丹磺酰氯柱前衍生发芽糙米中γ-氨基丁酸的HPLC分析

建立一种准确快速的丹磺酰氯(Dansyl-Cl)柱前衍生紫外检测反相高效液相色谱测定发芽糙米中γ-氨基丁酸(GABA)含量的方法。色谱柱为intertsil ODS-C18柱,梯度洗脱,紫外吸收波长为386 nm,线性方程为Y=7358070X+8842.82692,R2=0.9993,方法的线性范围为0.005~0.1mg/mL,检出限为3.461 ng,峰面积的RSD为1.51%,回收率范围为98.62%~101.29%。该方法易于操作,回收率和精密度高。用该方法测定了20种发芽糙米中GABA含量[22.68~88.36 mg/100g(干重)],结果表明发芽糙米中GABA含量随品种不同而异,其中中嘉早17、浙福802明显高于其他品种,故在实际生产中可尝试作为发芽糙米副产品的原料。     

HPLC法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸含量

建立一种发芽糙米中γ-氨基丁酸含量的高效液相色谱测定法。采用AQC(6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯)为柱前衍生试剂,色谱柱为WatersAccQ·Tag氨基酸分析柱,梯度洗脱,紫外检测波长248.0nm。γ-氨基丁酸的线性范围在0.10～1.0μmol/ml,线性关系良好,线性方程为Y=3.0×106X-7877.6,r=0.9999,回收率为99.0%～100.5%。该方法易于操作、稳定、灵敏、准确。用该方法测定了16种发芽糙米,结果显示其发芽后的含量均显著高于未发芽糙米中的γ-氨基丁酸含量。     

反相高效液相色谱法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸的含量

建立了一种测定发芽糙米中γ-氨基丁酸含量的反相高效液相色谱法.采用2,4-二硝基氟苯柱前衍生,色谱柱为Wa-tera Sunfire C18,梯度洗脱,检测波长为360 nm.在最适条件下,γ-氨基丁酸的线性检测范围为0.01～0.25 mg/ml,线性关系良好,回收率为99.28%～100.36%.该方法易于操作、稳定、灵敏、准确.用该方法测定发芽前后糙米中GABA的含量,结果显示:糙米中的γ-氨基丁酸由5.01 ms/100 g提高到35.03 mg/100 g.     

基于柱后衍生发芽糙米中γ-氨基丁酸HPLC检测方法的建立及应用

建立了一种能与17种常见氨基酸分离的发芽糙米中γ-氨基丁酸的检测方法,即采用Hypercarb column色谱柱,以邻苯二甲醛作为衍生试剂进行柱后衍生,检测波长为338 nm,γ-氨基丁酸的定量线性范围为0.2～50 mg/L,线性方程为A=0.304 3C+0.065 3,相关系数R2为0.999 9。确定了发芽糙米中γ-氨基丁酸的提取条件,发芽糙米经20%甲醇-水提取后,用1.0%甲酸稀释,进样检测,回收率可达97.7%。按照上述提取与检测方法,对不同种糙米制品中γ-氨基丁酸含量进行了测定,发芽糙米中γ-氨基丁酸含量明显高于普通糙米,发芽糙米经高温挤压与模拟蒸煮处理后,其γ-氨基丁酸含量均无明显变化。     

发芽糙米中γ-氨基丁酸的HPLC分析方法

以2,4-二硝基氟苯为衍生试剂,以0.05mol/L乙酸钠缓冲液(pH6.5,含10mLN,N-二甲基甲酰胺)和50%乙腈为流动相,建立了发芽糙米中γ-氨基丁酸含量的高效液相色谱分析方法,色谱柱为SB-C18,梯度洗脱,紫外检测波长为360nm。γ-氨基丁酸的线性范围在10～250mg/L,峰面积与浓度之间线性关系良好,线性方程为Y=225.53095X-0.660345,R2=0.99956,RSD为0.28%,加标回收率为94.4%～98.2%。该方法操作步骤简单,所用试剂价格低,稳定、准确。     

