高效液相色谱法测定南、北五味子中4种木脂素含量

目的：采用高效液相色谱法同时测定17种不同产地的五味子中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素含量。方法：采用Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)柱,甲醇-水(73:27,V/V)作流动相,流速1.0mL/min,检测波长254nm。结果：五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素含量测定方法的线性关系良好,线性范围为0.01～0.08mg/mL,相关系数R2＞0.9990;RSD分别为0.86%、0.37%、0.19%和0.15%。结论：该方法精密度、重现性和分离效果好,分析快速准确,适合于该药材中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素含量的测定;不同产地的4种木脂素成分均存在一定的差别,北五味子中五味子醇甲、五味子醇乙和五味子乙素的含量稍高,而五味子甲素含量却稍低,南五味子恰与之相反。     

五味子藤茎木脂素对小鼠镇静催眠及抗焦虑作用研究

目的:研究五味子藤茎木脂素（Schisandra chinensis vine stem lignans,SSL）的镇静、抗焦虑及催眠作用并初步探讨其作用机制。方法:将150只ICR雄性小鼠平均随机分为5组,分别为空白对照组、SSL低、中、高剂量组和地西泮阳性对照组。采用灌胃给药,每次0.1 mL/10 g,每天一次,连续7 d。应用小鼠自主活动实验观察镇静效果;应用高架十字迷宫、高架零迷宫实验观察抗焦虑作用;通过戊巴比妥钠协同睡眠实验观察催眠作用;用酶联免疫吸附法检测小鼠脑组织中γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid, GABA）、谷氨酸（glutamate, Glu）含量。应用Western blot方法检测小鼠脑组织中GABA_Aα1表达水平。结果:与对照组比,各剂量SSL显著减少小鼠站立次数和活动次数（P<0.01）;中、高剂量SSL显著增加小鼠进入开放臂次数（open arm entry, OE）,开放臂停留时间（open arm time, OT）和开放探头次数（open arm probe, OP）（P<0.05或P<0.01）;各剂量SSL均增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠只数,显著延长阈剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间（P<0.05或P<0.01）,缩短小鼠睡眠潜伏期（P<0.01）;各剂量SSL组小鼠脑组织中GABA含量极显著增加（P<0.01）,而中、高剂量SSL组小鼠脑组织中Glu含量极显著降低（P<0.01）,GABA/Glu极显著增加（P<0.01）。高剂量SSL组小鼠脑组织中GABA_Aα1蛋白表达极显著增加（P<0.01）。结论:SSL对小鼠具有镇静、催眠及抗焦虑作用,其机制可能与其调节其脑组织中GABA及Glu含量及GABA_Aα1受体表达水平有关。     

AB-8大孔树脂分离纯化北五味子藤茎总木脂素的研究

基于紫外分光光度法测定北五味子藤茎总木脂素含量,通过计算6种大孔树脂的吸附率和解析率,筛选出分离纯化总木脂素的最佳树脂为AB-8大孔树脂。研究各工艺因素对吸附和解析效果的影响,得到分离纯化总木脂素的最佳工艺为:总木脂素浓度为1.511 mg/mL时,最大上样量约为6倍柱床体积,洗脱流速1 mL/min,蒸馏水洗脱体积为8倍柱床体积,洗脱剂95%乙醇用量为5倍柱床体积。在此工艺条件下的洗脱率达到78.89%。     

超临界CO2提取五味子木脂素的工艺研究

目的研究超临界CO2流体提取（SFE-CO2）北、南五味子木脂素的工艺。方法以五味子总木脂素提取率为考察指标,以提取压力、提取温度、CO2流量等3项因素设计3个水平进行正交试验设计,确定最佳工艺。用薄层扫描色谱法测定提取物中4种主要木脂素（五味子甲素、五味子乙素、五味子酯甲和五味子醇甲）的含量,并与传统的乙醇提取法比较。结果超临界CO2流体提取五味子木脂素的优选工艺为：提取压力25 MPa,提取温度35℃,CO2流量2 L/min。北、南五味子总木脂素的平均提取率分别为93.2%、95.5%,提取物纯度分别为13.0%、9.2%,北五味子提取物中五味子乙素含量2.89%。结论 SFE-CO2法提取效率高、选择性好、操作简便,明显优于传统的乙醇提取法,可用于提取五味子木脂素。     

超临界CO2提取五味子木脂素的工艺研究

目的 研究超临界CO2流体提取(SFE-CO2)北、南五味子木脂素的工艺.方法 以五味子总木脂素提取率为考察指标,以提取压力、提取温度、CO2流量等3项因素设计3个水平进行正交试验设计,确定最佳工艺.用薄层扫描色谱法测定提取物中4种主要木脂素(五味子甲素、五味子乙素、五味子酯甲和五味子醇甲)的含量,并与传统的乙醇提取法比较.结果 超临界CO2流体提取五味子木脂素的优选工艺为:提取压力25 MPa,提取温度35℃,CO2流量2 L/min.北、南五味子总木脂素的平均提取率分别为93.2%、95.5%,提取物纯度分别为13.0%、9.2%,北五味子提取物中五味子乙素含量2.89%.结论 SFE-CO2法提取效率高、选择性好、操作简便,明显优于传统的乙醇提取法,可用于提取五味子木脂素.     

