落地生根对小鼠免疫功能的影响

目的: 探讨中药落地生根对小鼠免疫功能的影响。方法: 用落地生根水浸出液给小鼠灌胃, 检测小鼠脾淋巴细胞增殖和IL-2 的产生及骨髓细胞的增殖反应。结果: 高剂量落地生根( 8 mg·kg^-1, ig), 能显著增强脾淋巴细胞增殖反应, 与生理盐水对照组比较有非常显著性差异( P <0. 01); 对细胞因子IL-2 的产生也有促进作用, 与生理盐水对照组比较有显著性差异( P <0. 05) 。但对骨髓细胞增殖无明显影响, 低剂量落地生根( 5 g·kg^-1, ig) 对以上指标均无明显影响。结论: 落地生根可以增强小鼠的免疫功能。     

大豆异黄酮对YAC-1 细胞和小鼠ESC艾氏肉瘤生长的抑制作用

目的 观察大豆异黄酮对YAC-1 细胞及小鼠ESC艾氏肉瘤生长的抑制作用及对免疫功能的影响。方法 用MT T 法测定大豆异黄酮对YAC-1 细胞生长的抑制率和小鼠淋巴细胞转化刺激指数;LDH 释放法测定小鼠NK 细胞活性;称重观察肿瘤生长和脾指数和胸腺指数。结果 金雀异黄素和大豆甙元剂量依赖性抑制YAC-1 细胞生长, 并随时间延长作用增强;大豆异黄酮50、100、400 mg·kg^-1 灌胃给药均明显升高雌性小鼠脾指数和淋巴细胞转化的刺激指数, 对雄性小鼠则无明显作用;大豆异黄酮100、400 mg·kg^-1 明显抑制小鼠ESC 艾氏肉瘤生长, 同时50、100、400 mg·kg^-1 均降低异常增高的脾指数, 增加NK 细胞活性。结论 大豆异黄酮明显抑制YAC-1 细胞和小鼠ESC 艾氏肉瘤的生长,同时增强非特异性免疫功能, 并可增强正常雌性小鼠免疫功能。     

不同来源的抗乙肝免疫核糖核酸对慢性乙型肝炎患者的免疫调节作用1

目的 探讨HBV 感染后乙肝保护抗体抗-HBs 产生机体外周淋巴细胞iRNA (h-iRNA)对慢性乙型肝炎的免疫调节作用,并与目前单用HBsAg 免疫动物来源的抗乙肝iRNA(a-iRNA)相比较。方法 利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察h-iRNA对慢性乙肝患者外周淋巴细胞HBV抗原特异增殖反应的影响。结果 在HBsAg刺激组中,h-iRNA、a-iRNA 对慢性乙肝患者外周HBsAg特异淋巴细胞增殖反应皆有一定程度的增强作用;但HBcAg刺激组中,h-iRNA对慢性乙肝患者HBcAg特异淋巴细胞增殖反应具有增强作用,与a-iRNA相比,差异有显著性意义。结论 HBV感染后保护抗体产生机体外周淋巴细胞iRNA 具有增强慢性乙型肝炎患者淋巴细胞对HBV 抗原的特异增殖反应,对主要靶抗原HBcAg 特异淋巴细胞增殖反应的增强作用,有利于清除肝内HBV。目前单用HBsAg 免疫动物的抗乙肝iRNA,不具有对HBV 其它抗原的免疫信息,尤其是不能对免疫细胞识别肝细胞内HBV 的主要靶抗原HBcAg 产生有效免疫作用,可能是影响其疗效的重要原因。     

