3D皮肤模型法评价五味子油对H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用

运用3D皮肤模型法评价五味子油对H₂O₂诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用。利用水蒸气蒸馏法提取得到五味子油,采用GC-MS分析其化学成分,通过DPPH、ABTS自由基清除实验,以及H₂O₂诱导HaCaT细胞损伤2D、3D皮肤模型评价五味子油的抗氧化作用。结果表明,五味子油中主要化学成分包括依兰烯、β-喜马烯、L-α-蒎烯等37种化合物,五味子油对DPPH、ABTS自由基具有良好的清除效果,其清除率的IC50分别为5.6 mg/m L、9.4 mg/m L;五味子油能提高H₂O₂处理后的HaCaT细胞存活率,增加3D皮肤模型的表皮层厚度,降低白细胞介素-6 (Interleukin-6,IL-6)水平,上调SOD酶和CAT酶活性。研究结果证实,五味子油对H₂O₂诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤模型具有保护作用,可为五味子油皮肤抗衰老产品的研发奠定基础。     

茶氨酸对酒精诱导人肝HL7702细胞损伤的保护作用及机理

目的探究茶氨酸在酒精诱导人肝HL7702细胞损伤方面的保护作用及机理。方法选取500~1 000 mmol范围内,梯度设置为100 mmol的6个酒精浓度处理组对HL7702细胞进行初步处理,选择不同浓度茶氨酸培养HL7702细胞,MTT法测定细胞的存活率以确定酒精造模浓度和茶氨酸最适浓度范围。以不同浓度茶氨酸预保护模型浓度酒精处理过的细胞,测定细胞的存活率,检测其过氧化氢（H₂O₂）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶活性（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）及总抗氧化能力（T-AOC）的含量。结果初步确定酒精造模浓度为800 mmol;茶氨酸浓度在2 000 μg/mL以下对HL7702细胞无毒性,结合实际情况将茶氨酸给药浓度调整为200~800 μg/mL;与模型组相比,茶氨酸显著提高了酒精损伤模型中HL7702的存活率,对HL7702细胞内H₂O₂和MDA的生成起到了一定的抑制作用,而SOD、GSH-PX活性升高,T-AOC能力也增加。结论茶氨酸在不同方面均被证明对酒精诱导人正常肝细胞氧化损伤具有保护作用。其作用机理是茶氨酸通过抑制酒精刺激下抗氧化关键酶活性的降低及氧化反应中间产物的产生,避免人正常肝细胞在酒精诱导下发生氧化损伤及氧化应激反应。     

PNGF复合材料对PC12细胞GAP43和β-TubulinⅡ基因的调控

应用自行设计的RGD接枝的聚(羟基乙酸-L-赖氨酸-乳酸),复合聚乳酸、b-磷酸三钙和神经生长因子(NGF)制备神经导管材料(PNGF)。在体外制备材料浸提液,与PC12细胞共培养1 d、2 d和3 d,分别提取总RNA,通过实时定量PCR试验方法,观察PC12细胞GAP43和β-TubulinⅡ基因表达的变化。结果显示GAP43和β-TubulinⅡ基因的表达量明显高于对照组,其峰值出现在第二天。材料浸提液中NGF在诱导PC12细胞分化中起到显著作用。     

泽泻水提物抗氧化能力及对SIRT1蛋白表达影响的研究

[目的]探索泽泻水提物抗氧化能力及其可能的作用机制.[方法]采用H_2O_2(700umol/L)诱导HEK293T细胞氧化损伤,建立HEK293T细胞氧化损伤模型.通过泽泻水提物预处理,使用MTT法测定细胞存活率.使用实时定量PCR和ELISA方法,测定泽泻水提物预处理的HEK293T细胞sirt1基因转录水平和SIRT1蛋白表达水平.[结果]与H_2O_2对照组相比,泽泻水提物能够提高HEK293T细胞存活率.实时定量PCR结果显示,泽泻水提物能够明显上调sirt1 mRNA水平.ELISA结果显示泽泻水提物能够提高SIRT1蛋白水平.[结论]泽泻水提物能够减轻H_2O_2诱导的HEK293T细胞氧化损伤并抑制其凋亡.泽泻水提物抗氧化能力可能与其促进SIRT1蛋白表达有关.     