北五味子中总木脂素类成分的抗氧化及抗炎活性研究

对北五味子中总木脂素类成分进行纯化并研究其抗氧化和抗炎活性。利用大孔吸附树脂纯化五味子总木脂素,采用总抗氧化活性法、超氧阴离子自由基清除率法测定总木脂素类成分的抗氧化活性,应用酶联免疫吸附测试(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)和一氧化氮(NO)试剂盒考察五味子总木脂素类成分对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-10(Interleukinin-10,IL-10)、NO的影响。抗氧化活性研究方面,与同等浓度的VC对照品相比,北五味子总木脂素类成分的总抗氧化能力是维生素C(VC)的1/7左右,清除超氧阴离子自由基的强度是VC的1/6左右,说明其具有良好的抗氧化活性。抗炎活性研究方面,北五味子总木脂素类成分可显著促进小鼠巨噬细胞分泌IL-10,抑制TNF-α、NO,说明其具有良好的抗炎活性。北五味子总木脂素类成分具有良好的抗氧化能力和抗炎活性,为进一步研究及开发北五味子提供理论支持。     

乳化剂辅助提取五味子木脂素的研究

采用乙醇水溶液提取五味子果实中的木脂素,添加4种乳化剂:单甘脂、EM、Tween20和Tween80,EM的乳化效果最好。加入EM后辅助提取五味子木脂素,结果表明:EM的适宜添加量是3%,适宜的乙醇浓度是80%,提取两次,木脂素的提取率高达96%,而未加EM的空白对照样,提取两次的提取率只有43%。     

五味子总木脂素的提取纯化

目的提取纯化五味子总木脂素。方法以五味子总木脂素含量为指标,用正交试验筛选五味子的最佳提取工艺,并初步探讨总木脂素的纯化方法。结果五味子总木脂素的最佳提取工艺为：4倍量的75%乙醇回流提取1次,提取时间为2 h;提取物用乙酸乙酯提取。结论总木脂素纯度可提高约10倍。     

基于木脂素生物合成的内生菌发酵五味子研究

采用内生菌发酵法高效生产五味子木脂素成分,通过HPLC法,以4种木脂素成分为对照,筛选出能够提高五味子木脂素的发酵菌株,采用柱色谱法分离纯化发酵五味子中4种主要木脂素成分,并对发酵菌株进行了形态学观察和18SrDNA序列同源性分析。结果表明,内生真菌WJ1能显著提高发酵五味子样品中4种主要木脂素成分,采用柱层析法可分别得到五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素,经鉴定发酵菌株WJ1为黑曲霉(Aspergillus niger),上述研究为生产五味子木脂素成分奠定了基础。     

五味子木脂素对大肠杆菌的抑菌机理及效果

研究了五味子中的抗菌成分木脂素对食品中常见致病菌大肠杆菌的抑制作用及抑菌机理。采用牛津杯法测定抑菌圈直径、倍比稀释法测定最低抑菌浓度,评价了木脂素对大肠杆菌的抑菌效果;并通过测定微生物的生长曲线、电导率、耗糖率及扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)图来推测、观察抑菌机理。结果表明:木脂素对大肠杆菌有明显的抑制作用,抑菌圈直径达27 mm,最低抑菌质量浓度为6.25 mg/m L;生长曲线的结果表明,木脂素可抑制大肠杆菌对数期的生长;电导率和耗糖率的测定及扫描电镜表明,其抑菌机理之一是破坏了细菌细胞膜的平滑形态,内容物大量流出,造成代谢紊乱,影响对糖类等营养物质的吸收,从而发挥抗菌抑菌作用。     

青北五味子多糖的提取及其抗氧化活性

采用水提醇沉法,通过单因素和正交试验研究青北五味子多糖(polysaccharides from immature Schisandrachinensis(Turcz.)Baill,PIS)的提取工艺,并以VC为参照物,考察脱蛋白前后PIS的抗氧化活性。结果表明:从青北五味子中提取多糖的最适宜工艺条件是料液比1:30(g/mL)、提取温度90℃、提取时间2h、提取3次。用Sevag法对PIS进行初步提纯,UV扫描检测表明去蛋白后PIS中基本不含有蛋白质与核酸。利用红外光谱法对纯化PIS进行表征,证明其具备一般多糖类物质的光谱特征。脱蛋白前后PIS对羟自由基和超氧阴离子自由基均具有一定的清除能力,且脱蛋白后的PIS清除自由基的效果更好,其抑制O2ˉ·和·OH的IC50分别为66.03、6.49mg/mL,说明纯化PIS具有优良的清除OH的能力。但它们的抗氧化活性都不如VC。     

