黄孢原毛平革菌培养合成木素过氧化物酶研究

对限氮培养基在氧环境下培养黄孢原毛平革菌（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）合成木素过氧化物酶的条件进行了研究．在摇瓶培养中,较大的菌丝球和较小的通氧强度将延迟酶的合成．在１７５ｒ／ｍｉｎ的转速下,用聚氨酯泡沫固定化培养,木素过氧化物酶的最高酶活比游离菌丝球培养提高一倍．在用限碳培养基培养时发现,空气环境中本菌株能够合成木素过氧化物酶．加入苯甲醇作诱导剂,可以提高酶活近一倍,效果接近藜芦醇．空气环境下用酒石酸作缓冲液,固定化摇瓶限碳培养,最高酶活达１８０Ｕ／Ｌ．     

白腐菌产木素过氧化物酶发酵条件的优化

在静置和振荡两种培养条件下研究营养条件对白腐菌合成木素过氧化物酶(1igninperoxidase，LiP)的影响。静置培养时，LiP在碳氮比(C／N)低的培养基中显示较高的酶活力，碳源以葡萄糖(0．02％)和糊精(0．18％)同时存在及分段加入要比单一葡萄糖作为碳源时获得更高的酶活；振荡培养时，在碳氮比高的培养基中LiP酶活最高，而类似于静置培养的氮源组合及分段模式却明显地抑制了LiP的合成。优化后，静置培养在第6天可获得7560U／L的酶活；振荡培养在第8天获得6500U／L的酶活。发酵液中LiP酶活力与菌体分泌的其同功酶的数量成一定的对应关系。     

木质素降解菌的分离筛选及菌丝成球条件优化

为分离筛选出能高效降解木质素的丝状真菌,构建生物固定化载体,从造纸厂采集的污泥中分离筛选出一株高产木质素降解酶的真菌G-13,其产锰过氧化物酶、漆酶和木质素过氧化物酶的活力分别为8.27、0.95和13.55 U/L。通过对菌丝成球影响因素的研究,得到最佳成球条件:18 g/L的蔗糖和2.5 g/L酒石酸铵分别为最佳碳源和氮源,培养基的pH值为5,将5 mL菌悬液接种于100 mL成球液体培养基(250 mL锥形瓶)中,160 r/min,30℃培养72 h,得到的菌丝球球径最大,约为3.4 mm,且表面光滑,弹性好,内部中空,是一种优良的生物固定化载体,能够满足实践应用的需求。     

霉菌Y3菌丝球培养条件的优化

为找到一种菌丝球培养的快捷、经济的系统方法,以用于工程上菌丝球的批量生产,通过对环境因子的逐一筛选,进而对菌丝球的培养条件进行优化.结果表明:在孢子龄20～26d、接种量104个/L、培养温度37℃、培养基初始pH为5、摇床转速160r/min、CaCl2质量分数0.02%、无表面活性剂(tween80)的条件下,形成的菌丝球综合性能最佳,对中性黄的脱色效果最好,达99%以上.同时,对菌丝碎片作为菌丝球传代手段的可行性研究证明,菌丝球在1800r/min粉碎机中粉碎30s,所形成的菌丝碎片碎度最佳.     

α－乙基－２－氧－１－吡咯烷乙酸乙酯水解酶产生 菌发酵培养基的响应面优化

对耐酪氨酸冢村氏菌（Ｔｓｕｋａｍｕｒｅｌｌａ　ｔｙｒｏｓｉｎｏｓｏｌｖｅｎｓ）Ｅ１０５菌株生物拆分外消旋体α－乙基－２－ 氧－１－吡咯烷乙酸乙酯制备左乙拉西坦关键手性中间体（Ｓ）－α－乙基－２－氧－１－吡咯烷乙酸的发酵培养 基进行优化,以提高其产酶活力．首先考察了碳源和氮源对菌种产酶活力的影响,并通过Ｐｌａｃｋｅｔｔ－ Ｂｕｒｍａｎ实验得出影响该菌株产水解酶的最主要因素为酵母粉质量浓度和初始ｐＨ 值．继而采用中 心组合实验并结合响应面分析优化发酵培养基组成,确定了最佳的酵母粉质量浓度为１２．１ｇ／Ｌ, 最佳的初始ｐＨ 值为７．０６．在优化的条件下酶活力可达１　０２４．６Ｕ／ｍＬ,较优化前提高了６７％,表 明采用响应面法优化发酵培养基组成是提高该菌株产酶活力的有效途径之一．     

