球等鞭金藻胞内和胞外多糖的提取工艺

采用热水浸提法,通过一系列单因素试验,研究提取时间、提取pH 值、提取温度和液料比对球等鞭金藻胞内和胞外多糖提取的影响。在此基础上,通过正交试验进一步优化胞内和胞外多糖的提取工艺。最后,采用适宜提取工艺制备胞内和胞外粗多糖样品,并测定该样品中蛋白质和多糖含量。单因素试验结果表明,提取时间、提取pH 值和提取温度均能显著影响胞内和胞外多糖的提取。对胞内粗多糖提取率而言,提取时间180min、提取pH9 和提取温度70℃为最适宜的提取条件;当提取时间300min、提取pH10 和提取温度80℃时,更利于胞外粗多糖的提取。液料比对胞内和胞外粗多糖提取的影响较小,20:1(mL/g)为多糖提取合适的液料比;正交试验结果表明,胞内(胞外)多糖的适宜提取工艺为提取时间、提取pH 值、提取温度和液料比分别为180min(240min)、pH8(9)、70℃和15:1。粗多糖样品的蛋白质和多糖含量分别为1.18%(0.82%)和 22.1%(18.6%),很低的蛋白质含量和较高的多糖含量表明采用该提取工艺获得的粗多糖样品纯度较高,利于样品的后续分离纯化。     

微波法提取球等鞭金藻胞外多糖的工艺

采用微波法,通过一系列单因素试验,研究了时间、微波功率、温度和pH对球等鞭金藻胞外多糖提取的影响。在此基础上,利用正交试验进一步优化胞外多糖的微波提取工艺。最后,比较微波提取法和热水浸提法制备的球等鞭金藻胞外多糖样品的红外光谱,并测定样品中蛋白质和多糖含量。单因素结果表明,微波功率、温度和pH均能显著影响球等鞭金藻胞外多糖的提取。正交试验结果表明,微波法提取球等鞭金藻胞外多糖的适宜微波功率、温度和pH依次为500W、75℃和6。微波提取法和热水浸提法制备的多糖产率分别为64.7mg/g和41.7mg/g。其中,前者蛋白质和多糖含量分别为0.48%和32.7%,后者中蛋白质和多糖含量依次为1.86%和22.1%。综上所述,在球等鞭金藻多糖提取过程中,微波法明显优于热水浸提法。红外光谱测定表明,胞外多糖和胞内多糖在结构上存在某些相似性,即均含有酰氨基,且都含有以半乳糖为构架的分子模式;二者在结构上还存在明显差异,即前者不含硫酸基,也不存在β-吡喃环结构。     

固定化球等鞭金藻的生长及抑菌活性研究

分别选用悬浮培养法、海藻酸钙固定培养法和海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠(Alginate-chitosan-alginate,ACA)微胶囊法对球等鞭金藻(Isochrysisgalbana)进行培养,对其生长情况进行研究。并且用磷酸缓冲液、95%乙醇溶液、甲醇/甲苯(3∶1)、乙酸乙酯、丙酮5种溶剂提取藻细胞中的抑菌物质,以金黄色葡萄球菌(S.aureus)和大肠杆菌(Escherichiacoli)为指示菌,测得不同培养方法所得藻提取物的抑菌效果。通过试验表明ACA微胶囊法藻细胞生长周期长,抑菌物质含量高,抑菌效果最好。     

盐藻胞外多糖分离纯化方法研究

盐藻培养液经离心、超滤浓缩得胞外多糖粗品溶液,然后用乙醇沉淀,丙酮及无水乙醚洗涤,并冷冻干燥得胞外多糖（Exopolysaccharides,EPS）粗品。粗糖经双酶解、透析等初步纯化后,用DE-52离子交换柱层析分离纯化得两种EPS组分（EPSⅠ和EPSⅡ）,琼脂糖凝胶电泳鉴定各自为均一的成分。经检测,两组分的糖质量分数以葡聚糖为对照分别为61.34%和52.81%,蛋白质质量分数3.97%和1.35%,且核酸质量分数小于0.025%,达到了比较高的纯度。     

用激酶抑制剂法筛选球等鞭金藻抗肿瘤活性物质

酪蛋白激酶（Protein Tyrosine Kinases,PTKs）在细胞信号转导途径中起到关键作用,已成为新型抗肿瘤活性物质的重要靶点。实验采用激酶抑制剂法对球等鞭金藻（Isochrysis galbana）的乙酸乙酯、丙酮、正戊醇和水的溶剂萃取物进行检测,结果显示,正戊醇萃取物有较明显的激酶抑制剂活性,抑制率为38.94%;对该萃取物进行薄层层析分离,以丙酮-石油醚（1∶60,v/v）为展开系统,得到Rf值为0.6610的组分,该组分对PTKs具有抑制作用,抑制率为32.21%;对此组分进行硅胶柱层析,以丙酮作为洗脱剂得到的分离组分对PTKs具有强烈的抑制作用,抑制率为86.09%,该组分同时显示出较强的细胞毒活性,这个结果预示着该组分可能是球等鞭金藻中的目的活性物质;同时,激酶抑制剂法较细胞毒活性法方便快捷,灵敏度高,是一种极具潜力的高通量筛选抗肿瘤活性物质的模型。      