栝楼籽蛋白酶解物对氧化损伤HepG2细胞的保护作用

为研究栝楼籽蛋白酶解物(Protease hydrolysates of trichosanthes seed, PHTS)对氧化损伤的人肝癌细胞株HepG2的抗氧化保护作用,构建H₂O₂诱导的HepG2氧化损伤细胞模型,检测细胞存活率、细胞总谷胱甘肽(Glutathione, GSH)及细胞分泌NO情况;并分析过氧化氢酶(Catalase, CAT)和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)的表达情况。分别设置空白对照组、H₂O₂损伤组、PHTS实验组和GSH阳性对照组。结果显示：与空白对照组相比,H₂O₂损伤组的细胞存活率、细胞总GSH水平、NO分泌量、抗氧化酶CAT和SOD基因表达与蛋白表达水平均显著降低;在PHTS实验组,细胞存活率、总GSH水平、NO分泌量、CAT和SOD的基因表达与蛋白表达水平均明显增加(p<0.05),表明栝蒌籽蛋白酶解物可有效增强HepG2细胞的抗氧化保护作用。因此,栝楼籽蛋白酶解物具有细胞...     

丙烯酸钠与N-乙烯基吡咯烷酮共聚物的制备

通过 NH ₃ · H ₂ O/ H ₂ O ₂ 氧化还原引发体系引发丙烯酸钠( AANa)与乙烯基吡咯烷酮(NVP)共聚,制备了PAANa - co - PVP共聚物。通过FTIR对共聚产物进行了结构表征。在元素分析表征的基础上,采用FR法, KT法和YBR法对采用NH ₃ ·H ₂ O/ H ₂ O ₂ 引发时,AANa与 NVP共聚的竞聚率( r ₁,r ₂)进行了计算,其值分别为3 .296,0 .808。采用MTT法对所制备产物的体外细胞毒性进行了研究,结果表明所制备的产物具有良好的生物相容性。     

香豆素衍生物联合天麻素在抑制谷氨酸诱导神经细胞损伤中的作用

以谷氨酸诱导PC12细胞为研究对象,分为对照组、模型组(谷氨酸处理)、天麻素组(天麻素、谷氨酸处理)、CD(香豆素衍生物)组(CD、谷氨酸处理)和联合组(CD、天麻素、谷氨酸处理),采用噻唑蓝法测定细胞存活率,由酶标仪检测细胞培养液中谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶的活性和丙二醛的含量;Annexin V/PI染色经...     

D-半乳糖诱导HepG2细胞氧化应激模型的建立

以D-半乳糖为氧化应激诱导物,用不同浓度(0、37.5、75、150、300 mmol/L)D-半乳糖作用不同时间(24、48、72 h)诱导HepG2细胞氧化损伤,通过检测细胞存活率(MTT法)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,结合细胞周期分析,研究D-半乳糖的最佳诱导浓度。结果表明:同对照组相比,当D-半乳糖浓度为150 mmol/L时,诱导48 h后,细胞中MDA含量显著上升;细胞中SOD、GSH-Px活性显著降低;细胞周期受到影响,G1期的细胞比例上升,S期的细胞比例降低。D-半乳糖浓度为150 mmol/L,作用时间48h,能够建立D-半乳糖诱导Hep G2细胞氧化应激模型。     

乳酸脱氢酶A(ldha)基因的克隆与原核表达

乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶,在厌氧条件下能催化丙酮酸生成乳酸;当动物体内缺乏葡萄糖时,还可氧化乳酸生成丙酮酸并经葡萄糖异生途径转变为葡萄糖。通过反转录PCR获得了Hela细胞中的ldha基因,并将它克隆到pET28a(+)载体上,获得重组表达载体pET28a(+)-ldha。重组质粒通过转化法转入宿主E.coli BL21(DE3)溶源菌中。SDS-PAGE分析表明,在1.0 mmol·L-1异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)的诱导下,重组子成功表达了一条分子质量约为36 kDa的目标蛋白。     

正辛基葡糖苷的酶法合成

以正辛醇和葡萄糖为原料,采用表达β-葡萄糖苷酶的基因工程菌作为全细胞催化剂,合成了正辛基葡糖苷,考察了不同条件对反应的影响。结果表明,表达β-葡萄糖苷酶基因工程菌全细胞为合成正辛基葡糖苷的良好催化剂,在葡萄糖与正辛醇的质量比1∶5、催化剂用量占原料总质量2.0%、体系初始含水质量分数13%、反应温度52℃、反应时间36 h、pH=6条件下,葡萄糖转化率为58.91%,得到产物纯度大于99%。通过红外光谱、拉曼光谱、核磁共振氢谱对产物进行结构鉴定,表明合成产物为正辛基葡糖苷。     