可降解木质纤维素的双菌共生菌丝球的制备

以共固定化菌丝球的产酶能力作为指标,将木质素降解菌G-13和纤维素降解菌X10-1-2进行共固定,探讨了X10-1-2的接入时间、接种量、pH值、摇床的转速和温度对菌丝成球和产木质纤维素酶的影响。结果表明,当G-13与X10-1-2同时接入、纤维素降解菌的接种量为20 mL(100mL培养基),培养基的pH值为5、摇床转速为160 r/min、温度为28℃时,锰过氧化物酶、漆酶、木质素过氧化物酶、纤维素酶和半纤维素酶的酶活达到最高,分别为31.246 U/L、16.048 U/L、157.528U/L、197.063 U/L和215.81 U/L。X10-1-2与G-13在共固定过程中,具有互补的性能,在产酶的过程中发挥了协同的作用,促进了木质素降解酶的分泌。所获得的双菌共生菌丝球的球体为白色,表面光滑,大小均匀,具有一定的机械强度,能够满足实践应用的需求。     

云芝菌丝球在流化床反应器中产漆酶的研究

为了提高云芝菌发酵生产漆酶的效率，提出了一种利用自絮凝菌丝球在流化床生物反应器中重复分批发酵产漆酶的新方法.采用流化床生物反应器中所得漆酶对含靛蓝的染整废水进行脱色研究.在优化后的产酶条件下，考察苯酚的添加浓度对漆酶活力的影响，并通过在培养基中添加苯酚诱导物进行漆酶多批次培养.研究结果表明，重复8批产酶的平均漆酶活力高达694.733 单位/mL.此方法所得漆酶对染料靛蓝具有明显的脱色降解作用，当酶用量为2.78 单位/mL废水，反应40min,脱色率达96.5%.该方法采用的流化床生物反应器性能稳定、菌丝球可重复使用，该方法有利于漆酶的高效、规模化生产.     

K氏酵母与清酒酵母产孢率的研究及原生质体制备

本文考察了Ｋ氏酿酒酵母（ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＫ）与清酒酵母ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｓａｋｅＹａｂｅ的最适产孢前培养条件与最适产孢培养条件，以及二者原生质体的制备条件，并对二者的融合进行了初步的研究，试验表明：二供试菌经产孢前培养基Ⅱ和１号产孢培养基培养可获得较高产孢率；并且最适产孢温度为２８℃；用２％蜗牛酶于３１℃酶解３ｈｒ，可除去子囊壁，收集原生质体；用４％蜗牛酶，３３℃酶解２－３ｈｒ，制备原生质体；进一步试验表明，Ｋ氏酿酒酵母与清洒酵母可以进行原生质体融合，且得到一融合子Ｆ＿１．     

黏质沙雷氏菌产舍雷肽酶的发酵培养基优化

舍雷肽酶具有出色的酪蛋白水解和溶纤活性,临床被应用于多种疾病的治疗或辅助治疗。为 了提高黏质沙雷氏菌（Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）发酵产舍雷肽酶的活力,优化了产酶培养基组成及其初始ｐＨ 和培养时间。首先,通过单因素实验确定了发酵培养基的主要成分;然后,采用响应面分析法优化了麦芽浸粉、酵母浸粉和牛肉膏的质量浓度;最后,考察培养基初始ｐＨ 和培养时间对产酶活力的影响。实验结果表明：较佳的培养基组成为麦芽浸粉１１．９ｇ／Ｌ、酵母浸粉１１．３ｇ／Ｌ、牛肉膏６．４５ｇ／Ｌ、 ＭｎＳＯ４１ｇ／Ｌ、ＺｎＳＯ４１ｇ／Ｌ、Ｋ２ＨＰＯ４５ｇ／Ｌ和 ＮａＣｌ５ｇ／Ｌ,初始ｐＨ８．０;在３０℃,２００ｒ／ｍｉｎ条件 下培养３６ｈ,舍雷肽酶活力达到１１２１Ｕ／ｍＬ,较优化前的２２９．３Ｕ／ｍＬ提高了３．８９倍。优良的产 酶培养基为发酵生产舍雷肽酶的工业化应用打下了基础。     

