磁性载体对菠萝蛋白酶吸附分离和固定化的研究

以聚乙二醇为分散剂和稳定剂,用氧化低价铁盐的方法制成具有磁响应性的微球,用１．３３％浓度的该磁性微球吸附分离菠萝皮汁中的蛋白酶,回收率达６１．９６％,酶活性３．８×１０￣４ｕ／ｇ。固定化后成为具有磁响应性的磁性菠萝蛋白酶,回收方便。固定化的最佳条件为：戊二醛浓度０．１９％,ＰＨ４．３,温度２５°Ｃ。最适反应温度６０°Ｃ,最适ｐＨ值８．８～９．７,往碱性偏移,酪蛋白底物的ｋ＿ｍ值为１．１×１０＿－５ｍｏｌ／Ｌ,比游离酶的８．Ｉ×１０＿－５ｍｏｌ／Ｌ大。固定化磁性菠萝蛋白酶的热稳定性有显著的提高,常温下的半衰期为２８天左右。等电聚焦电泳图谱表明,菠萝皮计中有６种同工酶组份,均可被磁性微球团载,固定化后６种酶组份的等电点保持不变。     

几丁质固定化无花果蛋白酶的研究

载体几丁质通过甲酸和戊二醛活化共价偶联无花果蛋白酶，固定化反应在给酶量为１．０ｍｇ／ｇ载体，ｐＨ７．５，４℃进行１５ｈ。制备的固定化酶表观Ｋｍ值（酪蛋白）为０．９５ｍｇ／ｍｌ，溶液酶的Ｋｍ值为０．３８ｍｇ／ｍｌ，固定化酶的最适ｐＨ范围变宽，由溶液酶的最适ｐＨ７．５－７．８变为在ｐＨ６－８范围内酶活性保持稳定；固定化酶的最适温度由溶液酶的６０℃变为３７℃。重复水解酪蛋白７次后，固定化酶保持原酶活性５     

菠萝汁对鲜豆浆酶解作用的研究

利用菠萝汁对鲜豆浆进行酶解。测定在电泳分析结果表明，在ｐＨ８．０，温度６０℃，反应时间６０ｍｉｎ的条件下，菠萝蛋白酶能使豆浆中大分子量（Ｍｒ１０９６４７８）的蛋白组份降解成５种分子量为７，５８６，８３１７６、１９０、５４６、３１９，８９０、５２４、８０７的小分子蛋白质和多肽类分子，其等电点也由ｐＨ５．９、６．０变为ｐＨ５．３、５．５。酶解后的游离氨基酸在种类的数量上没有变化，产物是多肽或小分子量的     

壳聚糖固定化碱性蛋白酶研究

对Ａｓ７０９碱性蛋白酶的固定化进行了研究，探讨了交联剂使用的先后程序、用量、以及载体壳聚糖与酶的比例等因素对酶固定化的影响。固定化酶最适温度为５０℃，最适ｐＨ值为１１，表观Ｋｍ（酪蛋白）为２．４ｍｇ／ｍｌ，热稳定性良好，该酶对酪蛋白的操作半衰期在７０天以上，固定化酶应用于皮革蛋白水解，４５℃作用６ｈｒ，ｐＨ值从起始的１０．５下降至８．５，水解度达６．４％￣２０．６％，应用于菜籽蛋白水解，相同水解条     

壳聚糖涂层法固定化脂肪酶的研究

研究了壳聚糖涂层在纤维素滤纸上成膜后再固定化猪胰脂肪酶的最佳条件。结果表明,当戊二醛浓度为５％,活化１２ｈ,与ｐＨ７．６的酶的磷酸盐缓冲溶液于室温（１５℃）交联１２ｈ,获得的固定化酶活最高,为０．２６Ｕ／ｃｍ２。固定化酶最适温度４０℃,比游离酶提高了５℃;最适ｐＨ８．５,与游离酶相比,向碱性偏移了０．５个ｐＨ     

蒜酶及其动力学研究

用凝胶色谱法从大蒜计中提取蒜酶,以Ｌ-半胱氨酸亚砜作底物研究了蒜酶的反应动力学和最适反应条件,得到符合米氏方程的反应表达式的Ｋｍ＝１．６０。最适条件３２℃和ｐＨ６．４,并认为蒜酶服从酶的一般规律,在底物浓度过高时会产生底物抑制效应,从而为蒜加工过程中抑制蒜酶裂解蒜氨酸产生蒜辣味提供依据。     

