谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及酶学性质的研究

对灰轮丝链轮丝菌ZC60所产生的谷氨酰胺转胺酶采用(NH4)2SO4盐析、透析脱盐、冷冻浓缩和SephadexG-100凝胶过滤层析进行纯化,经SDS-PAGE检测,样品达到电泳级纯。对冷冻浓缩后得到的粗酶的酶学性质进行研究,得到该酶的最适反应温度为50℃,最适pH为7.0;酶的温度稳定范围为0～50℃,pH稳定范围为6.0～7.5;K+、Na+、Ca2+、Ba2+、Mg2+对MTG的活性几乎没有影响,而Pb2+,Cu2+抑制酶活。     

谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及酶学性质的研究

对灰轮丝链轮丝菌ZC60所产生的谷氨酰胺转胺酶采用（NH4）2SO4盐析、透析脱盐、冷冻浓缩和SephadexG-100凝胶过滤层析进行纯化,经SDS-PAGE检测,样品达到电泳级纯。对冷冻浓缩后得到的粗酶的酶学性质进行研究,得到该酶的最适反应温度为50℃,最适pH为7.0;酶的温度稳定范围为0～50℃,pH稳定范围为6.0～7.5;K+、Na+、Ca2+、Ba2+、Mg2+对MTG的活性几乎没有影响,而Pb2+,Cu2+抑制酶活。      

谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及酶学性质

茂原链轮丝菌Streptoverticilliummobaraense所产生的谷氨酰胺转胺酶发酵液通过抽滤、超滤、乙醇沉淀、离心和冷冻干燥,制得粗酶粉的酶活约为1033U/g.对粗酶研究发现,该酶的最适反应温度为52℃,最适pH为6.0;粗酶的pH稳定范围在4～8,温度稳定范围在20～40℃,离子强度对该酶的活性稍有影响.粗酶经CM 纤维素层析和SephadexG 75凝胶过滤层析后得到较纯的酶,通过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检验蛋白质纯度,得到较弱的单一区带.其中,CM 纤维素层析的纯化倍数为4.5,收率质量分数约为78.8%;凝胶过滤层析纯化倍数为1.11,收率质量分数为50%;用凝胶过滤法测得谷氨酰胺转胺酶的相对分子质量为40092.     

草鱼中内源性转谷氨酰胺酶特性的研究

以草鱼为试验材料,测定不同条件下草鱼中内源性转谷氨酰胺酶(TGase)的活性。结果表明,草鱼糜中的TGase在pH8～9,25～45℃时表现出较高的活性,钙离子能激发其活性,DTT在低浓度(0～1mmol/L)范围时能增加它的活性,而NH4Cl、EDTA及一些金属离子抑制TGase的活性。     

Streptomyces hygroscopicus谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及其性质研究

将新筛选的吸水链霉菌生产的谷氨酰胺转胺酶发酵液抽滤、盐析、离心和冷冻干燥,制得粗酶产品,酶的比活力为5 4 0U/ g ,收率为77 90 %。对粗酶的研究发现,在2 5～4 0℃、pH 6 0～8 0范围内,该酶都有较高的反应活性和稳定性。粗酶经离子交换层析后得到了较高的纯化,纯化倍数为13 1倍,收率6 3% ;再经凝胶过滤层析,酶纯化了1 14倍,收率6 5 % ;经SDS -PAGE电泳检测,得到了单一的区带,根据电泳标准分子量计算,该酶的相对分子质量约为38 32 4ku。     

硝基还原假单胞菌谷氨酰胺酶的分离纯化及酶学性质

采用离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,分离纯化硝基还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens)SK16.004所产的谷氨酰胺酶,并进一步研究该酶的酶学性质及反应动力学参数。结果表明,该酶的最适反应温度为55℃,最适pH为9.0,温度稳定范围为37～60℃,pH稳定范围为5.0～11.0;Cu2+对促进酶活提高作用最大,而Fe3+会抑制该酶的转移活力。谷氨酰胺酶对底物谷氨酰胺的亲和力最强,其Km值为0.72 mmol/L,Vmax为0.55μmol/(min.mL)。     