双歧杆菌耐氧发酵菌株制剂的研究(Ⅰ)——耐氧型双歧杆菌的分离和特性鉴定

从母乳喂养健康婴儿粪便中分离获得一株双歧杆菌菌株,经进一步耐氧驯育获得较稳定的耐氧型菌株。经形态学和生理生化鉴定该菌属于青春双歧杆菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｄｏｌｅｓｃｅｎｔ）。试验结果表明该菌株有一定的耐酸能力和耐热能力。其适宜培养条件为：Ｂｒｉｇｇｅｓ培养基,３７℃,起始ｐＨ６．０～７０。     

海因酶产生菌的反应条件研究

利用恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)作为酶源,研究海因酶催化DL-对羟基苯海因合成N-氨基甲酰-D-对羟基苯甘氨酸,以制备D-对羟基苯甘氨酸,并就培养基的优化,反应条件的选择及酶活的影响作了探讨.研究表明,碱性条件下可显著增加酶反应速度,温度对提高海因酶活力有重要影响.培养初始pH值为7.0,温度28℃下培养24 h产海因酶达最高;在最适pH9.0和最适温度55℃下,海因酶活力达到0.7 u/mL,比原基础培养条件下提高3.5倍.     

一株里氏木霉产纤维素酶的条件及酶系的优化

对一株里氏木霉突变株液体发酵产纤维素酶的培养条件进行了优化,确定培养基的最适碳源和氮源种类及添加量(g/L)分别为:小麦秸秆15,小麦麸皮5,尿素10～15,(NH4)2SO412,NH4NO35;最适培养条件为:接种种龄72h,接种孢子悬液浓度2×107个/mL,培养温度30～32℃,pH值5 0,培养时间144h,摇瓶转速180r/min,装液量75mL/250mL三角瓶.在培养里氏木霉的培养基中同时接种黑曲霉(二者孢子数比为60∶1)进行混合培养,β 葡萄糖苷酶的产量是对照试验的2 9倍,明显改善了纤维素酶系的比例,提高了它们之间的协同作用效果,在最适培养条件下,粗酶液的β 葡萄糖苷糖活和FPA酶活分别达到127 6U/mL和84 8U/mL.     

纤维素降解菌的筛选及其降解特性的研究

在自然环境和秸秆降解物中筛选出3种分解纤维素能力较强的木霉、青霉和曲霉，将3种菌株以不同的组合形式在羧甲基纤维素钠为唯一碳源的产酶培养基中进行产酶特性的研究，计算其对玉米秸秆粉中粗纤维的利用率并观测玉米秸秆粉的降解状态。其中木霉与青霉的混合培养在纤维素筛选培养基上培养24h后即可生长，在发酵培养基中培养72h后达到产酶高峰，酶活可达3．116u，对粗纤维的利用率为68％，远超过青霉和木霉的单独培养；木霉与曲霉二者混合，木霉与青霉、曲霉三者混合培养的产酶效果也要超出青霉和曲霉的单独培养，但与木霉相比无明显差异。实验结果表明优良菌株的混合培养会增加其对纤维素的降解能力，为实际生产中有效的处理农作物秸秆提供了理论依据。     

产甘油假丝酵母胞浆3—磷酸甘油脱氢酶在甘油形成中的作用

为了研究胞浆３－磷酸甘油脱氢酶（ｃｔＧＰＤ，ＥＣ１．１．１．８）在产甘油丝酵母（ＣａｎｄｉｄａｇｌｙｃｅｒｏｌｇｅｎｅｓｉｓＺｈｕｇｅ）甘油合成机制中的作用，考察了发酵实验过程中ｃｔＧＰＤ的活力水平以及高渗环境对该酶酶活水平和甘油形成的影响，结果表明，该菌种ｃｔＧＰＤ的表达在相对低渗的发酵过程中处于一个较高的水平，并在３６ｈ和６０ｈ处分别出现两次峰值；高渗环境可使ｃｔＧＰＤ酶活增加，但幅度不大，发     

