麦麸中烷基间苯二酚诱导HepG2细胞自噬和凋亡

采用制备色谱从麦麸中制备烷基间苯二酚同系物(alkylresorcinols,ARs),研究其诱导HepG2细胞自噬和凋亡作用。结果表明:经液相色谱-质谱确认制得的烷基间苯二酚为C19:0、C21:0同系混合物;细胞毒性实验结果显示,10～320 μg/m L的ARs能显著抑制Hep G2细胞生长(P<0.05、P<0.01、P<0.001),且呈剂量依赖效应;与对照组相比,160 μg/m L ARs作用24 h,Hep G2细胞凋亡率极显著升高(P<0.01),剪切型Caspase3、Bax/Bcl-2蛋白表达高度显著升高(P<0.001),Beclin-1、LC3II蛋白表达极显著升高(P<0.01),p62蛋白表达极显著降低(P<0.01)。这些结果表明,ARs可以诱导Hep G2细胞自噬,激活Caspase通路诱导Hep G2细胞凋亡,抑制Hep G2细胞生长。     

5-二十一烷基间苯二酚抑制α-葡萄糖苷酶活性的分子机制

小麦麸皮烷基间苯二酚可抑制α-葡萄糖苷酶活性,具有控制餐后高血糖的潜在作用,但是其作用分子机制尚未阐明。本实验采用荧光光谱、圆二色光谱以及分子对接技术研究小麦麸皮中含量最高的5-二十一烷基间苯二酚与α-葡萄糖苷酶的相互作用及抑制机制。结果显示,5-二十一烷基间苯二酚可使α-葡萄糖苷酶的内在荧光静态猝灭,不同温度(298、304、310 K)条件下结合常数K_A分别为149.8、46.2、20.3 L/mol;5-二十一烷基间苯二酚与酶分子结合降低酶分子结构中α-螺旋含量,增加β-折叠、β-转角以及无规卷曲含量;5-二十一烷基间苯二酚的苯环3—OH可与酶分子Tyr158的—COOH形成氢键,苯环5—OH的氢原子和氧原子分别与Lys156的—NH_2氢原子和Leu313的—COOH氧原子形成氢键,另外推测酶分子中Phe159、Pro312、Phe314、Asn415等氨基酸是与烷基间苯二酚形成疏水作用的重要位点。     

飞燕草素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞糖酵解的影响

目的:探讨飞燕草素对乳腺癌MDA-MB-231细胞糖代谢的影响。方法:以不同浓度的飞燕草素作用MDA-MB-231细胞,CCK-8检测细胞活性,免疫组化染色检测Ki67表达,划痕试验检测细胞的迁移能力;葡萄糖摄取、乳糖和三磷酸腺苷(ATP)测定试剂盒检测MDA-MB-231细胞葡萄糖摄取、乳糖和ATP的生成,己糖激酶(HK)活性试剂盒检测HK活性;蛋白质印迹法检测HK、丙酮酸激酶(PK)、乳酸脱氢酶A(LDHA)和M2-型丙酮酸激酶 2(PKM2)表达。结果:飞燕草素能明显抑制MDA-MB-231细胞增殖,20和40 μmol/L飞燕草素能分别降低细胞存活率至75%和72%(P<0.05);20、40 μmol/L飞燕草素能降低乳腺癌MDA-MB-231细胞Ki67表达阳性的细胞数量,差异有统计学意义(P<0.01);飞燕草素能降低乳腺癌细胞葡萄糖的摄取,降低细胞乳糖和ATP的生成,抑制PKM2、HK和LDHA蛋白的表达,降低p-Akt和p-mTOR蛋白表达。结论:飞燕草素能抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞糖代谢,抑制Akt/mTOR通路活性可能是飞燕草素抑制乳腺癌细胞糖酵解的机制。     

鱼头多糖对K562细胞增殖抑制作用的初步研究

主要研究鱼头多糖对K562细胞的抑制作用。通过MTT法检测鱼头多糖对K562细胞的增殖抑制率,HE染色法观察K562细胞形态学的变化,流式细胞仪检测K562细胞的凋亡情况。结果表明,MTT法测定在药物浓度≤200μg/m L时,鱼头多糖对K562细胞增殖有明显抑制作用,其抑制率与时间、浓度呈正相关。HE染色显示多糖作用于K562细胞后出现了明显的凋亡和坏死同时发生的现象,且表现出时间依赖性。流式细胞仪检测多糖对K562细胞周期分布有显著影响,且凋亡现象明显,并伴有明显的坏死现象。在多糖作用72 h后,凋亡细胞的比例高达细胞21.28%。因此,提示鱼头多糖对K562细胞的增殖抑制作用明显。     

