源于地龙蛋白的抗氧化肽鉴定与构效关系

为探究外源蛋白酶预酶解处理对地龙蛋白胃肠消化程度和胃肠消化后抗氧化活性的影响。该研究利用五种蛋白酶制备了不同的地龙蛋白酶解物,然后通过体外胃肠模拟消化探究这些酶解物的水解度、分子量分布和体外抗氧化活性的变化。五种蛋白酶酶解物中,碱性蛋白酶酶解物的水解度最高,为40.8%,其对DPPH、ABTS自由基的清除能力分别为27.36、175.46 μmol TE/g,ORAC值为0.70 μmol TE/mg。碱性蛋白酶酶解物经胃肠消化后的水解度、DPPH自由基清除率、ORAC值相比于地龙蛋白直接胃肠消化所得产物（EWP）分别提高了94.06%、72.21%及120.00%。GHEWP中鉴定出10 823条分子量<3 ku的肽,通过bioware.ucd.ie进行活性阈值评分筛选出活性评分最高的11个肽进行合成,验证活性,其中ATSGFFVY、HCFVLY、HLASGWY、HRYSDF、HYANMY的综合抗氧化能力较好,量子化学计算结果表明：ATSGFFVY、HCFVLY、HRYSDF、HYANMY的活性位点可能分别位于Tyr-8、Tyr-6、Tyr-3、Tyr-2上;HLASGWY的活性位点可能位于Trp-6上。该研究表明碱性蛋白酶预酶解可提高地龙蛋白的消化程度,增强其胃肠消化产物的抗氧化活性。     

蛹虫草多糖提取工艺优化及其抗菌、抗氧化活性

为研究蛹虫草多糖的提取工艺及其抗菌、抗氧化活性,以蛹虫草为原料,采用双频逆流聚能式超声波辅助法提取蛹虫草多糖。以蛹虫草多糖提取率为指标,在单因素试验基础上,通过响应面试验优化其提取工艺。结果表明,蛹虫草多糖最佳提取工艺条件为超声波功率420 W、超声温度60℃、提取时间50 min,该条件下蛹虫草多糖提取率为7.17% 。体外抗氧化试验结果表明,蛹虫草多糖对DPPH自由基、羟基自由基的半数抑制浓度（IC50）分别为36.05 μg/mL和0.33 mg/mL,具有较强的清除能力。体外抗菌试验结果表明,蛹虫草多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有一定的抑制作用,最低抑菌浓度分别为0.4 mg/mL和0.8 mg/mL,且随着质量浓度的增加而不断增强。     

甲鱼蛋蛋白水解物的体外消化及对抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性的影响

抗氧化及抑制α-葡萄糖苷酶活性是糖尿病防治的有效策略。用木瓜蛋白酶水解甲鱼蛋蛋白,采用超滤法分离小分子质量水解物组分(<2.5 ku);采用体外模拟胃及胃肠道消化模型,探究分子质量<2.5 ku组分的体外消化特性及抗氧化与α-葡萄糖苷酶抑制活性的变化。结果表明:制备的甲鱼蛋分子质量<2.5 ku组分具有良好的色泽(黄绿色),水溶液无色透明。经胃消化,分子质量<2.5 u组分的色谱峰变化不大,表明其在胃中的稳定性较好。而经胃肠道消化,原来的色谱峰降低,有些峰甚至消失,形成了新的色谱峰,肽含量显著升高,表明分子质量<2.5 ku组分中的部分活性肽被胃肠道消化产生更短的肽。分子质量<2.5 ku组分的原液及其胃消化产物和胃肠消化产物的DPPH自由基清除率的IC50值(mg/mL)分别是13.61,6.79,3.56;ABTS自由基清除率的IC50值(mg/mL)分别是18.21,179.40,>300;α-葡萄糖苷酶抑制率的IC50值(mg/mL)分别是17.96,10.81,<1。甲鱼蛋<2.5 ku组分具有潜在的降血糖作用,经胃肠消化后产物仍具有较强甚至更好的降血糖潜力。     

