磷脂酶A1(Lecitase Ultra)大孔树脂固定化研究

选用9种树脂对磷脂酶A1(Lecitase Ultra)进行固定化,比较得出最适合的固定化载体为D101型号的大孔树脂.对其固定化条件进行优化,得到了固定化最优的条件为:酶液和树脂液料比1∶1(mL/g),磷酸盐缓冲液pH为6.5,室温下固定化时间60 min.在此条件下的得到的固定化酶的酶活力为750.0 U/g.通过扫描电子显微镜观测了固定化前后,树脂表面特征的变化.     

磷脂酶A1(Lecitase Ultra)水解磷脂酰胆碱的动力学和热力学研究

本论文研究了磷脂酶A1(Lecitase Ultra)在水相体系中水解磷脂酰胆碱(PC)的动力学和热力学性质。依据Arrhenius经验方程式,计算出了催化水解反应的活化能为5.96 kJ/mol;并进行了Lecitase Ultra水解PC的Briggs-Haldane稳态法酶催化模型动力学模拟,利用底物抑制原理进行了模型修正;采用Lineweaver-Burk作图法,计算出反应的动力学参数Km,Vmax和kI分别为4.02 × 10-2 mol/L、10.05 mol/(L.min)和1.33 × 102 mol/L。研究结果为进一步探讨Lecitase Ultra催化机理及其变性机理提供了基础数据和理论支撑。     

磷脂酶A_1(Lecitase Ultra)的氨基酸序列分析及催化机理

研究磷脂酶A_1(Lecitase Ultra)的纯化、酶蛋白的氨基酸序列及活性中心的氨基酸残基组成,并推导水解磷脂酰胆碱(Pc)的机理。超滤法和RP-HPLC纯化酶液,除去了山梨醇和山梨醇盐,纯度97.7%;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI SYNAPT Q-TOF MS)和二级质谱(MS/MS)对酶蛋白进行分析,确定了氨基酸序列组成;数据库(http://www.matrixscience.com)比对,发现氨基酸序列信息与棉状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)脂肪酶和尖孢镰刀菌(F.oxysporum)脂肪酶高度吻合,序列中1-284是T.lanuginosus脂肪酶的氨基酸序列,序列中285-339是F.oxysporum脂肪酶的氨基酸序列;Lecitase Ultra和Sn-1-C16:0/sn-2-C2:0-PC的分子对接证实了酶活中心的三联体"Ser-His-Asp"催化机理。     

磷脂酶A_1(Lecitase Ultra)水解磷脂酰胆碱的动力学方程和热力学研究

研究了磷脂酶A1(Lecitase Ultra)在水相体系中水解磷脂酰胆碱(PC)的动力学和热力学性质。依据Arrhenius经验方程式,计算出了催化水解反应的活化能为5.96 k J/mol;并进行了Lecitase Ultra水解PC的Briggs-Haldane稳态法酶催化模型动力学模拟,利用底物抑制原理进行了模型修正;采用Lineweaver-Burk作图法,计算出反应的动力学参数Km,Vmax和kI分别为4.02×10~(-2)mol/L、10.05 mol/(L·min)和1.33×10~2mol/L。研究结果为探讨Lecitase Ultra催化机理及其变性机理提供了参考。     

利用酶抑制剂固定化磷脂酶A1（PLA）的研究

在固定化磷脂酶A1时，利用酶抑制剂与磷脂酶A1活性中心氨基酸残基结合，使戊二醛基与磷脂酶A1的非活性氨基残基缩合，从而起到保护酶活性中心基团，提高固定化酶活力作用。实验证明磷酸盐是磷脂酶A1的竞争性抑制剂，并求出Ki值。     

磷脂酶A1(Lecitase Ultra)催化水解油脂机理研究(Ⅰ)——磷脂酶A1(Lecitase Ultra)组成及酶学特性

采用凝胶色谱、凝胶电泳和生物质谱分析了磷脂酶A1(Lecitase Ultra)(PLA1)的主要组成,结果表明PLA1主要由4种同工酶组成,这4种同工酶在氨基酸序列上与棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)的脂肪酶高度吻合.测得PLA1水解大豆油的最适pH为6.8,最适温度为40℃.PLA1在pH 4～8之间,温度低于45℃下具有良好的稳定性,在pH 3以下和pH 10以上不稳定.     