提高供氧能力对土曲霉生产衣康酸的影响

研究了提高供氧能力对土曲霉ＩＦＯ－６３６５分批发酵生产衣康酸产酸能力的影响，当通风比为０．５，搅拌叶轮末端线速度为１２５．７ｃｍ／ｓ时的最大衣康酸发酵产率分别比叶轮末端线速度为９４．２ｃｍ／ｓ和７８．５ｃｍ／ｓ高出１．２８倍和３倍，当添加氧载体－正十二烷，叶轮末端线速度为７８．５ｃｍ／ｓ时，与对照相比，可提高产酸１４％，但在高叶轮末端线速度条件下，加入正十二烷，只能促进菌体的生长，对发酵产酸呈抑制     

对哈茨木霉转化子菌体形态观察及抗药性测定

为深入了解木霉转化子的抗药性，对哈茨木霉及其转化子在PDA培养基上进行平板点植培养和小室培养，其菌体形态于40倍显镜镜下观察，结果显示，转化子的菌落形、菌丝形状、菌丝横隔间隔、孢子颜色、产孢数量均发生一定变化。对传代3年转化子抗药性的测定结果表明，哈茨木霉野生菌在多菌灵质量浓度度为1.0μg/mL时不能生长，而其转化子在多菌灵质量浓度高达1000.0μg/mL时仍能正常生长，说明此转化仍具抗药性且抗药性稳定。     

绿色木霉(Trichoderma viride)867产壳聚糖酶的发酵工艺条件的优化

系统研究了碳源、氮源、初始pH、培养温度、培养基装液量、接种量和培养时间等因素对绿色木霉867产壳聚糖酶的影响.结果表明,最佳碳、氮源分别为可溶性壳聚糖和蛋白胨,在初始pH5.0,培养温度28℃,培养基装量75 mL/250 mL,接种量6%和培养时间(180 r/min)40 h时最利于产酶.在此基础上通过均匀设计法优化了发酵培养基配方.优化后的培养基配方为:可溶性壳聚糖0.9%,氨基葡萄糖0.5%,蛋白胨0.9%,K2HPO40.016%,CaCl2.2H2O 0.055%.在该条件下,壳聚糖酶活为0.291 u/mL,比原基础培养条件下酶活提高29.9%.     

提高供氧能力对土曲霉生产衣康酸的影响

本文研究了供氧能力对土曲霉ＩＦＯ－６３６５分批发酵生产衣康酸能力的影响。当通风比为０．５Ｖ．Ｖ．ｍ．搅拌叶轮末端线速率为１２５．７ｃｍ／ｓ时的最大衣康酸发酵产率分别是叶轮末端线速度为９４．２ｃｍ／ｓ和７８．５ｃｍ／ｓ的１．２８倍和３倍；当添加氧载体－－正二十烷，叶轮末端线速度为７８．５ｃｍ／ｓ时，与对照相比，可提高产酸１４％，但在更高的叶轮末端线速度条件下，加入正二十烷，只能促进菌体的生长，对发酵     

同时培养法与吸附法微生物固定化对比

为寻找一种适用于菌丝球生物质载体高效、快捷的微生物固定化方法,分别采用同时培养法和吸附法将高效苯胺降解细菌JH-9固定于黑曲霉菌Y3形成的生物质载体菌丝球上,并对两种微生物固定化方法所形成的混合菌丝球的特性和内部结构进行对比．结果表明:在接种细菌数量相同的条件下,同时培养法固定化细菌所用的时间缩短,且在单位时间内固定的细菌数量更多．同时培养法形成的混合菌丝球堆积体积更大,成球总数量更多,球体直径较小,总质量和总相对密度也较小．当采用同一种固定化方法时,混合菌丝球的堆积体积、成球大小与功能菌的接种量成正比;而形成混合菌丝球的总质量和总相对密度却与功能菌的接种量成反比．同时培养法形成的混合菌丝球内部细菌非常均匀地排列生长在每一根菌丝上．     

吸附树脂对紫草细胞培养生产紫草色素的原位提取

紫草（Ｌｉｔｈｏｓｐｅｒｍｕｎｅｒｙｔｈｒｏｒｈｉｚｏｎ）细胞在Ｍ－９培养基中培养时产生红色萘醌类化合物，实验表明，若在培养液中加入ＨＤ－１树脂，使色素和细胞产量下降，而Ｒ－Ａ树脂的加入却促进色素的合成和分泌，培养４ｄ的悬浮细胞中加入３０ｇ／ＬＲ－Ａ树脂，可使色素产量提高２倍，此外，还比较了原位提取和非原位提取体系细胞对在碳源蔗糖的利用。