蛹虫草多酚提取工艺优化及其抗氧化活性

以蛹虫草子实体为原料,采用响应面设计优化蛹虫草多酚提取工艺,分析蛹虫草多酚的抗氧化活性。以多酚的得率为指标,在单因素试验基础上,利用Box-Behnken设计进行响应面试验,确定蛹虫草多酚最佳提取工艺,并对多酚体外总抗氧化能力及DPPH自由基、羟自由基清除能力进行分析。结果显示：蛹虫草多酚最佳提取工艺为提取温度51℃、提取时间1.6 h、液料比49∶1(mL/g),优化条件下多酚得率为6.03 mg/g。抗氧化活性分析结果表明：浓度为0～0.4 mg/mL时,蛹虫草多酚总抗氧化能力随着质量浓度的增加而增强,且始终高于同等浓度的维生素C溶液;多酚溶液对DPPH自由基的半抑制质量浓度为19.52μg/mL,为维生素C溶液的75.25%;对羟自由基半抑制质量浓度为86.47μg/mL,是维生素C溶液的8.31%。蛹虫草多酚的提取工艺可行,蛹虫草多酚具有较强的抗氧化活性。     

低分子量核桃多肽抗氧化及抗肿瘤活性研究

研究了核桃发酵多肽的抗氧化效果及抗肿瘤活性。结果表明,此多肽具有一定的抗氧化及抗肿瘤活性,当样品浓度为2 mg/mL时其DPPH自由基清除率为91.7%,对人小肠癌细胞（Caco-2）的IC50值为3.67 mg/mL。对四组分发酵多肽（分子量>30 ku、10 ku~30 ku、5 ku~10 ku及<5 ku）进行抗肿瘤活性的试验及筛选,发现<5 ku组份有较强的抗肿瘤活性,表明低分子量多肽对Caco-2细胞增殖具有较强的抑制作用（IC50值为2.63 mg/mL）,且该样品不仅抑制Caco-2细胞生长,对人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖也有显著的抑制作用（IC50值为3.76mg/mL）,而对非肿瘤细胞大鼠小肠隐窝上皮细胞（IEC-6）未显示显著的抑制作用。以上结果表明,核桃粕发酵产生的小分子活性多肽有明显的抗氧化及抗肿瘤活性。     

不同胃肠消化阶段紫花芸豆蛋白的抗氧化活性和结构特征

以紫花芸豆蛋白为原料,通过胃肠模拟消化模型解析胃肠不同消化阶段芸豆蛋白水解物的抗氧化活性及结构变化。结果表明:经胃肠蛋白酶消化,芸豆蛋白的溶解度、水解度显著提高,与胃部消化相比,胃肠消化芸豆蛋白水解度增加120.27%,溶解度下降3.46%。电泳图谱及抗氧化活性分析表明,肠道消化期间,因胰蛋白酶作用,蛋白亚基水解作用增强,导致低分子质量肽段增加,分子质量<14.4 ku的亚基条带加深,与胃部模拟消化相比,水解产物抗氧化能力显著增强,总抗氧化能力、Fe还原能力、ABTS清除率分别提高25.31%,85.76%,53.80%。对胃肠连续消化0.5,2,3 h水解产物超滤分级,随着消化时间的延长,分子质量<10 ku的消化产物增加,使水解产物表现出较强的抗氧化能力。傅里叶变换红外光谱分析表明,胃蛋白酶水解使蛋白质结构展开,空间结构较为紧凑的β-折叠被破坏,变为较松散的β-转角,继续肠道消化后芸豆蛋白稳定结构恢复,β-折叠由34.63%增至41.29%。胃肠消化产物中暴露巯基、总巯基含量、含硫氨基酸总量随水解程度的加深持续下降,肠道消化后,消化产物的暴露巯基、总巯基含量、含硫氨基酸总量分别降低为(4.94±0.23)μmol/g、(6.14±0.20)μmol/g、2.08 μg/g。SEM扫描分析结果表明,水解使芸豆蛋白呈絮状聚集,与胃部消化相比,肠道模拟消化后蛋白微观结构有序性增加,消化产物表面呈细密颗粒状。     