巨噬细胞移动抑制因子siRNA对肺泡上皮细胞Toll样受体及其下游信号转导通路的影响

目的: 研究巨噬细胞移动抑制因子siRNA对脂多糖刺激的肺泡上皮细胞Toll样受体(TLR)及其下游信号转导通路的影响和作用机制。方法: 用LPS刺激A549细胞,脂质体法分别将巨噬细胞移动抑制因子(MIF) siRNA和非特异性siRNA加入A549细胞进行干预。RT-PCR法检测MIF和TLR2、TLR4 mRNA的表达,Western Blot法分析TLR下游信号转导通路元件髓样分化因子88(MyD88)和干扰素调节因子3(IRF3)蛋白表达,细胞免疫荧光法观察NF-κB核迁移,ELISA法测定细胞培养上清炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6,免疫介质IFN-β分泌水平。结果: MIF siRNA对LPS刺激诱导的MIF和TLR2、TLR4 mRNA高表达有显著的下调作用和部分阻断NF-κB(p65)核迁移。LPS刺激诱导后,MIF siRNA显著降低MyD88蛋白表达和炎症介质TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平,但MIF siRNA对IRF3蛋白表达和免疫介质IFN-β分泌水平无影响。结论: MIF siRNA能抑制A549细胞的炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6过度分泌,其机制可能是MIF siRNA降低了LPS刺激A549细胞诱导的MIF和TLR2、TLR4高表达,及阻断TLR下游信号转导通路元件MyD88和NF-κB核迁移。     

罗红霉素对小鼠接触性皮炎及 T 细胞功能的影响

目的: 研究罗红霉素对接触性皮炎及 T 细胞功能的影响。方法: 使用 2, 4, 6-三硝基氯苯诱导小鼠接触性皮炎, 以双向混合淋巴细胞反应及刀豆蛋白诱导脾 T 细胞增殖, MTT 法检测活细胞数量。采用 RT-PCR 方法检测细胞因子 mRNA 表达。结果: 20mg°kg^-1 罗红霉素效应相灌胃给药明显抑制 2, 4,6-三硝基氯苯诱导的小鼠接触性皮炎(P<0.01)。25μg°ml^-1 罗红霉素显著降低双向混合淋巴细胞反应(P<0.05), 5、25μg°ml^-1 罗红霉素明显抑制刀豆蛋白诱导的脾细胞存活、增殖(P<0.05, P <0.01)及T-bet 、IL-2 及 IFN-γ的mRNA 表达。结论: 罗红霉素能抑制 2, 4, 6-三硝基氯苯诱导的接触性皮炎, 可能与其抑制T 淋巴细胞存活 、活化及增殖有关。     

p42/44 MAPK 激酶抑制剂增强二烯丙基二硫化物诱导CNE2 细胞凋亡

目的: 探讨二烯丙基二硫化物(DADS) 诱导CNE2 细胞凋亡及p42/44 MAPK 信号转导通路对此过程的作用。方法: DADS 处理CNE2 细胞24 h 后, 荧光显微镜下观察形态学变化及凋亡细胞计数, 四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法测定细胞活性, 流式细胞仪检测凋亡细胞, 蛋白质印迹法检测磷酸化p42/44MAPK 表达。结果: DADS(50 ～ 150 μmol·L^-1) 作用24 h 后, 诱导CNE2 细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化(核浓染核碎裂), 流式细胞仪结果显示, 随着DADS 给药浓度增加, 细胞凋亡率呈浓度依赖性逐渐升高, 细胞周期中各期细胞所占百分率的变化无规律, DADS(50 ～ 150 μmol·L^-1 ) 浓度依赖性刺激磷酸化p42/44 MAPK 的表达, p42/44 MAPK 抑制剂U0126 显著增强DADS 致凋亡作用。结论: DADS 诱导CNE2 细胞凋亡时激活磷酸化p42/44 MAPK 表达, 磷酸化p42/44 MAPK 抑制剂能增强DADS 诱导CNE2 细胞凋亡效应。     

