TUV26菌株几丁质酶酶解所产几丁寡糖产物的分析

利用TUV26菌株所产几丁质酶酶解胶体几丁质制备几丁寡糖粗品,所得产品经凝胶过滤层析将未酶解的几丁质或者聚合度较大的几丁多糖与聚合度在5-10的几丁寡糖分离开.对比研究薄层层析法与荧光标记辅助电泳法分离分析几丁寡糖的效果,结果表明该两种方法都可有效应用于几丁寡糖的检测,其中薄层层析法最佳展层剂为乙酸乙酯:异丙醇:水:氨水=5:5:1:0.3体积比.     

微生物几丁质酶研究概况及其在食品工程中的应用

几丁质酶主要产生于微生物,其降解产物应用极其广泛,降解几丁质,产生的氨基寡糖素可调节植物细胞生命代谢活动;产生的N-乙酰几丁寡糖和壳聚几丁寡糖可用作食品添加剂和生长促进因子.另外在抗病基因工程中,对几丁质酶的研究比较多,它在害虫防治中具有增效作用.本文主要就微生物几丁质酶的特点、理化性质、结构和分类,及其在食品工程中的应用展开论述.     

Vibrio natriegens几丁质酶基因的异源表达及酶学性质研究

几丁质是自然界中除纤维素外第二多的多糖聚合物,在几丁质酶的作用下生成的几丁寡糖具有较好的生物活性及应用价值.通过分子生物学手段获得高活性重组几丁质酶,有利于实现虾壳等几丁质资源的高值化利用.对来源于Vibrio natriegens中的几丁质酶基因进行克隆及诱导表达,获得重组几丁质酶VnChit4,然后通过亲和层析对该...     

大肠杆菌表达几丁质酶对不同底物的酶学性质及其降解产物分析

采用重组大肠杆菌大量表达几丁质酶LICHI18A,经Ni-NTA柱纯化后,对不同底物的酶学性质进行了研究,以Lineweaver-Burk双倒数作图法测定米氏常数,采用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对降解产物进行分析。结果表明,该几丁质酶分子量为54 k Da,对水溶性壳聚糖的Km和Vmax分别为4.04 mg/m L和222.2μmol/(min·mg);对水溶性壳聚糖的反应最适温度和p H分别为60℃和7.0;对胶体几丁质的Km和Vmax分别为2.913 mg/m L和2.836μmol/(min·mg),反应最适温度和p H分别为40℃和5.0。Ni2+、Mg2+、Ca2+、Zn2+对胶体几丁质的降解有明显的促进作用,但对水溶性壳聚糖的降解没有促进作用,且Ni2+和Zn2+有一定的抑制作用。Tween-80对降解胶体几丁质起一定的促进作用,而不同浓度的SDS有抑制酶活作用,且浓度越高抑制作用越强。TLC和HPLC分析结果表明,该酶降解胶体几丁质的产物主要为几丁二糖和单糖,而水溶性壳聚糖的降解产物较为复杂,主要有单糖、几丁二糖和甲壳寡糖。     

产几丁质酶菌株的筛选及酶解产物鉴定

几丁质酶是一种专一性降解几丁质的水解酶.在工业上,几丁质酶可用于制备功能性甲壳低聚糖.结合平板透明圈法和摇瓶发酵测酶活力的方法,从土壤中筛选到一株产几丁质酶的菌株L012,酶活力为0.75 IU/mL;采用离子色谱法对菌株L012产几丁质酶的酶解产物进行分析,初步确定产物中有氨基葡萄糖、乙酰氨基葡萄糖以及聚合度小于10的寡糖.     