北五味子多糖的分离纯化研究

应用水提醇沉以及除蛋白等方法,从北五味子果实中获得多糖;多糖经DEAE-cellu-lose52后得到SCP-BⅠ、SCP-BⅡ、SCP-BⅢ;经SephadexS-300柱层析和紫外吸收光谱分析证明:3种多糖均为均一多糖。     

气相色谱-质谱法测定北五味子中挥发油成分

采用同时蒸馏浸提的方法提取北五味子中挥发油成分,测得其挥发油的含量为6.30%。利用气相色谱-质谱(GC-MS)联用方法从北五味子挥发油中分离并确认出39种化学成分,用峰面积归一化法通过G1710BA化学站数据处理系统得出各化学成分在挥发油中的相对百分含量,其中主要成分为:衣兰烯、2,6-二甲基-双环[3.1.1]庚-2-烯、3-甲醇,1-甲基-8(1-甲撑)-三环[4.4.0.02,7]脱氢-3-烯。     

北五味子挥发油分离提纯及成分分析

采用超临界二氧化碳萃取装置萃取北五味子原油,并利用3级分子蒸馏装置对原油分离提纯得到北五味子
挥发油,通过气相色谱-质谱联用的方法研究北五味子挥发油中主要成分的组成和含量。结果表明：3级蒸馏装置馏
出物中,1级以龙脑莰醇（43.562%）为主挥发性成分,2级以白菖烯（25.137%）为主挥发性成分,3级轻组分以亚
油酸-2-氯乙酯（20.978%）为主挥发性成分,3级重组分以9,12-十八碳二烯酸（65.835%）为主。     

北五味子总木脂素对C57BL/6小鼠高脂血症的影响

目的：探讨北五味子总木脂素（Schisandra Chinensis lignans,SCL）对高脂饮食诱导的高脂血症小鼠血脂调节的影响。方法：雄性C57BL/6小鼠60 只,随机抽取30 只设为正常对照组（CON）和正常＋SCL 组（CON＋SCL 100 mg/kg）,每组15 只,以普通饲料喂养。其余30 只小鼠以高脂饲料喂养4 周,确定高脂血症小鼠模型建立成功后,将小鼠随机分为模型组和SCL治疗组（模型＋SCL 100 mg/kg）,全部小鼠连续灌胃给药12周后检测血清中总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（lowdensity lipoprotein cholesterol,LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）含量并计算动脉粥样硬化指数（atherosclerosis index,AI）,检测小鼠脂/体比,检测肝组织中TC和TG含量。结果：与正常对照组比较,模型组小鼠血清中TC、TG、LDL-C、AI及脂/体比均显著增高（P＜0.01）,HDL-C含量降低,肝组织中TG和TC含量升高,与模型组比较,SCL 显著降低了小鼠血清TC、TG、LDL-C、AI及脂/体比（P＜0.01或P＜0.05）,升高了HDL-C含量,并降低了肝组织中TC和TG含量（P＜0.01）。结论：SCL 可以减轻高脂血症小鼠脂肪含量,对小鼠高脂血症具有一定的治疗作用。     

北五味子乙素体外抗氧化及抑菌作用的研究

对北五味子乙素进行抗氧化及体外抑菌实验。结果表明:北五味子乙素对自由基的清除效果明显,其中对.OH清除作用大于相同浓度的VC,其半数清除浓度为0.2mg.mL-1;对O2-.清除作用小于VC,其半数清除浓度为0.24mg.mL-1。北五味子乙素提取液对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、沙门氏菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均有一定的抑制作用,其中对白色念珠菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,最低抑菌浓度为0.25mg.mL-1,对根霉、黑曲霉、南阳酵母无明显抑菌活性。     

北五味子叶多糖的提取及抑菌活性

采用水提醇沉法,通过单因素和正交试验研究北五味子叶多糖(polysaccharides from Schisandra chinensis
(Turcz.) Baill leaves,PSL)的提取工艺,并考察PSL对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用。结果表明：PSL最适宜提取工艺条件为料液比1:45(g/mL)、提取温度90℃、提取时间1h、提取2次。在此条件下,PSL的提取率为9.08%。用Sevag法对PSL进行初步提纯,用UV光谱检测脱蛋白效果,发现该法不能有效去除其所含的蛋白质,而且经Sevag法处理后的PSL色泽变黑。同时,利用红外光谱法对PSL进行表征,证明其具备一般多糖类物质及肽键的光谱特征,说明该多糖可能是以共价键与含肽键的蛋白质或多肽结合的糖复合物。抑菌实验结果表明,PSL对3种细菌具有一定的抑制活性。