棕榈酸对C2C12细胞Toll样受体及其炎症因子表达的影响

目的: 探讨棕榈酸(PA)刺激对C2C12细胞Toll样受体(TLRs)及其炎症因子表达的影响,初步分析TLRs介导的免疫性炎症与胰岛素抵抗(IR)的关系。方法: 不同浓度PA与C2C12细胞体外共培养 16 h,测定细胞葡萄糖消耗量以确定IR细胞模型成型情况。荧光定量PCR法测定IR细胞TLR1~5 mRNA表达情况,ELISA法测定细胞培养液中炎症因子TNF-α、IFN-β的含量。结果: PA刺激能明显降低C2C12细胞的葡萄糖消耗量,表现为IR。PA并可诱导C2C12细胞TLR2、TLR4 mRNA 高表达,使TNF-α、IFN-β分泌增加,而对TLR1、TLR3、TLR5 mRNA表达无明显影响。结论: TLR2、TLR4信号转导通路及其启动的炎症反应可能参与了PA诱导IR形成的病理过程。     

Ca2+/CaM-CaN 途径参与神经肽Y 诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的: 探讨Ca²⁺ CaM 依赖的钙调神经磷酸酶(CaN) 途径在神经肽Y(NPY) 诱导心肌细胞肥大中的作用。方法: 用NPY (10、100 nmol·L^-1) 刺激WISTAR 乳鼠心肌细胞, 并用CaN 特异性抑制剂环胞霉素A 加以干预。应用3H-Leu 掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率, 用免疫印迹(Western-blot) 和组织化学法分别测定心肌细胞内CaN-α蛋白表达和CaN 酶的活性。结果: 较高浓度NPY(100 nmol·L^-1) 可明显增加心肌细胞3H-Leu 掺入量(P < 0.05), 加入CsA 可阻断上述效应;NPY(100 nmol·L^-1) 还可明显增加心肌细胞内CaN 酶比活性(P <0.05), 并刺激心肌细胞CaN-α蛋白表达(P <0.05) 。结论: NPY 可活化大鼠心肌细胞Ca²⁺CaM-CaN 途径, 而CaN 特异性抑制剂环胞霉素A 可抑制NPY 诱导的心肌肥大, 说明Ca²⁺ CaM 依赖的钙调神经磷酸酶(CaN) 途径参与神经肽Y 诱导的心肌细胞肥大效应。     

补肾延寿胶囊的免疫药理作用

目的 研究补肾延寿胶囊对免疫 系统功能的影响。方法 采用小鼠碳粒廓清、 植物血凝素(PHA)刺激淋巴细胞转化、血清溶血素含量、迅发型超敏反应等实验。结果 补肾廷寿胶囊能显著增强正常小鼠单核细胞吞噬功能和PHA刺激的淋巴细胞转化,明显增加氢化泼尼松所致免疫功能低下小鼠的脾、胸腺指数和血清溶血素含量,对小鼠迟发型超敏反应也有一定抑制作用。结论 补肾延寿胶囊有免疫调节作用。     

阿司匹林抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞MMP-9表达及机制研究

目的: 探讨阿司匹林对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的表达及其机制研究。方法: MTT法检测LPS诱导RAW264.7细胞作用下,阿司匹林对细胞毒性的影响。Q-RT- PCR检测MMP-9 mRNA表达,免疫蛋白印迹法(western blot)检测MMP-9、p38MAPK及磷酸化p38(Phospho-p38,P-p38)蛋白表达。特异性抑制剂SB203580(SB)阻断p38MAPK通路后,分别应用Q-RT-PCR和Western blot检测MMP-9的基因和蛋白表达。结果: 阿司匹林呈剂量依赖性抑制MMP-9基因和蛋白表达。与LPS组相比,阿司匹林可明显抑制P-p38MAPK蛋白的表达,而p38MAPK总蛋白无明显变化。抑制p38MAPK通路后,MMP-9 mRNA和蛋白水平均明显下调。结论: 阿司匹林抑制LPS诱导RAW264.7细胞中MMP-9表达可能与抑制p38MAPK信号转导通路有关,进而发挥其抗AS药理作用。     

