酶转化三七茎叶总皂苷制备稀有人参皂苷C-K

为了提高三七茎叶总皂苷的利用率和C-K酶转化得率,采用Aspergillus niger sp. G8菌所产酶与Aspergillus niger sp. G4菌所产酶的等体积混合酶(以下简称G8-G4混合酶),研究了酶转化三七茎叶总皂苷进而制备C-K的方法。结果表明,市销的三七茎叶总皂苷中,主要成分是人参二醇类皂苷,其中含量最多的皂苷是Rb3、C-Mx1、Rc和Fc,质量分数分别为26. 38%、14. 28%、12. 73%、10. 25%。G8-G4混合酶的最佳反应条件为45℃、p H 5. 0、底物质量浓度25 g/L、反应24 h。三七茎叶总皂苷经G8-G4混合酶转化后得到4种产物为C-K、C-Mx、Fc、R7,其中C-K的转化得率为32. 7%。     

原人参三醇组皂苷酶解产物对高脂模型小鼠的降血脂作用

通过建立高血脂症小鼠模型来研究原人参三醇组皂苷酶解产物对小鼠降血脂的作用。将雄性小鼠随机分为空白对照组、高脂模型组、阳性对照组、原人参三醇组皂苷组与原人参三醇组皂苷酶解产物低剂量10 mg/(kg BW·d)、中剂量20 mg/(kg BW·d)、高剂量30 mg/(kg BW·d)组,喂养30 d后测定小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量,以及血清中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果表明,原人参三醇组皂苷酶解产物中剂量组可使高脂血症小鼠血清中TC含量、LDL-C含量显著降低(P<0.05),TG含量极显著降低(P<0.01),HDL-C含量极显著升高(P<0.01)。与原人参三醇组皂苷相比,原人参三醇组皂苷酶解产物,具有明显的降血脂作用。这也为其在降脂医药保健食品上的应用打下坚实的理论基础。     

原人参二醇组皂苷酶解产物抗2型糖尿病作用

通过建立四氧嘧啶糖尿病小鼠模型来研究原人参二醇组皂苷酶解产物(PPDEP)对2型糖尿病小鼠的治疗效果。结果表明：PPDEP可使糖耐量、血糖和MDA含量降低以及SOD活性、体重和INS含量提高；与PPD相比，PPDEP治疗糖尿病效果显著，其中中剂量组与阳性对照组差别不大。     

三七叶总皂苷对慢性应激抑郁大鼠行为学及海马体cAMP、PKA、BDNF的影响

本文研究了三七叶总皂苷的抗抑郁作用及其作用机制。40只大鼠随机分成空白组、模型组、氟西汀组和三七叶总皂苷中高剂量组,建立慢性应激抑郁大鼠模型评价三七叶总皂苷的抗抑郁活性以及对海马体cAMP、PKA、BDNF的影响。建模四周后,模型组大鼠与空白组比较,体重、糖水偏好率及自主活动水平等行为学指标分别降低了8.56%、22.48%、26.17%,表现出人类抑郁症中体重下降、快感缺失、自主活动下降等核心症状,而大鼠海马体cAMP、PKA、BDNF的水平分别降低了53.60%、53.60%、39.20%。给予三七叶总皂苷治疗后,与模型组相比,三七叶总皂苷高剂量组大鼠上述三个行为学指标分别增加了7.03%、26.21%、26.21%,上述三个生化指标也分别升高了41.29%、62.79%、49.05%。表明三七叶总皂苷能逆转抑郁大鼠行为学症状以及调节海马体cAMP、PKA、BDNF的水平。三七叶总皂苷具有良好的抗抑郁作用,其作用机制与调控海马体cAMP、PKA、BDNF水平有关。     

黄花菜抗抑郁作用有效成分的筛选

目的:观察黄花菜对小鼠抑郁模型的抗抑郁作用,对黄花菜中起抗抑郁作用的有效成分进行筛选。方法:对于三种不同成分的黄花菜样品I,II,III进行初筛,采用小鼠强迫游泳实验、悬尾实验和拮抗利血平等抑郁模型,考察黄花菜抗抑郁活性,筛选出黄花菜中起抗抑郁作用的活性成分。结果:黄花菜样品II可显著缩短小鼠悬尾、强迫游泳不动时间(P0.05),拮抗利血平所致小鼠运动不能作用、小鼠眼睑下垂作用和小鼠体温下降作用(P0.05)。经测定其中主要成分为黄酮类物质。空场实验表明各组间小鼠自主活动无显著性差异。结论:黄花菜中起抗抑郁作用的活性成分为黄酮类物质,黄花菜总黄酮对小鼠抑郁症的悬尾模型、强迫游泳模型和拮抗利血平所致的抑郁症模型均有显著治疗作用。     

