.8%、初始pH值6.0、培养温度25 ℃、转速140 r/min。在此最优条件下,虫草酸含量为132.65 mg/g,较优化前提高22.86%,为蛹虫草菌株液体发酵培养生产虫草酸提供试验依据。     

大孔吸附树脂分离纯化蛹虫草固体培养基中虫草素工艺

比较D101、AB-8、HPD-100、HPD-400、HPD-500、HPD-722、DM130七种大孔吸附树脂对蛹虫草固体培养基中虫草素的吸附与解吸性能,筛选出HPD-100树脂为最佳树脂,并确定HPD-100树脂吸附分离最佳工艺条件：上样液质量浓度0.6mg/mL、上样流速3BV/h、上样体积6BV;解吸剂为体积分数25%乙醇溶液、解吸流速2BV/h、解吸体积4BV。根据此工艺条件,蛹虫草固体培养基粗提物经HPD-100树脂纯化后,虫草素产品纯度可达14.1%,较粗提物产品提高了8倍多。     

冬虫夏草与蛹虫草融合株的原生质体诱变育种

以冬虫夏草与蛹虫草融合株为研究材料,对其原生质体进行紫外诱变,筛选优质高产的新型菌株。得到了高产菌株Y-90,虫草酸产量是出发菌株的1.80 倍,高产菌株YP-42,虫草素产量是出发菌株的1.33 倍。采用随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD）分子标记技术和核糖体rDNA内部转录间隔区（internaltranscribed spacer,ITS）序列分析技术对突变株的遗传变异情况进行分析。结果表明突变株的ITS序列并没有发生变化。RAPD结果显示突变株的扩增片段与亲本菌株不同,说明发生了基因突变,其高产性状是可遗传的性状,可以将其用于进一步的育种研究。     

蚕虫草与有关虫草活性成分检测比较

通过测定蚕虫草、蚕蛹草和冬虫夏草的腺苷、虫草素、虫草多糖和虫草酸,发现以家蚕为寄主的蚕虫草,虫草素的含量高达12.59mg/g,是同一菌种蚕蛹草的4.45倍,同时虫草多糖是蚕蛹草的2.68倍;与冬虫夏草相比,除虫草素是其数百倍外,腺苷也高达4倍之多,是一种很有开发前景的虫草新资源。     

蛹虫草Cordyceps militaris JN168产虫草素液态发酵条件的优化

利用单因素筛选和响应面法对蛹虫草Cordyceps militaris JN168产虫草素的液态发酵培养基进行优化,以确定蛹虫草产虫草素的最佳发酵培养基配方。结果表明,蛹虫草产虫草素的最佳碳源为葡萄糖,最适质量浓度为40 g/L;最佳氮源为牛肉膏,最适质量浓度15 g/L;加入的无机盐及其添加量分别为MgSO40.76 g/L,K2HPO40.63 g/L,CaCl20.66 g/L,Na2HPO40.67 g/L。优化后发酵液中虫草素质量浓度达到633.47 mg/L,是优化前的6倍。