储藏期对发芽糙米富集γ-氨基丁酸的影响

以早籼稻品种"早944"为对象,测定储藏0～27个月期间,其糙米发芽率、发芽72 h时谷氨酸脱羧酶活力及γ-氨基丁酸的变化,以研究原料储藏期对发芽糙米富集γ-氨基丁酸的影响。结果表明,随着储藏期的延长,发芽率、谷氨酸脱羧酶活力及γ-氨基丁酸含量下降显著(P<0.05),且下降速率加快。糙米发芽率月平均下降速率为2.03%,谷氨酸脱羧酶月平均失活速率为0.09 U/100 g,γ-氨基丁酸含量月平均下降速率为1.10 mg/100 g。经相关性分析,发芽糙米中谷氨酸脱羧酶活力与γ-氨基丁酸含量呈极显著正相关(r=0.969 5,P<0.01)。     

富硒发芽糙米中γ-氨基丁酸的测定

本文采用紫外-可见光分光光度法快速测定富硒发芽糙米中γ-氨基丁酸的含量。所制定的标准曲线R2=0.9991;精密度试验RSD=0.68%,测定值之间无显著性差异（P〉95%）;回收率试验得到平均回收率为97.68%。说明结果重现性好,精密度较高,所得数据精确,该方法适合于富硒发芽糙米中γ-氨基丁酸定量分析。     

高效液相色谱法测定发芽麦粒中γ-氨基丁酸(GABA)含量

建立了一种测定发芽麦粒中γ-氨基丁酸(GABA)含量的HPLC方法,并对四川10个小麦品种中GABA含量差异及其发芽培养期间变化规律进行了分析。采用FDNB(2,4-二硝基氟苯)为柱前衍生剂,色谱条件为:色谱柱Luna C18_((2))(150 mm×4.60 mm,5μm),乙腈-0.02 mmol/L乙酸铵混合溶液为流动相(V:V=15:85),柱温30℃,流速1.0 mL/min,测定波长320 nm。结果表明,在0.025 5~0.127 6μg范围内,呈良好的线性关系,最低检出限1.081×10~(-5)μg/mL,方法的平均加标回收率为97%。采用建立的方法测定不同小麦品种在萌发12 h后的GABA含量在0.238~5.26 mg/100 g之间,不同品种间GABA的含量差异显著,在萌发的0~12 h内,GABA含量呈现先上升后下降的趋势,在8 h时含量达到最高。     

HPLC法和Berthelot比色法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸的含量

应用HPLC法和Berthelot比色法对发芽糙米中γ-氨基丁酸含量的测定效果进行对比研究.分别建立了2种γ-氨基丁酸的定量测定方法,利用Berthelot比色法以及HPLC与柱前衍生相结合的方式,对发芽糙米中γ-氨基丁酸含量进行测定.结果表明,HPLC法分离度和重复性好,精密度高,结果准确,适用于发芽糙米中γ-氨基丁酸含量的痕量分析;Berthelot比色法操作简单快速,适用于大批量样品中γ-氨基丁酸含量的测定.     

2,4-二硝基氟苯柱前衍生RT-HPLC法测定γ-氨基丁酸

以富含γ-氨基丁酸(GABA)的大豆胚芽乳、黄酒、有机糙米、绿茶和杨梅为研究对象,采用2,4-二硝基氟苯(FDNB)柱前衍生和等度洗脱,建立一种快速测定γ-氨基丁酸含量的RT-HPLC方法。该方法简便,分析时间短(<7 m in),灵敏度高,稳定性和重现性好。优化后色谱条件如下:HypersilODS2 C18,流动相为乙腈∶水∶磷酸盐缓冲液(pH=7.2,体积比为20∶20∶60),检测波长为360 nm。在最适条件下,γ-氨基丁酸的线性检测范围为0.016~1.000 mg/mL,线性关系良好,回收率为96.5%~104.0%。     

发芽糙米的富硒及其微波干燥与挤压膨化工艺优化

以普通粳稻为原料,探讨了发芽糙米的富硒效果和微波干燥、挤压膨化对富硒发芽糙米营养品质的影响。结果发现,硒质量浓度为10 mg/L时,可以获得较高质量的富硒发芽糙米,此条件下糙米的发芽率为97.9%,有机硒含量为977.6 μg/kg（质量分数98.5%）,γ-氨基丁酸含量为445.9 mg/kg;40 ℃的低温微波干燥有利于保持发芽糙米的硒和γ-氨基丁酸含量;挤压膨化产品中有机硒和γ-氨基丁酸的含量与原糙米相比,分别提高到其29 倍和5 倍。研究认为,亚硒酸钠可以作为富硒试剂实现发芽糙米的有效富硒,富硒发芽糙米可以用于开发相关的营养膨化食品。     