用激酶抑制剂法筛选球等鞭金藻抗肿瘤活性物质

酪蛋白激酶(Protein Tyrosine Kinases,PTKs)在细胞信号转导途径中起到关键作用,已成为新型抗肿瘤活性物质的重要靶点。实验采用激酶抑制剂法对球等鞭金藻(Isochrysis galbana)的乙酸乙酯、丙酮、正戊醇和水的溶剂萃取物进行检测,结果显示,正戊醇萃取物有较明显的激酶抑制剂活性,抑制率为38.94%;对该萃取物进行薄层层析分离,以丙酮-石油醚(1∶60,v/v)为展开系统,得到Rf值为0.6610的组分,该组分对PTKs具有抑制作用,抑制率为32.21%;对此组分进行硅胶柱层析,以丙酮作为洗脱剂得到的分离组分对PTKs具有强烈的抑制作用,抑制率为86.09%,该组分同时显示出较强的细胞毒活性,这个结果预示着该组分可能是球等鞭金藻中的目的活性物质;同时,激酶抑制剂法较细胞毒活性法方便快捷,灵敏度高,是一种极具潜力的高通量筛选抗肿瘤活性物质的模型。     

环境因子对球等鞭金藻脂肪酸含量和组成的影响

用气相色谱法分析了不同的光照强度、通气量及不同生长时间下生长的球等鞭金藻的脂肪酸组成及含量.结果表明,不同环境因素下生长的微藻,其脂肪酸组成及不饱和程度有差异.一定范围内高光照有利于总不饱和脂肪酸（TUFA）的积累,尤其有利于二十二碳六烯酸（DHA）和亚麻酸含量的增加,但是过高的光照反而不利于不饱和脂肪酸含量的增加;高的通气速率有利于TUFA及DHA含量的增加,当通气量为3 vvm时TUFA和DHA的含量均达到最大,并且DHA的含量一般在对数生长初期即达到最大,而TUFA含量则在稳定期后才达到最大.     

营养盐对球等鞭金藻生长及多糖等生化成分含量的影响

通过研究营养盐浓度对球等鞭金藻生长及其细胞生化成分含量的影响，探讨了球等鞭金藻细胞生长与其细胞内多糖、叶绿素、蛋白质营养成分的关系。结果表明，所选用的4种营养盐在一定的浓度范围内均对球等鞭金藻的生长和细胞生化成分有很大的影响，这4种营养盐的适宜浓度依次为NaNO_3-N10mg／L、FeCl_3-Fe0.10mg／L、KH_2PO_4-P0.6mg／L、Na_2SiO_3-Si0.3mg／L。     

球等鞭金藻海藻油的提取工艺

以乙醚/石油醚为溶剂提取球等鞭金藻海藻油。以料液比、乙醚/石油醚体积比、提取温度和提取时间为影响因素,海藻油得率为考察指标,通过单因素实验和正交实验,确定的最佳提取工艺条件为:料液比1∶15,乙醚/石油醚体积比1∶2,提取温度20℃,提取时间5 h;在此条件下,球等鞭金藻海藻油得率为(40.8±1.1)%。     

紫芝胞外多糖分离纯化及抗氧化性的研究

目的:探讨紫芝(Ganoderma Sinense)胞外多糖的分离纯化及抗氧化活性.方法:采用乙醇沉淀法、聚酰胺脱蛋白法,DEAE-52阴离子交换色谱柱法分离纯化紫芝胞外多糖;通过对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基的清除能力的测定确定抗氧化活性.结果:粗多糖经DEAE-52柱层析纯化得到三种多糖组分GSP1、GSP2和GSP3,均具有抗氧化活性.其中GSP2的抗氧化活性尤为明显,在1.6mg/mL时DPPH自由基清除率达到76.3％;在5mg/mL时羟自由基的清除率达到81.5％.结论:三种紫芝胞外多糖组分具有较强的抗氧化活性,其中GSP2最为明显.     

球等鞭金藻多糖的微波萃取工艺

采用微波法,通过单因素试验研究pH值、微波功率、萃取温度和萃取时间对球等鞭金藻多糖提取的影响。在此基础上,通过正交试验进一步优化多糖的微波提取工艺。最后,比较微波提取法和热水浸提法制备的球等鞭金藻多糖样品的红外光谱,并测定样品中蛋白质和多糖含量。单因素试验结果表明,pH值、微波功率、萃取温度和萃取时间均能显著影响球等鞭金藻多糖的提取。正交试验结果表明,微波法提取球等鞭金藻多糖的最佳工艺为pH9、微波功率600W、萃取温度90℃、萃取时间20min。微波提取法和热水浸提法制备的多糖产率分别为96.8mg/g和47.7mg/g。其中,前者蛋白质和多糖含量分别为1.08%和43.6%,后者中蛋白质和多糖含量依次为1.18%和22.1%。微波法与热水浸提法制备的多糖具有相似的红外光谱,表明微波提取法并不会破坏多糖结构。综上所述,在球等鞭金藻多糖提取过程中,微波法明显优于热水浸提法。     