均相壳聚糖固定化磷脂酶A1(PLA1)的研究

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂、酶液,三者均相反应,固定化磷脂酶A1,对它的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究。固定化最佳条件,以脱乙酰度为92.8%,平均分子量为7.84×105,戊二醛浓度为3%缩合后,在0.5mg/100mL酶、pH6.0、25mmol/L CaCl2、4℃条件下固定化酶,酶活力回收可达59%。固定化酶最适温度60℃、最适pH值8.0,Km=9.08mmol/L。     

磷脂酶A1水解卵磷脂的研究靠

研究磷脂酶A1水解卵磷脂的条件,确定最佳的酶解条件为酶解温度50℃,水∶磷脂(w/w)50,反应溶液pH 8.0,酶解时间9h,添加50μL 0.3mol/L Ca2 溶液及100μL磷脂酶A1溶液。     

磷脂酶Lecitase Ultra和磷脂酶C复合对冷榨菜籽油脱胶的影响北大核心CSCD

为了提高脱胶效率,以冷榨菜籽原油为原料,磷脂含量为指标,采用磷脂酶Lecitase Ultra和磷脂酶C复合酶法对冷榨菜籽油进行脱胶。采用单因素试验考察磷脂酶Lecitase Ultra反应时间、磷脂酶C反应时间、加水量、磷脂酶Lecitase Ultra添加量、磷脂酶C添加量、柠檬酸溶液添加量对脱胶油磷脂含量的影响,并通过响应面法优化脱胶条件。对优化的脱胶条件下所得到的脱胶油的理化指标进行了检测,并与国标一级压榨菜籽油进行了比较。结果表明:磷脂酶Lecitase Ultra和磷脂酶C对冷榨菜籽油进行酶法脱胶的最佳工艺条件为磷脂酶Lecitase Ultra添加量33 mg/kg,磷酯酶Lectase Ultra反应时间90 min,磷脂酶C添加量65 mg/kg,磷脂酶C反应时间60 min,加水量33 mL/kg,柠檬酸溶液添加量1.2 mL/kg;在优化条件下脱胶,脱胶油中磷脂含量为2.3 mg/kg,脱胶油的过氧化值和酸值均达到一级压榨菜籽油的国家标准。综上,磷脂酶Lecitase Ultra和磷脂酶C复合脱胶效果较好,所优化的工艺条件可用于菜籽油的脱胶。     

辅助蛋白基因的剪接对磷脂酶A1酶活的影响

为探究磷脂酶A1辅助蛋白(phospholipase A1 accessory protein,PlaS)对磷脂酶A1 (phospholipase A1,PlaA1)酶活关键调控区域,根据PlaS的结构特点,设计出截短突变体,利用聚合酶链式反应技术将PlaA1与PlaS共表达基因plaB中编码辅助蛋白的基因plaS进...     

有机改性凹凸棒土交联吸附法固定化磷脂酶A_1研究

以有机硅烷偶联剂KH550改性凹凸棒土作为载体,在单因素试验基础上,研究固定磷脂酶A1最佳工艺条件。优化反应条件为:固定化反应时间5.5 h,固定化反应温度50℃,戊二醛浓度0.4%,体系pH 4.7,最终固定化酶酶活5,100~5,330 U/g。固定磷脂酶A1具有比游离磷脂酶更广温度范围和更宽pH应用范围,固定磷脂酶A1最适pH为5.3,而游离磷脂酶A1为4.8;固定磷脂酶A1在较低和较高pH酶活力均高于游离酶;在58℃处理0.5 h,固定化酶仍能保持高于85%酶活,而游离酶酶活则低于70%。     

汉麻籽抗氧化肽的制备与氨基酸序列分析

为开发具有较好抗氧化活性的植物源蛋白肽,采用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶复合酶法水解汉麻籽粕获得汉麻籽蛋白水解物,经膜分离技术得到4种不同分子质量的多肽组分。通过DPPH自由基清除率、总还原力的测定,评价不同多肽组分的抗氧化活性,并对抗氧化活性最强的多肽组分进行氨基酸序列分析。结果显示：低分子质量的汉麻籽多肽组分具有更好的抗氧化活性,其中HP-Ⅳ组分（分子质量＜1 kDa）的抗氧化活性最强;HP-Ⅳ组分中丰度较高的6个肽段的分子质量分别为 364.84、539.77、630.30、662.33、718.90、827.41 Da,氨基酸序列分别为NRDDMRER、ANQLDQFSR、NPEDEFEQLRREGGRG、NHNNQLDLTPR、TVNSYNLPILRF、VSLLDTSNVNNQLDDNPRRFY。汉麻籽蛋白水解物,尤其是分子质量小于1 kDa的多肽组分可作为功能性成分用于抗氧化相关功能食品和保健品的开发。     

Partial hydrolysis of soybean oil by phospholipase A1 (Lecitase Ultra)