分子量对酪蛋白多肽抗氧化活性的影响

在对酪蛋白酶解产物制备工艺进行优化的基础上,对不同分子量抗氧化肽(>3ku,1～3ku,<1ku)的抗氧化活性进行了评价。首先对酶的种类、酶底物比及水解时间进行了单因素实验,最终确定采用碱性蛋白酶,在pH8.0,55℃,底物浓度5%,酶底物比0.192AU/g的条件下,酶解4h所得水解物抗氧化活性最高。经过超滤和凝胶过滤层析分离获得不同分子量的抗氧化肽,并采用2,2′-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS+.)、羟自由基和超氧自由基清除活性评价其抗氧化性。结果表明,ABTS+.清除活性与分子量呈负相关(r=-0.898,p<0.01),分子量低于1ku组分活性最强(2mg/mL,Trolox当量为2.08±0.05mmol/L);分子量低于3ku的抗氧化肽羟自由基清除活性较高(IC50:1～3ku,4.43±0.03mg/mL;<1ku,4.35±0.06mg/mL);分子量高于3ku组分主要分布在3～5ku,超氧自由基清除活最强(10mg/mL,66.1%±1.0%)。     

HPLC法同时测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇的含量

建立一种利用高效液相色谱法同时测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇含量的方法,并对沈阳、广东、江苏3个产地的蛹虫草进行测定结果的比较。结果表明,虫草素、腺苷和麦角甾醇分别在5μg/mL～65μg/mL、5μg/mL～35μg/mL和25μg/mL～300μg/mL范围内线性关系良好,江苏的虫草素含量最高,为1.3 mg/g,广东的含量最低,为0.5 mg/g,广东的腺苷和麦角甾醇含量最高分别为1.9、5.8 mg/g。不同产地蛹虫草中的腺苷、虫草素和麦角甾醇的含量差异较大;该方法准确性高,重复性好,适用于蛹虫草中腺苷、虫草素和麦角甾醇的含量测定,为其质量评价提供参考。     

大米蛋白酶解物的ACE抑制活性研究

为了考察大米四种蛋白经模拟体外消化后能否产生ACE抑制活性肽及其活性状况,本研究以大米为原料,Osborne法提取大米四种蛋白。体外模拟胃肠道消化过程,研究消化酶解ACE抑制活性肽产生情况及其活性大小,同时检测酶解产物的水解度和分子量分布。实验结果表明,大米四种蛋白经胃蛋白酶消化30min,酶解产物的ACE抑制活性均达到较高水平,随后经过胰蛋白酶作用,酶解产物的ACE抑制活性下降。大米清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白的4h消化产物半抑制浓度IC50值分别为1.45mg/mL、0.91mg/mL、1.19mg/mL和0.75mg/mL,分子量集中在1000u以下,是易于被人体吸收的ACE抑制活性肽。同时,未经酶解的蛋白几乎没有ACE抑制活性。结果说明大米四种蛋白的体外消化酶解物具有不同大小的ACE抑制活性,其中大米谷蛋白消化产物的ACE抑制活性最高,人体正常食用大米蛋白,经胃肠消化可以产生被人体吸收的ACE抑制活性肽。     