转谷氨酰胺酶交联酶晶体的制备及其酶学性质研究

对转谷氨酰胺酶晶体进行了交联,研究了交联酶的基本酶学性质。结果表明,交联后,酶的耐高温性增强,在酸性、碱性条件下均比原酶更稳定,具有明显抵抗Fe3+、Zn2+及Cu2+的能力,而Ca2+、Mg2+及Ba2+对交联酶晶体没有明显的影响,在有机溶剂中的酶活力损失较小。与游离酶相比较,交联酶晶体在常温下贮存15d后的酶活力保留80%以上,远远地大于游离酶的剩余酶活。      

转谷氨酰胺酶交联酶晶体的制备及其酶学性质研究

对转谷氨酰胺酶晶体进行了交联,研究了交联酶的基本酶学性质。结果表明,交联后,酶的耐高温性增强,在酸性、碱性条件下均比原酶更稳定,具有明显抵抗Fe3＋、Zn2＋及Cu2＋的能力,而Ca2＋、Mg2＋及Ba2＋对交联酶晶体没有明显的影响,在有机溶剂中的酶活力损失较小。与游离酶相比较,交联酶晶体在常温下贮存15d后的酶活力保留80%以上,远远地大于游离酶的剩余酶活。     

转谷氨酰胺酶改性大豆分离蛋白条件研究

利用微生物转谷氨酰胺酶(MTGase)对大豆分离蛋白(SPI)进行改性,探讨pH、反应温度、反应时间、底物浓度、酶/蛋白质比对SPI改性影响,采用正交试验优化改性条件。结果显示,酶/蛋白质比和底物浓度对SPI改性影响较小;pH、温度和时间对该改性作用影响较大,该3种因素对SPI改性影响大小依次为pH、温度和时间;MTGase改性SPI的最佳条件为pH 5.5、温度55℃、时间30 min、底物浓度2.0%、酶/蛋白质比10 U/g。     

冻藏对鲢鱼、鲤鱼鱼肉质构影响的比较研究

比较冻藏处理对鲢鱼、鲤鱼鱼肉质质构的影响.采用质构仪对冻藏的鲢鱼、鲤鱼鱼肉进行测定,并与未经冻结的鱼肉指标值进行比较.结果表明,经过冻结的鲤鱼、鲢鱼的硬度、弹性、黏附性、咀嚼性、恢复性等指标值均有所下降,下降幅度不同,与鲤鱼相比较,鲢鱼质构变化明显.     

白鲢鱼肌肉脂肪氧合酶提取条件优化及酶学性质研究

本文以白鲢鱼肌肉为原料,通过单因素实验对白鲢鱼肌肉脂肪氧合酶(LOX)提取条件进行优化;用圆二色谱法和荧光光谱法对其贮藏稳定性、热稳定性、最适p H进行研究;探讨磷酸盐缓冲液p H、离子强度、二硫苏糖醇(DTT)和乙二胺四乙酸(EDTA)添加量对白鲢鱼肌肉LOX提取工艺的影响。结果表明,白鲢鱼肌肉LOX适宜提取条件为磷酸盐缓冲液p H7.8、离子强度50 mmol/L、EDTA和DTT添加量均为2 mmol/L,在此条件下提取白鲢鱼肌肉LOX的酶液浓度为(1.98±0.037)mg/m L,活力为(244.44±5.93)U。通过对LOX酶学性质研究可知,白鲢鱼肌肉LOX在常温条件下0~2 d内酶活性较为稳定,最适作用温度为40℃,最适p H为7.8。      

黑木耳酪氨酸酶的分离纯化与酶学性质研究

本文分离纯化了黑木耳酪氨酸酶,并对酶学性质进行了研究。采用经硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100和DEAE-Sepharose-FF柱层析对粗酶液进行分离纯化,得到电泳纯的黑木耳酪氨酸酶,比活力提高了21.43倍,酶活回收率为27.41%。该酶的酶学性质研究表明:蛋白亚基分子量为12.62ku;最适pH7.0,在中性和碱性条件下稳定;最适温度为40℃,50℃以下温度条件较为稳定;以酪氨酸为底物,米氏常数K m为5.88mmol/L,V max为64.10μmol/min。实验结果表明黑木耳酪氨酸酶具有其它酪氨酸酶相似的酶学特性。      