刺参不同酶解产物的抗氧化活性分析

为了探究刺参不同酶解产物的抗氧化活性,外源添加了3种蛋白酶（碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶）酶解鲜活刺参。测定了不同蛋白酶组的水解度、分子量分布、3种自由基（DPPH∙、O2-∙、∙OH）的清除率。结果表明：空白组水解度随着酶解时间的延长没有明显差异,蛋白酶组的水解度与酶解时间呈正相关关系,不同蛋白酶组水解度高低顺序为,中性蛋白酶>碱性蛋白酶>木瓜蛋白酶,中性蛋白酶组最高为19.4%,木瓜蛋白酶组最低为16.1%;酶解后大分子量片段减少,<200 u的氨基酸片段增加;碱性蛋白酶组,酶解时间1 h,粗肽得率最高达到64.2%。酶解时间2 h内,蛋白酶酶解后酶解液的抗氧化能力比未处理的样品明显提高,并且与酶解液浓度呈正相关关系;质量浓度为5 mg/mL的中性蛋白酶组（酶解0.5 h）,DPPH∙清除率可达到79.64%;碱性蛋白酶组3 h,∙O2-清除率为49.58%,0.5 h∙OH清除率最高为21.78%。综上所述,在抗氧化活性方面,中性蛋白酶酶解产物在外源添加的三种蛋白酶中效果最好,外源添加蛋白酶是提高刺参蛋白利用率的有效方式。     

表面活性剂协同超声波酶法提取三七花总皂苷工艺优化及抗氧化活性研究

建立并优化了表面活性剂协同超声波酶法提取三七花总皂苷的工艺条件。以Triton X-100表面活性剂为提取溶剂,在复合酶添加量为0.2%(质量分数),液固比为30∶1(m L∶g),Triton X-100溶液p H值为5时,表面活性剂协同超声波酶法提取三七花总皂苷最优条件为:酶解温度60℃,超声功率465 W,超声40 min,此时三七花总皂苷的提取率为16.38%,高于传统的回流加热提取、超声波辅助提取。对3种工艺提取三七花总皂苷进行抗氧化活性测定,结果表明,表面活性剂协同超声波酶法提取得到的三七总皂苷对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力更高,总抗氧化能力更强,其质量浓度为0.156 mg/m L时,对DNA损伤保护作用最强。该研究方法萃取效率较高,环保安全,易于推广应用。     

三七叶总皂苷对抑郁大鼠脑内单胺及神经因子的影响

建立慢性应激抑郁大鼠模型,采用ELISA法测定5-HT、NA、DA水平,ICH法测定BDNF、TrkB、pCREB、pERK的表达,评价三七叶总皂苷对脑内单胺及神经因子的影响。建模五周后,与空白组比较,模型组大鼠体重、糖水偏好率分别降低了17.43%、39.49%,自主活动表现为探索能力降低、趋避能力升高,海马体质量百分比显著减少,呈现出人类抑郁症中体重下降、快感缺失、自主活动下降、海马体萎缩等核心症状。而给药组与模型组比较,上述指标得到有效逆转。与模型组比较,三七叶总皂苷高剂量组（100 mg/kg）可以使脑内NA、DA水平分别升高13.89%及19.66%,而对5-HT水平没影响,并且使脑内BDNF、TrkB、pCREB、pERK的表达分别上升16.67%、47.83%、20.42%、22.84%,表明三七叶总皂苷具有良好的抗抑郁作用。     

罗非鱼鳞明胶的制备及其酶解产物活性研究

以罗非鱼鱼鳞为原料,通过热水提取鱼鳞中的明胶,利用多种蛋白酶对明胶进行酶解,测定其不同酶解产物的抗氧化性、血管紧张素I转换酶(ACE)抑制活性、α-葡萄糖苷酶(AG)抑制活性等生物活性。实验结果表明:100℃热水或120℃热水提取明胶1.5h的得率分别为20.2%和37.9%。6种蛋白酶(木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶)水解明胶后,胰蛋白酶水解液和碱性蛋白酶水解液的羟自由基清除力为76.7%和76%,高于Vc的65.6%;除中性蛋白酶对DPPH自由基没有清除力以外,其余5种蛋白酶均对DPPH自由基有清除力,但是低于Vc;胃蛋白酶水解液对α-葡萄糖苷酶的活性抑制作用最强,为67.1%,而中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶水解液对α-葡萄糖苷酶没有抑制作用。6种蛋白酶的水解产物均有的ACE抑制活性,没有抗凝血活性。     