体外消化对三文鱼皮胶原低聚肽抗氧化活性的影响

本研究以三文鱼皮为原料通过酶解法制备三文鱼皮胶原低聚肽,并进行体外模拟消化实验,通过分子量分布分析、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、总抗氧化能力（ABTS法）以及活性氧ROS实验,探究三文鱼皮胶原低聚肽经模拟胃、肠道消化后抗氧化活性的变化。结果表明:经模拟消化实验后,三文鱼皮胶原低聚肽的重均分子量轻微减少,变化不超过4%;胃蛋白酶消化前后,DPPH自由基清除能力IC₅₀值分别为11.1、12.3 mg/mL,胰蛋白酶消化前后,IC₅₀值分别为12.5、14.6 mg/mL;胃蛋白酶消化前后,羟自由基清除能力IC₅₀值分别为12.2、13.2 mg/mL,胰蛋白酶消化前后,IC₅₀值分别为10.7、11.5 mg/mL;胃蛋白酶消化后,总抗氧化能力下降不超过13%,胰蛋白酶消化后,总抗氧化能力下降不超过19%;胃蛋白酶消化后,ROS清除能力提高不超过3%,胰蛋白酶消化后,ROS清除能力提高不超过5%。这表明三文鱼皮胶原低聚肽具有良好的消化稳定性和抗氧化活性,为其在抗氧化功能性食品的开发提供了理论基础。     

鸡蛋卵转铁蛋白过敏原的体外模拟消化特性

采用体外静态消化模式,分别模拟婴幼儿和成年人的胃液、小肠液以及小肠刷状缘膜酶消化鸡卵转铁蛋白,利用Tricine-SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS对消化产物进行分析,研究鸡蛋蛋清过敏原卵转铁蛋白的消化特性.结果表明:婴幼儿和成年人的模拟胃液、小肠液以及小肠刷状缘膜酶都能够消化卵转铁蛋白.在模拟婴幼儿消化体系中...     

蛹虫草多糖的化学修饰及体外抗氧化能力

将醇沉法得到的粗多糖,经柱层析得多糖纯品。对多糖纯品进行硫酸化、羧甲基化、乙酰化化学修饰,用于体外抗氧化活性研究。纯化后的蛹虫草多糖可以被多种化学试剂修饰,其取代度大小的顺序是：羧甲基化＞乙酰化＞硫酸化;修饰后的多糖表现出不同程度的抗氧化活性,其中羧甲基化和硫酸化可以明显提高多糖的抗氧化能力,对烷基自由基清除率提高最大,分别达到95.19%和73.58%,其次是清除羟自由基和超氧阴离子自由基,乙酰化修饰后抗氧化能力有所下降。因此,采用合适的修饰方法,可以明显提高蛹虫草多糖的抗氧化活性。     

模拟胃肠道消化过程中迷迭香提取物总酚及抗氧化活性变化

本文研究了迷迭香提取物在模拟胃肠道消化过程中总酚含量及抗氧化活性的变化规律,并对其总酚含量变化与抗氧化活性进行相关性分析。结果表明,迷迭香提取物消化产物中总酚含量随模拟胃消化时间的延长而升高,而在模拟肠消化过程中显著降低(P<0.05)。经模拟胃消化180 min后,总酚含量显著升高了17.88%(P<0.05),而经模拟肠消化120 min后,总酚含量显著降低了19.64%(P<0.05)。经模拟胃消化180 min,消化产物对DPPH·和超氧阴离子自由基的清除能力分别显著提高了20.36%和22.07%(P<0.05),铁还原能力(Ferric ion reducing antioxidant power,FRAP)显著提高了11.76%(P<0.05)。而经模拟肠消化120 min后,消化产物对DPPH·和超氧阴离子自由基的清除能力分别显著降低了74.08%和50.00%(P<0.05),FRAP显著降低了52.13%(P<0.05)。此外,迷迭香提取物消化产物的抗氧化活性与其总酚含量之间存在良好的正相关性。以上结果表明,模拟胃肠道消化过程显著影响迷迭香多酚的含量和抗氧化活性。     