低聚果糖合成酶──果糖转移酶的部分酶学性质研究

研究从土壤中筛选得到的黑曲霉ＡＳ００２３菌株所产的β－果糖转移酶的一些酶学性质。该酶的最适ｐＨ为５．０，最适温度为５０℃，有较好的热稳定性和较宽的ｐＨ（３．５～１０）适宜范围；并研究了１２种化学物质对酶活的影响和底物的特异性。结果显示，钴离子对该酶有一定的激活作用；底物分子越大其反应速度越慢。该酶的米氏常数Ｋ＿ｍ＝４７ｍｍｏｌ，葡萄糖是酶反应的竞争性抑制剂，其Ｋ＿ｉ＝３３０ｍｍｏｌ．当５０％（Ｗ／ｖ）蔗糖与酶在ｐＨ５．０和５０℃作用１６ｈ时，得到５２％（产物／总糖）低聚果糖。     

酸性脲酶反应动力学研究

用Ｂｅｒｔｈｌｏｔ法测定酸性脲酶酶反应过程产物ＮＨ＋４的浓度变化。实验表明，酸性脲酶反应是按Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ机理进行。其最佳反应条件是ｐＨ＝４．５，反应温度６０℃，反应活化能Ｅａ＝３７．３４ｋＪ／ｍｏｌ，米氏常数Ｋｍ＝０．２８６８ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍ＝０．１７４４ｍｍｏｌ／Ｌ·ｍｉｎ．     

固定化中性蛋白酶AS1.398特性研究

用水合氧化钛螯合法固定中性蛋白酶ＡＳ１．３９８，方法简单，载体无毒性，适用于食品工业。固定化酶最适温度为６０℃，与自然酶最适温度相同。固定化酶最适ｐＨ为８，比自然酶高０．５个单位。固定化酶热稳定半衰期为６天，是自然酶的一倍。     

稻米中普鲁兰酶的纯化与性质的研究

稻米的普鲁兰酶（ＰｕｌｌｕｌａｎａｓｅＥ．Ｃ．３．２．１．４１）用ＤＥＡＥ－纤维素吸附，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤，聚丙烯酰胺盘状凝胶电泳纯化，得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的纯酶。纯酶作用的最适温度为５０℃，最适ｐＨ为５．５。以普鲁兰（Ｐｕｌｌｕｌａｎ）为底物酶的米氏常数Ｋｍ为０．０１２５％，以支链淀粉为底物，酶的米氏常数Ｋｍ为２．５％，用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶层析法测得酶的分子量为７００００。     

克鲁维酵母突变株UV-G-40-3菊粉酶性质的研究

研究了克鲁维酵母突变株（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ－ＵＶ－Ｇ－４０－３）所产菊粉酶的分布为胞外酶∶胞壁酶∶胞内酶比是５．７∶１．６∶１。该酶Ｓ／Ｉ为５．３,最适温度为５０℃,最适ｐＨ为４．５,在５０℃以下、ｐＨ４．５～８的范围内比较稳定,４℃贮存稳定性好,１４ｄ后仍保持７６％活力,为外切型菊粉酶,酶解粗菊糖（洋姜提取液）活性为纯菊糖的４倍。     

酶法水解珍珠贝肉蛋白质的工艺探讨

研究了用双酶水解技术对马氏珠母贝肉进行水解的条件。结果表明：枯草杆菌中性蛋白酶：在ｐＨ６．５、温度４０℃、酶浓度３×１０３Ｕ／ｍｌ、Ｋ＋浓度０．１２％、水解时间３．０ｈ后；再用胃蛋白酶水解：ｐＨ３．０，温度６０℃，酶浓度４．５Ｕ／ｍｌ、水解时间３．０，最适底物浓度为原料与水比例１：３进行水解，蛋白质水解率为６６．２％。水解液可用于生产海鲜调味料及功能性蛋白饮料。     

固定化黑曲霉增殖细胞生产低聚果糖的研究

黑曲霉孢子经海藻酸钙包埋３３ｈ后得到的固定化增殖细胞其酶活性达到最高，机械强度仍保持较高水平（为起始时８０％），最适ｐＨ为５．０，与游离酶相同，最适温度为５５℃，比游离酶高５℃；有害离子对其影响较小，其Ｋｍ（以蔗糖为底物）为８２ｍｍｏｌ．将固定化增殖细胞装入填充式反应柱，产品中低聚果糖含量在５０％～５５％，操作一个月活性保持不变。     

