贝类毒素大田软海绵酸的免疫分析检测技术研究进展

大田软海绵酸(okadaicacid,OA)是一种广泛存在于贝类等生物中的海洋生物毒素,可引起人或动物的急性中毒,对食品安全和海产养殖具有严重危害。因此建立快速、可靠、灵敏的OA检测技术具有重要意义。免疫分析检测技术基于抗原抗体的结合,特异性强、灵敏度高、应用范围广,是当前检测贝类毒素OA的主要手段。本文综述了近年来针对贝类毒素OA的免疫分析检测技术,其中包括酶联免疫吸附检测、免疫层析检测、时间分辨荧光免疫检测和基于免疫传感器的检测技术等。本文着重阐述了不同免疫分析技术的原理及其在OA检测中的实际应用,同时探讨了免疫分析技术在贝类毒素OA检测方面的挑战和发展趋势,以期为开发性能更加优异的OA免疫检测技术提供研究思路。     

贝类中大田软海绵酸的液相色谱-串联质谱优化测定法

目的建立测定贝类组织中腹泻性贝类毒素大田软海绵酸(okadaic acid,OA)的优化高效液相色谱-串联质谱方法。方法样品经0.125 mol/L盐酸性水溶液提取,乙酸乙酯萃取,HLB固相萃取小柱净化,采用液相色谱-串联质谱进行检测。结果以80%甲醇-水为流动相等度洗脱,流速为0.3 m L/min,柱温为35℃,选择正离子扫描和多反应监测(MRM)模式进行分析,OA在2~200μg/L范围内线性关系良好。采用本研究改进的前处理方法,4个添加水平下的回收率为90.5%~99.6%,高于采用行业标准SN/T2269-2009前处理方法的回收率(81.3%~87.5%),相对标准偏差小于10%,方法定量限(以S/N≥10计)为1.0μg/kg。成功应用本方法检测了湛江市市售的7种贝类样品,未检出OA。结论该优化方法灵敏度高,操作较简便,适合于多种贝类样品中OA的检测。     

豇豆中啶虫脒基体标准物质的研制

目的：建立豇豆中啶虫脒基体标准物质的研制方法。方法：将新鲜种植的空白豇豆样品粉碎、冻干、添加、混匀、二次冻干、粉碎、过筛、混匀、包装、Co60辐照灭菌。采用液相色谱—质谱串联方法进行检测,基体标准溶液定量校正。通过均匀性、稳定性检测合格后,采用实验室联合定值的方式进行测量定值。结果：该方法制备的样品易于贮藏、运输和稳定保存,均匀性、稳定性良好,其啶虫脒特性值为(0.283 7±0.008 5) mg/kg(k=2)。结论：试验制备的豇豆中啶虫脒基体标准物质符合国家计量技术规范中均匀性、稳定性要求,准确度良好,能够应用于检测过程中质量控制、分析仪器校准、检测方法确认评估等工作。     

河鲀鱼基质中河豚毒素标准样品的研制

目的 研制基于河鲀鱼基质的河豚毒素(tetrodotoxin, TTX)定量分析标准样品。方法 以野生河鲀鱼肝脏、卵巢、精巢和肌肉组织为基料,利用正己烷脱脂分离处理后,经两次冷冻干燥制备河鲀鱼基质的TTX标准样品,采用液相色谱-串联质谱法进行定性确证。样品分装成500瓶后,进行均匀性、稳定性检验和定值分析。结果 经确证该基体标准样品中含有TTX;从基体标准样品中随机抽取15瓶进行均匀性检验,经F检验表明在95%的置信区间范围内样品均匀性良好;长期稳定性考察在0～4℃低温条件下历经了长时间保存,短期稳定性在-80～55℃范围内进行运输条件下的考察,结果表明在考察期间内样品稳定性良好;经国内8家实验室进行协同定值,评定了定值结果的不确定度,该基体标准样品中TTX特性值及不确定度为(5.20±0.03)mg/kg(k=2)。结论 该基体标准样品达到国家标准样品的技术要求,可用于对水产品中河豚毒素检测过程的方法验证与质量控制等活动。     

黄瓜中毒死蜱残留基体标准物质的研制

目的 建立黄瓜中毒死蜱残留基体标准物质的研制方法。方法 选择符合标准物质研制要求的新鲜黄瓜为研制对象,经过预冻干、添加、混匀、二次冻干、过筛、包装及辐照灭菌,采用气相色谱-串联质谱法测定,同位素内标法定量,经均匀性和稳定性检验后,采用多家实验室合作定值的方式进行定值。结果 通过11家独立实验室合作定值及不确定度评估,毒死蜱的特性值为0.403±0.033 mg/kg(k=2)。结论 研究表明获得的样品均匀性和稳定性良好,适用于黄瓜中毒死蜱检测过程的方法研制和质量控制。     

鸡肉中金刚烷胺和利巴韦林残留基体标准物质的研制

目的建立含金刚烷胺和利巴韦林多残留鸡肉糜样自然基体标准样品的研制和定值方法。方法通过添加金刚烷胺和利巴韦林饲养白羽肉鸡获得阳性样本,然后经过取样、均质、包装、辐照灭菌、均匀性检验、稳定性检验、协同定值等过程,制备预期目标含量水平的含金刚烷胺和利巴韦林的多残留鸡肉糜样自然基体标准样品。结果经10家实验室采用液相色谱-串联质谱法进行协同定值,金刚烷胺和利巴韦林的特性值分别为10.1±1.0μg/kg(k=2),11.3±1.6μg/kg(k=2)。结论研究表明获得的样品均匀性良好,稳定性达到10个月,能够用于兽药残留检测的质量控制。     