β-桐酸抑制膀胱癌T24细胞生长及其与ROS的关系

研究了β-桐酸(β-ESA)对人膀胱癌T24细胞的生长抑制作用,阐明活性氧簇(ROS)产生与生长抑制作用的关系。利用MTT法检测细胞活力,DCFH-DA荧光探针检测ROS,二硫代二硝基苯甲酸比色法(DNTB)检测谷胱甘肽(GSH)的含量。MTT结果显示,β-桐酸对T24细胞有明显的生长抑制作用,呈时间剂量相关性(P<0.05);活性氧检测表明β-桐酸可以诱导ROS的产生(P<0.05);GSH含量检测表明GSH水平显著降低(P<0.05);加入ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)可以拮抗β-桐酸的作用(P<0.05)。实验结果表明,β-桐酸可抑制T24细胞的生长,其机制可能与诱导ROS的产生有关。     

地西泮保护黑色素细胞氧化损伤的作用及机制

构建了小鼠黑色素细胞B16F10的氧化应激模型,研究了地西泮对B16F10细胞氧化损伤的保护作用及相关机制。选取生长状态良好的B16F10细胞,采用细胞活力实验(MTT)确定氧化应激造模的双氧水浓度和地西泮的合适剂量范围,通过荧光检测验证地西泮对B16F10细胞氧化损伤的保护作用,采用免疫蛋白印迹方法(Western blot, WB)进一步探究地西泮产生保护作用的上游通路机制。实验结果发现,地西泮能够显著逆转细胞的氧化损伤,恢复细胞活力,升高应激状态下抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)的表达,降低促凋亡蛋白Bax(Bcl2-Associated X)的水平,最终保护氧化应激状态下的B16F10细胞。     

损伤-修复模型在药物作用癌细胞上的应用

在进化模型Crow-Kimura模型的基础上,引入药物剂量和修复作用,建立了药物作用于癌细胞的损伤-修复模型,研究了在几种药物作用下的不同癌细胞各状态的相对浓度随药物剂量的变化。模型预测了MCF-7细胞对核桃蛋白胃酶分解产物、bel 7402细胞对β-胡萝卜素氧化降解产物A以及Hela细胞、U20S细胞和SMMC-7721细胞对藏药纤毛婆婆钠乙酸乙酯提取物的半抑制浓度,给出了相应模型参数的取值,理论结果与实验数据高度符合。模型对于“肩型”和“马鞍型”相对存活率-剂量曲线关系的出现给予了合理解释,为之后药物作用于癌细胞的理论研究提供了新的思路,为相关药物作用于癌细胞的实验提供了参考。     

乳铁蛋白对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用及机制

研究乳铁蛋白（1actoferrin,LF）对脂多糖诱导的急性肺损伤（acute lung injury,ALI）的保护作用,并探讨其可能机制．清洁级雄性昆明小鼠腹腔注射LPS5mg／kg前1h或注射LPS后1h给予LF5mg／body,同时以2mg／kg地塞米松治疗组为阳性对照组．给予LPS12h后,收集左肺肺泡灌洗液．检测白细胞介素-10及肿瘤坏死因子-α的含量、总蛋白含量;离心后将沉淀重悬检测灌洗液中总细胞数．取右肺上叶速冻于-80℃冰箱,检测肺组织中髓过氧化物酶含量;中叶称湿、干重,计算肺湿／干重比;下叶进行HE染色,观察肺组织病理学改变．结果发现,LF能明显减轻肺泡腔出血、水肿、炎细胞浸润等病理过程,肺组织病理学评分明显降低（P〈0．05）;LF能降低肺组织MPO活性、肺泡灌洗液中总细胞、总蛋白含量、W／D和TNF-α含量（P〈0．05）;增加肺组织IL-10含量（P〈0．05）．这些结果说明,LF对LPS诱导的急性肺损伤有显著的预防和治疗作用．     

非洲猪瘟病毒P30蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

利用原核表达系统表达纯化重组非洲猪瘟病毒P30蛋白,并进一步制备抗P30重组蛋白的多克隆抗体,为非洲猪瘟病毒诊断试剂盒的研发提供实验材料和理论依据。根据GenBank中非洲猪瘟结构蛋白P30序列,经密码子优化后合成相应的基因序列,构建重组表达质粒pET-32a-P30并转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达纯化后获得重组P30蛋白,并制备抗P30的多克隆抗体。结果表明:16℃、0.5 mmol/L IPTG诱导表达12 h获得质量浓度为0.6 mg/mL以上的重组P30蛋白,Western blot证实原核表达的P30具有较好的免疫原性,ELISA检测纯化后的多克隆抗体效价高达1∶5120000,且具有良好的抗原特异性。     