The partial hydrolysis of soybean oil, as catalysed by phospholipase A₁ (Lecitase Ultra) in a solvent-free system, was investigated in this study. The optimal pH and temperature for the partial hydrolysis of soybean oil by phospholipase A₁ (Lecitase Ultra) were 6.8 and 40 °C, respectively. Phospholipase A₁ (Lecitase Ultra) displayed good stability over a range of pH values from 4.7 to 7.4, and at temperatures below 60 °C. Phospholipase A₁ (Lecitase Ultra) is postulated to possess sn-1,3-position regiospecificity towards triacylglycerols (TAGs), based on the identification of the fatty acids released from TAGs following partial hydrolysis by swine pancreatic lipase (SPL) and phospholipase A₁ (Lecitase Ultra). Alternative TAG hydrolysis routes for phospholipase A₁ (Lecitase Ultra) are postulated, and several reaction equilibrium and rate constants were determined.     

玉米降血糖活性肽制备分离及其氨基酸序列分析

以水解度(DH)和游离氨基酸含量为指标优化玉米蛋白粉的酶水解工艺,结果显示,在pH 8.5,60℃条件下经过正交试验得到最适组合为:酶底物比3.5g/100g,水解时间2h,料液比120(g/mL),在该条件下其DH为27.02%,多肽含量为85.23%。同时,还优化了玉米肽的脱色工艺,最佳条件为:温度50℃,pH 3.5,活性炭用量1.5g/100mL,脱色时间45min,该条件下玉米肽得率为77.86%,脱色率为87.27%。将脱色脱盐后的玉米多肽经过凝胶色谱分离得到3个组分。体外降血糖活性结果显示,CP1促进正常HepG2细胞葡萄糖消耗效果最优,并且其α-糖苷酶抑制活性也最高(34.64%);CP1经过RP—HPLC制备柱纯化得到含量较高的14个组分,其中CP1-13的α-糖苷酶抑制活性最強,达到39.50%。经UPLC—Q—TOF—MS/MS测定,其氨基酸序列为A-P-A-L-L-P-F。     

磷脂酶A1水解蛋黄卵磷脂的研究

采用磷脂酶A1水解蛋黄卵磷脂,通过单因素实验和正交实验确定该酶水解蛋黄卵磷脂经济合理的工艺条件为：反应温度50℃,反应时间5h,加酶量0．40 IU／g,起始pH6．0,底物质量浓度80g／L;利用电喷雾飞行时间质谱仪分析水解前后蛋黄卵磷脂组分,磷脂酶A1水解Sn-1位脂肪酸,生成含Sn-2位不饱和脂肪酸的溶血磷脂,反应过程中有酰基位移发生。     

金华火腿中小肽的分离纯化及结构研究

采用切流向过滤、葡聚糖凝胶Sephadex G-15过滤层析对成熟前和后熟结束时期金华火腿中小肽进行分离纯化。结合高效液相色谱-串联质谱仪进行分析,得到26种主要的小肽。其中有7种肽重现性较好,相对峰面积较高,其氨基酸序列分别为Ala-His、Pro-Leu、Ser-Gly-Val、Ser-Gly-Phe、Pro-Leu-Lys-Pro-Ala、Leu-Leu-Ala-His 和Asn-Pro-Thr,对应的相对峰面积分别为17.81%、8.62%、10.58%、5.70%、6.11%、6.12%和3.49%。     

Covalent interactions between amino acid side chains and oxidation products of caffeoylquinic acid (chlorogenic acid)

BACKGROUND: Physicochemical properties and digestibility of proteins can be modified by covalent interactions with oxidized phenolic compounds, i.e., quinones. In order to control these interactions in food products, the covalent interactions between quinones from caffeoylquinic acid (CQA) and amino acid side chains were studied with mass spectrometry using N‐terminally protected amino acids. RESULTS: The addition of two molecules of CQA, presumably in the form of a pre‐formed dimer, was observed for lysine, tyrosine, histidine and tryptophan. A monomer of CQA seemed to be able to react with histidine and tryptophan, whereas no interaction with a CQA monomer was observed for lysine and tyrosine. Serine and threonine showed no covalent interactions with CQA. Cross‐linking between CQA and the side chains of two molecules of lysine is likely to occur also in proteins. The results show that protein cross‐linking may also be expected to occur via two tyrosine residues in the absence of other phenolic substrates. The side chains of lysine and tyrosine are more reactive than that of histidine and tryptophan. CONCLUSIONS: These results show that covalent protein modification by oxidized phenolics occurs preferentially via an initial dimerization and encompasses not only lysine and cysteine residues. Copyright © 2008 Society of Chemical Industry