葵花籽油脂肪酸成分标准物质的研制

选取当年产葵花籽油作为标准物质的试验样品,对研制的葵花籽油脂肪酸成分标准物质做了均匀性检验、稳定性监测和定值工作。葵花籽油脂肪酸成分标准物质样品的均匀性检验结果经F检验以及19个月稳定性监测结果表明,单元内和单元间均匀程度以及标准物质样品的稳定性均达到国家一级标准物质的制备要求。葵花籽油脂肪酸标准物质的定值结果为:棕榈酸(C16:0)6.1±0.4;硬脂酸(C18:0)5.6±0.5;油酸(C18:1)23.8±1.4;亚油酸(C18:2)62.2±1.5;亚麻酸(C18:3)1.0±0.7;山嵛酸(C22:0)0.8±0.2。     

大豆油脂肪酸成分标准物质的研制

对大豆油脂肪酸成分做了均匀性检验、稳定性监测和定值工作。结果表明,单元内和单元间均匀程度以及标准物质样品的稳定性均达到国家一级标准物质的制备要求。大豆油脂肪酸标准物质的定值结果为：棕榈酸（C16∶0）是11.0±0.8（%）;硬脂酸（C18∶0）是4.5±0.4（%）;油酸（C18∶1）是20.7±1.0（%）;亚油酸（C18∶2）是54.2±2.4（%）;亚麻酸（C18∶3）是8.9±1.8（%）。     

鳗鱼肉粉中氨基甲苯咪唑基体标准物质的研制

目的:建立鳗鱼肉粉中甲苯咪唑代谢物氨基甲苯咪唑基体标准物质的研制及定值方法。方法:通过药浴甲苯咪唑养殖鳗鱼的方式获得阳性样本,经冷冻干燥、真空包装和辐射灭菌等过程制得氨基甲苯咪唑基体标准物质,并考察其均匀性、稳定性、协同定值和不确定度。结果:该方法所制备的基体标样均匀性良好,能够适应低温、常温、长距离运输等环境,在-18℃下能够保存12个月以上,经8家资质检验机构的协同定值,氨基甲苯咪唑特性值为(35.3±6.4)μg/kg(k=2)。结论:该基体标准物质达到国家标准样品的技术要求,能够满足鳗鱼肉中氨基甲苯咪唑残留检测的质量控制和方法验证的需求。     

山药粉中甲萘威残留分析基体标准物质研制

目的：加强农产品流通监管,开发食品检测方法。方法：通过模拟种植方式获得含甲萘威的山药阳性样本,经过均质、冷冻干燥、粉碎、过筛、混匀、包装制备山药粉。采用液相色谱—串联质谱仪检测,同位素内标—标准曲线法定量。通过对均匀性、稳定性、协同定值、不确定度的评定,得到满足预期含量水平的山药粉中甲萘威基体标准物质。结果：该方法所制备的基体标准样的特性值为（1.04±0.10） mg/kg（k=2）。结论：采用冷冻干燥法制备的山药粉中甲萘威基体标准物质符合国家计量技术规范中均匀性、稳定性要求,可用于食品实验室方法验证、质量控制等活动。     

菜籽油脂肪酸成分标准物质的研制

选取当年产菜籽油作为标准物质的试验样品,对研制的菜籽油脂肪酸成分标准物质做了均匀性检验、稳定性监测和定值工作.选用的标准物质试验样品添加复配的BHA、BHT、TBHQ,混匀后充氮封装于2 mL安瓿中,室温条件下储存.菜籽油脂肪酸成分标准物质样品的均匀性检验结果经F检验以及16个月稳定性监测结果表明,单元内和单元间均匀程度以及标准物质样品的稳定性均达到国家一级标准物质的制备要求.菜籽油脂肪酸标准物质的定值结果为:C16:0(8.9±0.8)%,C18:0(2.8±0.2)%,C18:1(22.3±1.0)%,C18:2(40.1±2.2)%,C18:3(9.2±0.8)%,C20:0(0.5±0.1)%,C20:1(5.1±0.4)%,C22:1(10.0±1.6)%.     

芝麻油脂肪酸成分标准物质的研制

选取当年产芝麻油作为标准物质的试验样品,对研制的芝麻油脂肪酸成分标准物质做了均匀性检验、稳定性监测和定值工作.选用的标准物质试验样品添加复配的BHA、BHT、TBHQ,混匀后充氮封装于2 mL安瓿中,室温条件下储存.芝麻油脂肪酸成分标准物质样品的均匀性检验结果经F检验以及16个月稳定性监测结果表明,单元内和单元间均匀程度以及标准物质样品的稳定性均达到国家一级标准物质的制备要求.芝麻油脂肪酸标准物质的定值结果为:C16:0(9.5±0.6)%,C18:0(5.2±1.0)%,C18:1(39.0±0.7)%,C18:2(44.9±1.0)%,C20:0(0.6±0.2)%.