外源核苷酸对肠上皮细胞增殖和迁移的作用

目的本研究通过对体外培养的大鼠小肠上皮细胞IEC-6添加核苷酸,探讨四种单核苷酸及其按母乳组成模式配制的核苷酸混合物对肠上皮细胞增殖和损伤后迁移的影响.方法采用MTT法测定核苷酸对细胞增殖的浓度-效应和核苷酸之间对细胞增殖效应的相互作用;采用IEC-6单层肠上皮损伤重建立模型测定细胞损伤后迁移;通过免疫组化检测TGFβ的表达.结果嘌呤核苷酸AMP和GMP分别在30(mol/L和150(mol/L及以上能显著抑制IEC-6细胞的增殖并表现浓度依赖,嘧啶核苷酸CMP仅在极高浓度(1440(mol/L)时对细胞增殖有一定的抑制作用, UMP和核苷酸混合物在受试浓度范围内未见明显作用,但是,CMP和UMP能解除嘌呤核苷酸AMP和GMP对细胞增殖的抑制.180(mol/L核苷酸混合物能促进细胞损伤后迁移,但不诱导TGFβ的表达.结论嘌呤核苷酸抑制肠上皮细胞增殖,而嘧啶核苷酸能解除嘌呤核苷酸的抑制作用.核苷酸混合物能通过非TGFβ依赖的途径促进肠上皮细胞的损伤后迁移.     

利用SUMO技术表达可溶性的拟南芥AtRD22蛋白

为了体外获得可溶性的拟南芥AtRD22蛋白,以拟南芥叶片提取的总核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)为模版,反转录获得AtRD22的全长互补脱氧核糖核酸(complementary deoxyribonucleic acid,c DNA),分别构建AtRD22的原核重组表达载体p ET32a-RD22和p SUMO-RD22,并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行AtRD22蛋白的表达.在0.3 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-dithiogalactopyranoside,IPTG)诱导下,探索不同培养温度和诱导时间对可溶性蛋白表达的影响.结果表明,在实验条件下,转化p ET32a-RD22的重组菌表达AtRD22蛋白的总量高于转化p SUMO-RD22的重组菌,但后者的可溶性AtRD22蛋白表达量明显高于前者.当诱导温度为28或16℃,时间分别为6.0或8.0 h以上时,转化p SUMO-RD22的重组菌中可溶性目的蛋白的表达量相对较大.为进一步在体外研究AtRD22蛋白质的结构和功能奠定了基础.     

基于抗氧化的大豆异黄酮对PC12细胞的神经保护作用

实验研究了20.00μg/mL的单一染料木黄酮(GEN)、大豆黄素(DAI)及其混合溶液(GEN-DAI)对PC12细胞的存活率、形态、线粒体膜电位以及超氧化物歧化酶活力和抑制率的影响。结果表明:3种溶液对上述指标均没有显著影响,但GEN提高了活性氧水平,相对荧光强度和丙二醛含量有所升高;DAI和GEN-DAI溶液显著地降低了乳酸脱氢酶漏出率,谷胱甘肽含量分别增加到(297.27±9.47)μmol/(g·prot)、(269.90±0.00)μmol/(g·prot);GEN-DAI混合溶液综合增强了胆碱系统的代谢,提高了乙酰胆碱含量。GEN-DAI混合溶液比两种单一组分溶液能够更有效地提高PC12细胞抗氧化系统活力。     

含1,2,3-三唑基的化合物诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡

合成了化合物3-[(4-苯基-1H-1,2,3-三唑基-1)-甲基]-4-氨基-5-巯基-1,2,4-三唑(APTMTT),并用体外培养的肝癌细胞BEL-7402对其进行抗肿瘤活性测试。实验发现,APTMTT对人肝癌细胞株BEL-7402增殖有明显的抑制作用,抑制率呈浓度和时间依赖性。线粒体膜电位(ΔΨm)和ATP酶活性实验证明,APTMTT能够造成线粒体的损伤。DNA片段化检测实验结果,初步验证化合物APTMTT能够诱导细胞调亡。     

分心木水提物对大鼠慢性非细菌性前列腺炎的作用

探究分心木水提物对大鼠慢性非细菌性前列腺炎的作用.通过脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞炎症模型，发现分心木水提物对LPS诱导巨噬细胞释放NO的抑制作用最好.利用角叉菜胶建立大鼠慢性非细菌性前列腺炎(CNP)模型，发现分心木水提物能在一定程度上减轻大鼠前列腺组织水肿及炎性细胞浸润，降低CNP大鼠血清中前列腺特异性抗原(PSA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E₂(PGE₂)和前列腺组织中丙二醛(MDA)的含量，降低前列腺组织中环氧合酶2(COX-2)的基因表达水平，提升前列腺组织中NF-E2相关因子2(Nrf2)的基因表达水平.实验结果表明：分心木水提物可能通过COX-2/PGE₂和Nrf2两条通路、多成分协同作用的方式抑制炎症因子的生成以及减轻氧化应激反应，进而对CNP大鼠起到治疗作用.