葫芦巴多糖酸解和酶解产物抗氧化及抗菌活性的比较研究

本实验在成功研究葫芦巴多糖的酸解和酶解的基础上比较研究了葫芦巴多糖不同分子量的酸解和酶解产物的抗氧化活性以及对几种植物病原菌的抑菌作用。结果表明:酸解和酶解产物均具有一定的体外清除超氧阴离子(O2·)和羟自由基(·OH)的能力。接种淋巴癌细胞(S180)的小鼠实验结果显示,酸解和酶解产物均能抑制小鼠肝、肾等内脏器官超氧化物歧化酶(SOD)活性下降,减少脏器中膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)生成量。两种水解产物对4种植物病原菌即葡萄灰酶、蚕豆褐班、棉红腐、茄子菌核均具有较为明显的抑制作用,并呈现明显的量效关系。比较而言,葫芦巴多糖的酶解产物的抗氧化活性以及抗菌作用强于酸解产物。     

2017~2018年云南地区三七须根中6种皂甙含量监测结果分析

目的 了解云南地区三七须根中R1、Rg1、Re、Rb1、Rd、Rb3 6种皂甙含量, 为三七须根开发利用提供基础数据和科学依据。方法 按照《云南省食品安全风险监测方案》中样品采集要求, 在云南地区8个地区采集106件样品。样品参照《保健食品检验与评价技术规范》(2003)“保健食品中人参皂苷高效液相色谱法”进行监测。根据GB/T 19086-2008《地理标志产品 文山三七》进行评价。结果 6种皂甙含量中以R1+Rg1+Rb1为主。三七须根皂甙总量的合格率为60.4%, 优等品达标率为41.5%。文山地区三七须根合格率高于其他地区。结论 该云南地区三七须根中皂甙含量合格率较低, 应采取措施加以改进。     

壳聚糖-三七叶黄酮复合保鲜剂对冷鲜黄牛肉的保鲜效果

目的：研究壳聚糖-三七叶黄酮复合保鲜剂对冷鲜黄牛肉的保鲜效果。方法：通过抗氧化及抑菌实验确定复合保鲜剂的最佳配比,并通过贮藏实验分析该复合保鲜剂对冷鲜（（4±2）℃）黄牛肉的保鲜效果。结果：壳聚糖与三七叶黄酮粗提液体积比为1∶1的复合保鲜剂的抗氧化性和抑菌性均较好。贮藏第10天时,使用该复合保鲜剂涂膜肉样的pH值、总挥发性盐基氮含量和菌落总数仍在可食用范围内,同时感官评分也在可接受范围内。结论：壳聚糖-三七叶黄酮复合保鲜剂对冷鲜黄牛肉具有较好的保鲜效果,有效延长其保鲜时间。     

三七叶水提物对5-氟尿嘧啶诱导小鼠肠道黏膜炎的预防作用

探究三七叶水提物对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)所致肠道黏膜炎的预防作用。选用昆明雄性小鼠,各组通过灌胃给药,然后腹腔注射5-FU建立肠道黏膜炎模型。观察小鼠体重变化情况,采用HE染色观察空肠组织形态学变化,免疫组织化学法观察空肠增殖细胞核抗原(PCNA)表达,实时荧光定量聚合酶链式反应测定空肠屏障相关基因黏蛋白2(MUC-2)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)和炎症相关基因白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α) mRNA的表达量。与模型组相比,三七叶水提物高剂量组小鼠体重升高了49.24%,高剂量组空肠绒毛长度升高了22.92%、隐窝深度降低了16.27%、绒毛长度与隐窝深度比值升高了42.32%,高剂量组空肠PCNA表达量上升了21.54%,高剂量组空肠MUC-2、ZO-1、Occludin m RNA表达量分别升高了157.66%、167.73%、212.14%;高剂量组空肠IL-1β、IL-6、TNF-αm RNA表达量分别降低了34.24%、35.18%、33.52%。以上结果表明,三七叶水提物可以预防5-FU引起的肠道黏膜炎,其能力呈现浓度依赖。     

云南文山三七须根急性毒性和诱变毒性作用的研究

目的 探讨云南文山三七须根急性毒性和诱变毒性作用。方法 急性毒性采用一次限量法, 剂量设为10000 mg/kg BW。Ames实验使用的菌株为鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型菌株TA97、TA98、TA100、TA102。实验分别设每皿5000、1000、200、40、8 μg剂量组, 同时设阴性、阳性对照组, 采用平板掺入法, 观察每皿回变菌落数。微核及精子畸形试验均使用SPF级昆明种小鼠, 实验设1250、2500、5000 mg/kg BW 3个剂量组、一个阴性对照组及一个阳性对照组。微核试验采用30 h给受试物法, 检测骨髓嗜多染红细胞微核率。精子畸形试验于首次染毒后第35 d处死动物, 观察精子畸形率。结果 云南文山三七须根对受试动物的急性毒性(LD50)>10000 mg/kg BW。与阴性对照组比较, 云南文山三七须根各剂量组在鼠伤寒沙门氏菌试验(Ames试验)中实验结果为阴性, 骨髓细胞微核试验表明未引起微核发生率增加, 对小鼠精子畸变无明显影响(P＞0.05)。结论 云南文山三七须根对昆明种小鼠的急性经口毒性属实际无毒, 在Ames实验中未呈现致突变作用, 未见诱导小鼠骨髓嗜多染红细胞微核形成的能力, 未见有致小鼠精子畸形作用。     