苦荞麦蛋白质对乳腺癌细胞的增殖抑制作用

采用MTT 法、HE 染色法、扫描电镜法研究苦荞麦蛋白质(TBWSP31)对人乳腺癌Bcap37 细胞的增殖抑制作用。结果表明：TBWSP31 对人乳腺癌细胞株Bcap37 的生长有明显的抑制作用,并且存在时间效应和剂量效应。48h 和72h 的IC50 值分别为43.37、19.75μg/mL。HE 染色发现细胞经样品作用后,细胞变形,变小,细胞核固缩、裂解,细胞膜皱褶、卷曲和出泡,并且有细胞膜包裹的凋亡小体生成。扫描电镜下观察细胞表面超微结构,发现细胞出现典型的凋亡形态学特征,细胞表面微绒毛大量减少,有的甚至消失,细胞体积变小,细胞膜皱缩,表面凸起,形成了大量的小泡,有的成为凋亡小体。     

玉米黄素对衣霉素诱导的SH-SY5Y细胞周期、自噬、凋亡的保护作用

目的：探讨玉米黄素对衣霉素（tunicamycin,TM）诱导的SH-SY5Y细胞活性、细胞周期、自噬及凋亡的影响。方法：分别设置空白对照组（不作处理）、玉米黄素组（5 μmol/L玉米黄素）、TM损伤组（5 μg/mL TM）和损伤加保护组（5 μmol/L玉米黄素预处理＋5 μg/mL TM进一步共处理）,采用噻唑蓝法检测各处理对SH-SY5Y细胞存活率的影响,从而筛选药物共处理时间;采用流式细胞术测定细胞周期的变化;通过Western blot法测定自噬相关蛋白Beclin1、Beclin1-C和微管结合蛋白1轻链3（microtubule-associated protein1 light chain 3,LC3）B以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma 2,BCL2）的表达量。结果：玉米黄素（5 μmol/L）能减轻TM对SH-SY5Y细胞存活率的抑制作用,与TM损伤组相比,损伤加保护组在处理时间为36 h时差异极显著（P＜0.01）,48 h时差异显著（P＜0.05）;而TM损伤组相较于空白对照组在处理24、36、48 h时均表现出极显著差异（P＜0.01）。与空白对照组相比,TM处理可以极显著增加细胞周期中G0/G1期细胞数量（P＜0.01）,显著或极显著增加LC3B（P＜0.01）、Beclin1（P＜0.05）及Beclin1-C（P＜0.05）表达水平,极显著降低G2/M期细胞数量（P＜0.01）、抗凋亡蛋白BCL2表达水平（P＜0.01）。而玉米黄素联合TM处理与TM损伤组比较,均能减轻TM引起的改变,其中BCL2蛋白水平显著提高（P＜0.05）。结论：玉米黄素可减轻TM处理引起的SH-SY5Y细胞周期G1期阻滞、促细胞自噬与促凋亡作用,其作用机制与玉米黄素对细胞存活率、细胞周期分布和自噬、凋亡相关蛋白表达的调节有关。     

2类阳离子表面活性剂对细胞的增殖抑制作用

通过噻唑蓝(MTT)比色法检测了4种单长链烷基三甲基氯化铵和3种单长链烷基二甲基苄基氯化铵系列阳离子表面活性剂对人宫颈癌细胞(HeLa)及中华仓鼠卵巢细胞(CHO)的增殖抑制作用,探讨了2类结构相似物质对细胞毒性的大小.结果表明:单长链烷基三甲基氯化铵和单长链烷基二甲基苄基氯化铵对细胞的增殖抑制作用均随其浓度的增加而增强;相同浓度下,对细胞的增殖抑制作用均随其脂肪链长度的增加而增强;单长链烷基三甲基氯化铵的细胞毒性小于相同脂肪链长度的单长链烷基二甲基苄基氯化铵.     

同工麦胚凝集素Ⅱ对乳腺癌细胞的增殖抑制作用

通过增殖抑制试验、细胞形态观察和细胞周期测定,研究了同工麦胚凝集素Ⅱ（WGAⅡ）对于体外培养的MCF-7和SHZ两种乳腺癌细胞的增殖抑制作用.结果表明最大抑制率均出现于加药后72h,其中SHZ.尤为敏感.WGAⅡ对SHZ细胞的LD50为10μg/ml.WGAⅡ作用使细胞皱缩或拉长,部分细胞簇集成团,有些细胞脱壁,细胞表面反光性变差.细胞膜皱缩、外突或粘连,有的小泡破裂,或脱落形成凋亡小体.WGAⅡ将SHZ细胞阻断在G1/S期,干扰了肿瘤细胞的正常增殖活动.