发芽糙米铁生物强化的正交试验优化及其形态分析

研究稻谷品种、铁营养剂、Fe2＋浓度、浸泡温度、浸泡时间、培育温度、培育时间对发芽糙米有机铁和γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）含量的影响,优化了糙米发芽过程中有机铁生物强化的生产工艺,并对发芽糙米铁形态进行分析。结果表明,以0.005 mol/L FeSO4溶液为铁营养剂对‘绿旱1号’品种糙米进行铁强化发芽处理时,有机铁和GABA含量显著提高。获得铁强化发芽糙米最优生产工艺条件为：浸泡温度30 ℃、浸泡时间10 h、培育温度32 ℃、培育时间44 h。在此条件下获得的铁强化发芽糙米的有机铁含量为（405.48±9.18）mg/kg,是普通发芽糙米的51 倍, 其中铁主要是与蛋白结合的形态, 占总铁含量的53.74%;GABA含量为（508.04±13.50）mg/kg,是普通发芽糙米的14 倍。     

超声波辅助酶预处理对糙米发芽及发芽糙米理化特性的影响

结合超声波和外源酶对糙米进行预处理,利用中心组合试验模型,以超声温度、超声时间、酶质量浓度3 个因素为自变量,糙米预处理后处理液中总糖含量、糙米发芽率、发芽糙米γ-氨基丁酸（γ-amiobutyric acid,GABA）含量为响应值,设计了三因素三水平的响应面分析试验,并对数据进行拟合和相关性分析。同时研究超声波辅助酶预处理对发芽糙米中GABA含量、总酚含量、内源淀粉酶活力以及发芽糙米糊化黏度、蒸煮后质构特性的影响。结果表明：超声辅助酶预处理的超声温度和超声时间对糙米发芽率和GABA含量均有显著的影响。通过响应面分析,超声波辅助酶预处理超声温度31.21 ℃、超声时间0.71 h、酶质量浓度0.28 g/L时,发芽率最高预测值为91.98%;超声波辅助酶预处理超声温度35.65 ℃、超声时间0.5 h、酶质量浓度0.22 g/L时,GABA含量最高预测值为38.25 mg/100 g。从发芽糙米的理化特性来看,超声波辅助酶预处理有利于GABA的富集,但不利于总酚的积累。超声波辅助酶预处理可以有效地提高内源淀粉酶的活力,相应地降低发芽糙米粉的糊化黏度以及发芽糙米蒸煮后的硬度。     

活性化糙米富集γ-氨基丁酸的雾化液组分优化

通过单因素试验和正交试验,优化了糙米湿润活性化富集γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的雾化液p H值、VB6及Ca Cl2浓度,同时研究了最优条件下活性化糙米谷氨酸脱羧酶活力及主要物质含量变化。结果表明:最优培养条件为雾化液p H 3.5、VB6浓度2 mmol/L和Ca Cl2浓度10 mmol/L;在此条件下,活性化糙米中GABA含量可达7.67 mg/100 g,为原料糙米的2.74倍。随着活性化时间的延长,糙米中游离氨基酸、还原糖含量及谷氨酸脱羧酶活力呈现逐渐增加的趋势,可溶性蛋白及淀粉含量呈现逐渐下降趋势。相关性分析表明,GABA含量与谷氨酸、游离氨基酸、可溶性蛋白含量之间均显著相关。     

玉米籽粒低氧胁迫发芽期间主要生理生化和γ-氨基丁酸含量变化

以玉米籽粒为材料研究低氧胁迫下籽粒发芽过程中主要生理生化和γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)含量变化,筛选出最适富集GABA的玉米品种。结果表明:5个品种玉米籽粒在72 h低氧胁迫发芽期间,芽长增长15.5~26.3 mm,呼吸强度提高1.7~3.2倍,干物质损失35.6%~40.6%,淀粉消耗15.5%~28.9%,还原糖和游离氨基酸含量分别增加1.7~4.7倍和7.4~13.3倍,GABA含量提高9.3~13.2倍,不同品种玉米籽粒发芽能力和GABA富集量呈显著差异,以京甜紫花糯(ZHN)品种发芽率最高,达到85.5%,且GABA富集量达到0.65mg/g(以干质量计),ZHN是富集GABA的最适玉米品种。低氧胁迫下发芽玉米中GABA含量与芽长、呼吸强度、游离氨基酸呈极显著正相关(P0.01),玉米经低氧胁迫发芽能提升玉米营养品质。     