不同粒度对三七粉主要有效成分体外溶出度的影响

目的分析不同粒度对三七粉末主要有效成分在体外溶出度方面的影响。方法采用高效液相色谱法法测定不同粒度三七粉末,包括粗粉(24～65目)、中粉(65～80目)和细粉(80～200目),在磷酸缓冲液、水和醋酸缓冲液中主要有效成分的溶出量,并绘制相应的溶出曲线以分析影响。结果在不同溶出介质中三七中粉和细粉在短时间内可以达到溶出平衡,而三七粗粉在30 min才达到溶出平衡;在3种溶出介质中三七中粉累积溶出度均为最大;在不同介质中三七总皂苷溶出率为:pH6.8的磷酸缓冲溶液水(pH=5.13)pH4.5的醋酸缓冲溶液。结论建议三七粉碎入药时,磨成中粉进行使用。     

液相色谱-原子荧光光谱法测定三七花中亚砷酸根和砷酸根含量的不确定度评价

目的 评定液相色谱-原子荧光光谱法(high performance liquid chromatography-atomic fluorescence spectrometry, HPLC-AFS)测定三七花中亚砷酸根和砷酸根含量(以As计)的不确定度。方法 根据JJF 1059.1- 2012《测量不确定度评定与表示》对各不确定度进行分析、确认及计算, 合成扩展不确定度。结果 三七花中亚砷酸根的平均值为0.1314 mg/kg, 相对标准偏差为1.23%, 扩展不确定度为0.0097 mg/kg, 砷酸根的平均值为0.1467 mg/kg, 相对标准偏差为3.02%, 扩展不确定度为0.0144 mg/kg。结论 在测定三七花中亚砷酸根和砷酸根含量过程中, 不确定度主要来源于标准曲线测定及拟合过程。     

黄芪茎叶总皂苷提取物的抑菌活性研究

本文采用滤纸片法和倍比稀释法测定黄芪茎叶不同成分对6种供试菌的抑菌圈直径和最小抑菌浓度(minimalinhibitory concentration,MIC),分析了黄芪茎叶资源的抑菌活性,并通过测定大肠杆菌的生长曲线及菌悬液中大分子物质的含量,初步阐述了黄芪茎叶的抑菌机理。结果表明,黄芪茎叶总皂苷对6种供试菌均具有明显的抑菌活性,尤其是对大肠杆菌的MIC值可达12.5μg/mL;黄芪茎叶总黄酮仅对2种供试菌具有明显抑菌活性,MIC值均为93.8μg/mL;黄芪茎叶总多糖无抑菌活性。黄芪茎叶皂苷类提取物的加入可严重抑制大肠杆菌的生长,使菌悬液中核酸物质含量增大,表明黄芪茎叶皂苷可通过破坏菌体细胞膜的完整性、致使大分子物质外溢而发挥抑菌作用。本研究为黄芪茎叶作为一种天然防腐剂在食品保鲜与贮藏领域的应用提供了理论依据。     

华中枸骨叶总黄酮的纯化及其抑菌活性研究

以吸附率、解吸率、回收率为考察指标,在单因素实验基础上,采用正交设计优化D101大孔树脂纯化华中枸骨叶总黄酮的工艺条件。同时采用牛津杯法,考察纯化前后的提取物对常见细菌的体外抑菌作用。D101大孔吸附树脂纯化华中枸骨叶总黄酮的最佳工艺条件为:总黄酮质量浓度为0.735 mg/mL,pH为1.93,3 BV上样液,径高比1:8.5,上样速度6 BV/h,上样完毕后,静置30 min;洗脱时,先用3 BV去离子水,再用70%乙醇8 BV,洗脱流速6 BV/h,得到总黄酮回收率为91.06%,总黄酮质量分数从48.52%增长到78.26%。体外抑菌结果显示:华中枸骨叶总黄酮纯化物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、宋内志贺菌的抑菌圈分别为14.07、17.15、7.12、7.57 mm。除大肠埃希菌外,对于其他3种菌的抑菌效果均是粗提物好于纯化物。