黄粉虫抗菌肽的分离纯化及生物活性研究

本研究以黄粉虫为试材,采用碱性蛋白酶酶解黄粉虫蛋白制备获得了抗菌肽,并对其进行分离纯化,比较了不同组分及纯化后抗菌肽的抑菌活性、热稳定性及分子量。结果表明:大孔吸附树脂对蛋白酶酶解液动态吸附并梯度洗脱后得到5个组分,抑菌试验表明无水乙醇洗脱组分的抑菌活性最强。采用制备型HPLC对无水乙醇洗脱组分进一步纯化,得到两个组分(H-1,H-2),其中组分H-2对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均表现出较强的抑菌活性,且其最小抑菌浓度(MIC)为0.512 mg/m L。热稳定性试验表明,H-2具有较好的热稳定性,121℃加热20 min仍能保持较高活性。液质联用(LC-MS)结果表明,H-2的分子量为756.82u。本研究为黄粉虫抗菌肽的高效分离和纯化提供了科学依据,为黄粉虫抗菌肽在食品防腐中的应用提供了基础数据。     

紫苏籽多糖分离纯化及抗肿瘤活性

为了探究紫苏籽多糖（Perilla frutescens seed polysaccharide,PFSP）的抗肿瘤活性,利用传统方法从紫苏籽中提取粗多糖,利用DEAE-52纤维素和葡聚糖G-100柱层析分离纯化获得紫苏籽多糖,并测定该多糖对H22荷瘤小鼠免疫系统的影响。结果表明,紫苏籽粗多糖得率为8.38%,分离纯化后得到3个组分,分别命名为PFSP-1、PFSP-2和PFSP-3。PFSP-1由甘露糖、半乳糖、木糖及阿拉伯糖（物质的量之比为0.01∶0.06∶0.11∶0.81）组成,PFSP-2由甘露糖、木糖及阿拉伯糖（物质的量之比为0.28∶0.28∶0.41）组成,PFSP-3由鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖及阿拉伯糖（物质的量之比为0.013∶0.024∶0.040∶0.080∶0.120∶0.700）组成;3个组分均具有多糖特征吸收峰,为吡喃环型多聚糖。抗肿瘤实验表明,PFSP-2抑瘤率显著高于PFSP-1和PFSP-3(P<0.05);对PFSP-2进一步研究发现,与模型组相比,PFSP-2可显著降低乳酸脱氢酶、醛缩酶和白细胞介素（interleukin...     

桑黄胞内多糖免疫及抗氧化活性研究

通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠动物模型,考察桑黄粗多糖(SH)、纯化多糖组分(P-47000、P-8700)对增强免疫及抗氧化水平的变化情况,明确不同纯度多糖组分生物活性间的差异。结果表明：SH、P-47000、P-8700对环磷酰胺诱导的免疫功能低下小鼠具有不同程度的免疫促进作用,其顺序为：P-8700＞SH＞P-47000;P-47000的还原能力低于SH和P-8700,SH和P-8700还原能力相差不大;P-47000几乎对超氧阴离子自由基(O2－ ·)没有清除效果,P-8700和SH的清除率比较低,且P-8700略大于SH;P-8700对羟自由基( ·OH)具有较好的清除效果,清除率达到53.421%,且P-8700的清除率高于SH和P-47000,P-47000清除率最低;不同纯度多糖对DPPH自由基的清除效果均较高,SH达到93.221%;P-8700清除效果最低,为66.435%。     

铜绿微囊藻(Microcystic aeruginosa)胞内酸性多糖和胞外酸性多糖理化性质的比较研究

目的:研究比较铜绿微囊藻(Microcystic aeruginosa)胞内酸性多糖(IAPS)和胞外酸性多糖(EAPS)的理化性质、组分和结构,旨在将蓝藻水华作为一种天然植物资源进行综合开发利用。方法:采取不同的方法提取、分离、纯化得到IAPS和EAPS,并分别通过多种化学手段和HPLC、UV、IR、13CNMR等方法对IAPS和EAPS的分子量、单糖组成、糖醛酸、硫酸根等酸性基团和波谱学特征等进行了测定分析。结果硫酸咔唑法测定表明:IAPS糖醛酸含量为12.75%,而EAPS糖醛酸含量为10.74%;HPLC测定显示IAPS分子量(2.0025×105D)明显高于EAPS(7.0012×104D);IAPS主要由31.8341%D(+)木糖、33.0053%D-鼠李糖、4.1284%D-半乳糖、21.8689%L-阿拉伯糖,EAPS则由9.6549%D(+)木糖、19.2522%D-果糖、71.0930%葡萄糖;红外光谱和核磁共振图谱表明两者在结构上存在着显著的差异,这为研究两者的生理活性提供了物质基础。