KATP通道开放剂吡那地尔对兔肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的: 研究吡那地尔(pinacidil, Pin) 对内皮素-1(ET-1) 诱导培养的兔肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响。方法: 内皮素-1 刺激培养兔PASMC 增殖模型;以氚-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR) 掺入法观察细胞增殖及脱氧核糖核苷酸(DNA) 合成;流式细胞仪技术检测兔PASMC 细胞周期。结果: 吡那地尔可剂量依赖性的抑制内皮素-1 所致的[³H]-TdR 掺入量增多, 阻止兔PASMC 由静止期(G₀/G₁ 期) 进入DNA 合成期(S 期) 和有丝分裂期(G₂/M 期) 。ATP敏感性钾通道(K_ATP) 阻断剂格列本脲可拮抗吡那地尔对[³H]-TdR 掺入的抑制作用。结论: 吡那地尔可能通过激活K_ATP通道抑制内皮素-1 诱导兔肺动脉平滑肌细胞的增殖, 可望用于治疗肺动脉高压时所致的肺动脉重构。     

舒咽灵软胶囊的抗炎、抗菌和免疫调节作用

目的 研究舒咽灵软胶囊的抗炎、抗菌和免疫调节作用, 为其临床应用提供药效学基础。 方法 采用小鼠耳片肿胀法和大鼠松节油气囊肉芽增生法,观察舒咽灵软胶囊的抗炎作用;通过体内、体外抗菌试验, 观察抗菌作用。此外, 通过观察对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响, 对小鼠抗体形成细胞的影响,以及对白细细胞吞噬功能的影响, 确定其免疫调理作用。 结果 在体外, 舒咽灵软胶囊对16 种细菌均有程度不同的抑菌作用及杀菌作用, 且该药对球菌作用优于杆菌;在体内, 对金葡菌及伤寒杆菌感染的小鼠均具有保护作用;还能程度不同地增强小鼠的中性粒细胞吞噬功能、促进脾脏抗体形成细胞活性及促进小鼠脾T 细胞及B 细胞的转化能力;对小鼠及大鼠急慢性炎症均有抑制作用。 结论 舒咽灵软胶囊具有抗炎、抗菌及免疫调节作用。     

川芎嗪对脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞间粘附因子-1 表达的影响

目的:探讨川芎嗪对脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞间粘附因子-1 表达的影响。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞, 经脂多糖诱导后, 分别应用噻唑蓝(MTT) 比色法和流式细胞术检测细胞增殖抑制率和细胞周期的变化, 应用免疫细胞化学法检测细胞表面细胞间粘附因子-1 的表达。结果:川芎嗪呈剂量依赖性的抑制系膜细胞的增殖,并阻止细胞由G₀/G₁ 期进入S 期;使系膜细胞间粘附因子-1 的表达水平明显减少。结论:川芎嗪能抑制大鼠肾小球系膜细胞增殖和降低细胞间粘附因子-1 表达水平。     

不同种类石斛多糖成分对小鼠脾脏免疫功能的影响

目的: 研究不同种属石斛多糖对小鼠免疫功能的调节作用。方法: 培养小鼠脾淋巴细胞,观察不同浓度铁皮石斛、齿瓣石斛、兜唇石斛、晶帽石斛中多糖成分对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;研究口服给药不同剂量石斛多糖,对小鼠碳粒廓清能力、脾脏指数的影响。结果: 齿瓣石斛多糖可以刺激脾淋巴细胞的增殖,增加小鼠碳粒廓清能力和脾脏指数,与铁皮石斛具有类似的作用,而其他种类石斛中的多糖成分的增强免疫活性较差。结论: 齿瓣石斛多糖具有增强脾脏免疫的作用。     