小麦面筋蛋白的性质和转谷氨酰胺酶对其成膜性能的影响

以小麦面筋蛋白为研究对象,探讨小麦面筋蛋白的性质,转谷氨酰胺酶的作用和制备条件对膜性能的影响。结果表明,酶用量为20U/g,反应时间为120min,pH为11,甘油/谷朊粉1:2.5,塑料平板作为成膜介质和乙醇体积分数均为40%～50%时,膜的抗拉强度增加51%,阻水性提高23%,透光率提高了5.48倍。扫描电镜显示膜的超微结构更加细致光滑。说明蛋白质的性质对其成膜性能的影响至关重要,酶处理有助于改善膜的机械性能和透光性,选择合理的制备条件,可得到性能优良的小麦面筋蛋白膜。     

鲢鱼复合酶解产物的理化及功能特性研究

采用复合蛋白酶及风味蛋白酶对鲢鱼鱼肉进行复合酶解,通过控制水解时间制得产品SCH1、SCH2、SCH3、SCH4和SCH5,其水解度分别为7.5%、9.4%、10.3%、11.6%、14.6%,考察其分子量、等电点等基本特性,并与酶解前对比考察其持油性、溶解性、起泡性、乳化性等功能性质,同时对其体外抗氧化活性进行研究。结果表明:五种酶解产物的等电点均为p H2左右,重均分子量分布于1000³000 u之间;与酶解前相比,产品溶解性提高57.99%以上,持油性略有降低;乳化性、起泡性均明显增强,酸性环境（p H2）中起泡性最差,而碱性环境（p H10）中乳化性最强;ABTS+·清除率、脂质过氧化抑制率及还原能力均随水解度增大而升高,其中清除率最高达到90.75%。所研发鲢鱼酶解产品既可直接食用,又能作为原辅料应用于食品加工过程,可为鲢鱼精深加工产品研发提供新思路。      

Comparison of gelling properties and flow behaviors of microbial transglutaminase (MTGase) and pectin modified fish gelatin

The gelling and structural properties of microbial transglutaminase (MTGase) and pectin modified fish gelatin were compared to investigate their performances on altering fish gelatin properties. Our results showed that within a certain concentration, both MTGase and pectin had positive effects on the gelation point, melting point, gel strength, textural, and swelling properties of fish gelatin. Particularly, low pectin content (0.5%, w/v) could give fish gelatin gels the highest values of gel strength, melting temperature, and hardness. Meantime, flow behavior results showed that both MTGase and pectin could increase fish gelatin viscosity without changing its fluid characteristic, but the latter gave fish gelatin higher viscosity. Both MTGase and pectin could increase the lightness of fish gelatin gels but decreases its transparency. More importantly, fluorescence and UV absorbance spectra, particle size distribution, and confocal microscopy results indicated that MTGase and pectin could change the structure of fish gelatin with the formation of large aggregates. Compared with MTGae modified fish gelatin, pectin could endow fish gelatin had similar gel strength, thermal and textural properties to pig skin gelatin.     

坎皮纳斯类芽孢杆菌木聚糖酶的纯化以及酶学性质

采用硫酸铵盐析、Sephadex G-50凝胶过滤、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析对坎皮纳斯类芽孢杆菌（Paenibacillus campinasensis）xy-7发酵液进行分离纯化,获得纯化的木聚糖酶,纯化倍数为26.36,酶活回收率为5.13%。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果为单一条带,分子质量为24.5 ku。酶学性质研究结果表明,该酶的最适反应温度为60 ℃,最适pH值为8.0。K+、Fe2+对酶有激活作用,Zn2+、Cu2+对酶有强烈的抑制作用。以榉木木聚糖为底物时,米氏常数Km=4.733 mg/mL,最大酶反应速率Vm=315.85 μmol/（min·mg）。     

Effect of microbial transglutaminase on the functional properties of megrim (Lepidorhombus boscii) skin gelatin

This paper examines the effect of a microbial transglutaminase (TGase) on the gelling and viscoelastic properties of a gelatin from megrim (Lepidorhombus boscii) skins. Although TGase extended the setting time of fish gelatin, it was found that melting temperature, gel strength and viscosity in solution at 60 °C were considerably increased by the covalent cross‐linking action of the enzyme, as observed by SDS‐PAGE and SEM. Increasing concentrations of TGase increased the elasticity and cohesiveness of gelatin gels but reduced gel strength and hardness. Partial inactivation of the enzyme was achieved thermally without negatively affecting the properties of the gelatin; whether or not gelatin is thermoreversible depends essentially on the degree of enzyme inactivation. © 2001 Society of Chemical Industry