耐热性纤维素酶的研究及在酒精生产中的应用

耐热性纤维素酶的生产、性质及在酒精生产中的初步应用，采用粗纤维原料固体培养，最佳培养条件为：温度为３０℃，自然ｐＨ。酶作用的最适ｐＨ为４．６，稳定性较好，反应最适温度为５５℃～６０℃，该酶经６０℃处理９０ｍｉｎ，剩余酶活力达８０％以上。最适发酵培养基为：玉米芯∶麸皮＝２∶４，加水比是１∶１．５，发酵周期为４天左右。在此条件下，其滤纸酶活为２８４．９ｕ／ｇ。纤维素酶应用于以瓜干为原料的酒精生产，在其最适使用工艺条件下，原料出酒率达３５．３６２３％，比对照提高１．２６％。     

碱性脱毛蛋白酶产生菌的选育

从富含蛋白质的土壤中筛选出的碱性蛋白酶产生菌，命名为Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．８（简称为Ｎｏ．８）。Ｎｏ．８菌能在ｐＨ６￣１２且含有较高浓度钙离子条件下生长并产酶，与目前的碱性蛋白酶生产菌如地衣芽孢杆菌２７０９相比，它具有较强的耐碱性和耐钙离子性。培养基起始ｐＨ值为７．５，接种菌龄为１８ｈ种子液２％，在３５￣３７℃，培养４８￣６０ｈ的条件下，Ｎｏ菌产生的蛋白酶活力可稳定在１７００￣１８００ｕ／ｍｌ，     

生活物性肽——酷蛋白磷酸肽（CPP）的研制

摸索了２７０９碱性蛋白酶水解酷蛋白制备ＣＰＰ的最佳工艺条件：底物浓度１０％、用酶量１５００Ｕ／ｇ底物、反应温度４５℃、ｐＨ１０．５、反应时间１５０ｍｉｎ。采用选择淀淀法分离ＣＰＰ,在ｐＨ４．５添加１．１％ＣａＣｌ２（ｗ／ｖ）和５０％（ｖ／ｖ）乙醇,室温沉淀４ｈ,得到ＣＰＰ产品５０％（ｖ／ｖ）乙醇,室温沉淀４ｈ,得到ＣＰＰ产品的Ｎ／Ｐ、得率分别为６．３９和１３．９４％。     

酚醛树脂作载体固定化葡萄糖淀粉酶的研究

以酚醛树脂作载体，研究了糖化型淀粉酶固定化条件及固定化糖化酶的性质，结果表明，在ＰＨ＝３，Ｔ＝３５℃，ｔ＝４ｈ条件下所得固定化酶活力最高，与游离酶相比，酶活力回收可达８２％，糖化酶经固定后催化反应最适ＰＨ＝４．２，最适温度为４８℃，Ｋｍ＝２８．６ｍｇ／ｍＬ，装柱连续水解淀粉２４０ｈ酶活力保留８７％。     

绍兴腐乳毛坯中蛋白酶的检测

１．７５％ＮａＣｌ溶液可有效抽提林木毛霉菌丝体表面的蛋白酶，依此确立了腐乳毛坯中蛋白酶的检测法。该酶系在４０％以下２ｈ酶活稳定不变，６０℃ｌｈ能保持５８％活力；其最适作用温度和ｐＨ分别为５５～６０℃和６～７ｐＨ；ｐＨ稳定范围为４～７；ＮａＣｌ和ＣＨ＿３ＣＨ＿２ＯＨ对酶系有明显的保护作用。讨论了蛋白酶检测及其性质对腐乳工艺改进的指导意义。     

酶解玉米黄粉蛋白制备可溶性肽

本文研究了碱性蛋白酶水解玉米黄粉蛋白的反应过程。得到了相应的动力学参数：Ｖｍａｘ＝０．０１４ｍｇＮ／ｍｌ／ｍｉｎ,Ｋｍ＝０．２６％（ｗｔ／ｖｏｌ）。分析了ｐＨ、温度、玉米黄粉蛋白浓度、酶浓度和前处理对水解的影响。     

香菇营养成分的提取及香菇饮料的研制

纤维素酶能显著提高香菇营养成分的提取效果,特别是氨基酸和多糖的提取效果大大提高。菠萝蛋白酶对香菇营养成分提取效果的提高作用不大,但菠萝蛋白酶可以减轻香菇提取液的沉淀,达到澄清效果。采用０．１５％的纤维素酶和０．２０％的菠萝蛋白酶混合使用,在４５℃和ｐＨ值４．５的条件下水解香菇６ｈ,有很好的提取效果,又起到澄清作用。