未熟粒糙米低氧胁迫发芽期间生理生化变化研究

以未熟粒糙米为试材,研究其低氧胁迫发芽期间主要生理生化变化。结果表明：经低氧胁迫发芽48 h,未熟粒糙米的发芽率达79.3%,芽长为1.92 mm,呼吸强度提高5.6 倍,容重达0.79 g/mL;发芽期间其含水量快速增加后趋于平缓,淀粉含量持续下降,还原糖和游离氨基酸含量则逐渐增加,均与完熟粒糙米变化趋势一致且无显著性差异;未熟粒糙米中γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）含量随发芽时间延长呈逐渐增加趋势,发芽48 h时GABA含量增加1.08 倍,且谷氨酸脱羧酶（glutamate decarboxylase,GAD）活力和谷氨酸（glutamic acid,Glu）含量与对照组无显著差异。低氧胁迫下未熟粒发芽糙米中GABA含量与芽长、呼吸强度、游离氨基酸和GAD活力均呈极显著正相关（P＜0.01）,与淀粉和谷氨酸含量呈极显著负相关（P＜0.01）。低氧胁迫发芽改善了未熟粒糙米营养品质,是富集GABA的良好原料。     

发芽糙米焙炒过程中品质变化研究

为研究焙炒过程中发芽糙米品质的变化,将发芽糙米分别进行轻度、中度和强度焙炒,测定其主要成分、色泽和挥发性风味物质的变化。结果表明：3 种焙炒程度的发芽糙米中的还原糖、可溶性蛋白含量均显著低于未焙炒（P＜0.05）但三者之间差异不显著（P＞0.05）,γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）含量随焙炒程度增加而显著降低（P＜0.05）,强度焙炒的发芽糙米总酚显著高于其他两种焙炒（P＜0.05）。焙炒后直链淀粉和抗性淀粉含量均增加但3 种焙炒程度差异不显著（P＞0.05）。焙炒对总淀粉含量的变化影响不明显。a*、b*和ΔE值随焙炒程度增强逐渐增加,而L*值逐渐降低。采用顶空固相微萃取和气相色谱-质谱联用对未焙炒及不同焙炒程度发芽糙米风味物质进行提取、鉴定与分析,发现吡嗪和呋喃类物质种类和含量均显著增加（P＜0.05）。发芽糙米轻度焙炒GABA含量损失最少,且对焙烤香气起主要贡献的吡嗪类物质含量最高,达到焙炒增香目的,因此轻度焙炒较为适宜发芽糙米焙炒加工。     

PITC柱前衍生-反相高效液相色谱法测定黄酒中游离氨基酸和生物胺

建立柱前衍生-反相高效液相色谱,同时测定黄酒中17 种氨基酸及7 种生物胺含量的方法。采用异硫氰酸苯酯柱前衍生试剂,采用Inertsil ODS-SP C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）分析,以乙酸钠溶液和乙腈溶液混合液进行梯度洗脱,在254 nm波长处进行氨基酸和生物胺的含量分析。氨基酸和生物胺在2.0～500 mg/L和0.5～125 mg/L范围内具有良好的线性关系,相关系数R2大于0.99,平均回收率在86.44%～99.75%之间,相对标准偏差在0.31%～3.53%之间;检出限为0.02～0.25 mg/L,定量限为0.25～4.50 mg/L。方法线性范围广、准确性高、稳定性好,适用于黄酒中氨基酸及生物胺的检测。     

富硒发芽糙米蛋白的抗氧化活性

采用碱提酸沉法提取了糙米和富硒发芽糙米中的蛋白,对其抗氧化活性进行分析测定,并与对照品芦丁和VC进行了比较。结果表明：富硒发芽糙米蛋白的总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率、超氧阴离子自由基（O2－·）清除率和还原力低于芦丁和VC,氧化自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity,ORAC）显著低于芦丁（P＜0.05）,但是显著高于糙米蛋白（P＜0.05）;富硒发芽糙米蛋白的羟自由基（·OH）清除能力与芦丁和VC相当,但显著高于糙米蛋白（P＜0.05）。富硒发芽后的糙米蛋白抗氧化能力显著提高。