非特异性酶对改性几丁质的降解能力及其产物分析

由于天然几丁质具有分子质量高,结晶度高,不易酶解的特点,因此其开发和应用受到极大地限制。为了提高几丁质的利用率,筛选具有高降解能力与良好经济效益的商品化非特异性酶,并评价其对经3种改性方法(超微粉碎、高压均质、超微粉碎-高压均质联用)处理的几丁质的酶解效果,确定最佳改性方式,优化酶解工艺,分析酶解产物。结果表明：7种非特异性酶中,木瓜蛋白酶的几丁质降解能力最高,成本最低廉。超微粉碎-高压均质联用法使几丁质具有更高的可降解性。木瓜蛋白酶对几丁质降解的最佳条件：温度50℃,pH 7.0,酶质量浓度10 mg/mL,时间14 h。薄层层析结果显示,在酶解初期(1 h)生成(GlcNAc)_3-6共4种聚合度的几丁寡糖,初步证明木瓜蛋白酶能够断裂几丁质的β-1,4糖苷键。离子色谱分析结果显示,酶解平衡(14 h)后的酶解产物中只有GlcNAc和(GlcNAc)2,质量浓度分别为22.26 mg/mL和58.75 mg/mL。     

强烈炽热球菌几丁质酶水解制备低脱乙酰度壳寡糖及其组成与结构分析

利用全基因合成方法合成了强烈炽热球菌（Pyrococcus furiosus）的几丁质酶编码基因并在大肠杆菌（Escherichia coli）中实现了可溶表达。利用该酶对低脱乙酰度壳聚糖进行水解并对获得的壳寡糖产物进行组成及结构分析。分子排阻高效液相色谱结果显示,水解产物相对分子质量分布范围为1?000～5?000。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析结果显示,酶解产物中包含聚合度2～9、不同脱乙酰度的壳寡糖。核磁共振对酶解产物壳寡糖的结构鉴定结果显示,所有寡糖组分的还原端均主要由两个连续的N-乙酰氨基葡萄糖组成。综上,本研究利用来源于强烈炽热球菌的几丁质酶制备了还原末端结构确定的低脱乙酰度壳寡糖,为复杂结构壳寡糖结构与功能关系研究提供了理论支持。     

酶法制备硫酸软骨素寡糖及其抗氧化活性

采用硫酸软骨素酶对硫酸软骨素进行酶法降解,制备硫酸软骨素寡糖。通过红外分析降解前后的硫酸软骨素以及利用质谱技术对该酶解产物进行分析,并检测酶解前后硫酸软骨素的DPPH自由基的清除能力、羟自由基清除能力和还原能力。结果显示,酶法降解硫酸软骨素对其基本结构影响不大,质谱分析结果表明,该酶解产物是二糖和四糖。抗氧化活性实验表明,硫酸软骨素寡糖对DPPH自由基、羟自由基的清除能力及其还原能力均高于硫酸软骨素。推测其可能是由于硫酸软骨素降解成硫酸软骨素寡糖后,分子量的减小、不饱和双键的形成以及还原糖的含量增加使得其活性增加。     

酶法制备魔芋甘露寡糖和产物分析

利用β-甘露聚糖酶水解20％魔芋粗粉制备魔芋甘露寡糖并对其产物进行成分分析.在工艺研究中对反应的pH值、温度、酶添加量、时间等进行单因素试验,确定最佳工艺条件为酶添加量为250IU/g,pH值6.5,45℃条件下,酶解50min,寡糖得率为35％.魔芋甘露寡糖的粗产物经硅胶薄层层析(TLC)分离表明,三糖、四糖含量较大.     

新型β-甘露聚糖酶制备葡甘寡糖工艺优化

为探索能应用于葡甘寡糖制备的新型β-甘露聚糖酶,利用半纤维素降解高效菌株Bacillus subtilis BE-91高产的β-甘露聚糖酶水解魔芋胶(纯度95%)。在单因素试验的基础上,采用四因素三水平的正交试验优化魔芋胶酶解工艺条件,薄层层析法定性分析酶解产物。结果表明:正交试验的最佳酶解工艺组合为魔芋胶质量浓度0.33 g/100 m L、加酶量6 U/g、酶解时间1 h、酶解温度60℃,在该条件下魔芋胶水解率为35.96%;β-甘露聚糖酶水解魔芋胶产物为二糖以上的寡糖,且主要介于二糖与六糖之间。该新型β-甘露聚糖酶用于葡甘寡糖制备,其工艺具有加酶量少、酶解时间短、产品纯度高等优势,在功能性食品制备方面具有广阔的应用前景。