中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究中华眼镜蛇毒F 组分对血管平滑肌细胞增殖的影响。 方法 用体外培养的血管平滑肌细胞, 观察F 组分对20 %小牛血清引起的细胞对氚标胸腺嘧啶核苷酸(H³-TdR) 掺入的影响, 用蛋白质免疫印迹法(Western blotting) 测定F 组分对20 %小牛血清引起的细胞内原癌基因、核增殖抗原(Proliferationcell nuclear antigen, PCNA) 表达的影响。 结果 F 组分呈浓度依赖性抑制20 %小牛血清引起的细胞对H³-TdR 掺入率和细胞内C-myc、PCNA 的表达, 其中30、100 mg·L^-1给药组与对照组比较有显著差异(P <0.05)。 结论 中华眼镜蛇毒F 组分通过影响细胞内原癌基因C-myc、PCNA 的表达, 抑制血管平滑肌细胞的增殖。     

苦参素对实验性肝癌PCNA、cyclinD1、CDK4 表达的影响

目的: 研究苦参素对2-乙酰氨基芴(2-AAF)诱发大鼠实验性肝癌的防治作用, 并探讨其抑制肝癌细胞增殖的机制。方法: 以2-AAF 喂饲SD 大鼠制备肝癌模型。给予不同剂量的苦参素腹腔注射,观察肿瘤生成状况;免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(PCNA) 蛋白的表达;RT-PCR 检测细胞周期素D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4) mRNA的表达。结果: 苦参素各防治组大鼠肝表面癌结节数明显低于模型组, 预防组肝表面结节数最少。苦参素各预防治疗组PCNA 和cyclinD1、CDK4 的表达显著低于模型组(P <0.01) 。结论: 苦参素有预防或延缓2-AAF 诱发大鼠肝癌发生的作用, 其机制可能通过抑制cyclin D1、CDK4 mRNA 和PCNA 蛋白的表达, 从而诱导细胞周期阻滞, 抑制肝癌细胞过度增殖。     

硝普钠抑制K562 细胞增殖并诱导细胞凋亡的实验研究

目的: 观察外源性一氧化氮(NO) 供体硝普钠对K562 细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡作用。方法: 将不同浓度的硝普钠与K562 细胞在体外培养, 观察其作用时间效应和剂量效应;用活细胞计数、MTT 法观察硝普钠对K562 细胞增殖的抑制作用;用DNA凝胶电泳、DNA 含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和DNA 片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。同时设高铁氰化钾(PFC) 对照组和空白对照组。结果: NO 能抑制K562 细胞生长, 并在一定的剂量范围内呈现作用时间和剂量的量效关系, 大部分细胞阻滞于G₀/G₁ 期;K562 细胞与硝普钠作用后出现典型的细胞形态改变, DNA 片断化, 亚G₁ 峰检出并显著增加, Annexin V/PI 和DNA 片段原位末端标记表达增加等均证实NO 能诱导K562 细胞凋亡。而对照组并无此类变化。结论: NO 通过阻滞G₀/G₁期细胞显著抑制K562 细胞的增殖, 并有很强的致凋亡作用。     

冬凌草甲素通过PI3K/Akt通路诱导MDA-MB-231细胞的凋亡

目的: 研究冬凌草甲素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖产生的影响,初步探讨其作用机理。方法: 体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用6、12、24 μmol/L 冬凌草甲素对其进行处理,采用倒置显微镜进行细胞形态学观察,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白procaspase-3、PARP及Akt、p-Akt、p-GSK3β表达的变化。结果: 冬凌草甲素作用MDA-MB-231细胞24 h后,可观察到细胞凋亡的形态学改变,以24 μmol/L组最为明显。实验组与对照组相比,细胞存活率显著降低、凋亡率显著升高(P<0.01),具有时间和剂量依赖性,凋亡相关蛋白procaspase-3下调,caspase-3底物PARP被逐步剪切,并伴随p-Akt、p-GSK3β蛋白水平下调(P<0.05)。结论: 冬凌草甲素可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,诱导其凋亡,机制与PI3K/Akt通路的抑制有关。