北虫草多糖提取工艺优化及其细胞氧化损伤保护作用

目的:优化北虫草多糖的提取工艺,研究北虫草多糖对血管平滑肌细胞氧化损伤的保护作用。方法:采用L₉(34)正交实验法优化多糖提取工艺,利用羟自由基法、DPPH自由基法和FRAP法检测北虫草多糖清除自由基的能力。在细胞水平上构建过氧化氢诱导细胞氧化损伤模型,采用MTT法、ROS细胞染色法评估北虫草多糖对过氧化氢诱导大鼠主动脉平滑肌细胞氧化损伤的保护作用。结果:北虫草多糖的最佳提取条件为:提取温度90 ℃,料液比1:30 g/mL,提取次数3次,提取时间3.0 h,最高得率为7.94%±0.16%。在多糖浓度为1.6 mg/mL时对羟自由基和DPPH自由基的清除能力以及总抗氧化能力分别为75.57%±1.39%、80.23%±2.75%和(0.22±0.01) mmol/mg。细胞实验表明北虫草多糖可显著抑制过氧化氢诱导细胞内ROS生成,提高细胞存活率。结论:成功优化北虫草多糖提取工艺,北虫草多糖具备良好的体外清除自由基的活性,对由氧化应激所导致的心血管疾病中起到很好的防治意义。     

体外模拟消化芝麻蛋白产生多肽的抗氧化性分析

为证实芝麻蛋白在人体内消化可产生抗氧化肽,采用体外模拟消化芝麻蛋白,分析芝麻蛋白水解产生多肽的组成与抗氧化活性。结果显示:在体外模拟消化模型中,芝麻蛋白在1 h内丧失原有亚基结构,最终水解为相对分子质量在15 kDa以下的多肽;水解产生的多肽具有抗氧化性,其中胃蛋白酶水解产生的多肽具有较强的DPPH自由基清除能力,而胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶的水解有助于提升多肽的ABTS自由基清除能力。上述结果表明,芝麻蛋白在人体内消化会产生抗氧化肽,不同消化阶段的芝麻多肽组成有差异,从而造成抗氧化活性的差别。     

葛仙米藻胆蛋白的体外消化特性

研究葛仙米藻胆蛋白在体外模拟胃液和肠液的消化产物性质,重点测定不同消化时间产物的可溶性蛋白质、游离氨基含量变化及其抗氧化作用,并利用HPLC法测定消化产物分子质量变化情况。结果表明：在胃液和肠液消化作用下蛋白质含量均呈现下降趋势,而游离氨基含量呈现上升趋势,消化产物较初始产物对ABTS+·和脂质过氧化具有更强的抑制作用,但对·OH的清除能力却有所下降;偏相关分析结果表明,与葛仙米藻胆蛋白消化产物的抗氧化作用紧密相关的是消化产物中的分子质量为6ku和0.2ku的肽类。     

米发糕胃肠水解物抗氧化性及肽段差异性分析

以籼米粉为原料,三种发酵剂(酵母菌ZSM-001;酵母菌ZSM-001与米根霉ZSM-003;安琪酵母与酒曲发酵剂)制作米发糕,通过凝胶色谱测定其水提物和胃肠水解物分子质量分布,基于液相色谱-四级杆飞行时间质谱(TOF LC/MS/MS)研究肽的差异性,并进行胃肠水解物的抗氧化活性评价。结果表明,米发糕经胃肠水解后,其抗氧化活性提升,分子质量集中在3 ku以下,小分子组分(分子质量3 ku)的Fe~(2+)螯合能力和还原能力较其他组分高。发酵剂组合对米发糕胃肠水解物的肽段数量、疏水性和抗氧化性有显著影响,以安琪酵母与酒曲复合发酵制备米发糕的胃肠水解物中分子质量小于3 ku组分的肽段数最多,疏水性较强,且Fe~(2+)螯合能力最大,还原能力较好。     

模拟消化中小扁豆活性物质释放和抗氧化能力变化

为了解小扁豆中活性物质在消化过程的变化规律,以白、红、黑、绿4种颜色小扁豆为原料,采用体外模拟消化模型研究口腔、胃和肠消化过程中多酚、黄酮和花青素等活性物质释放和抗氧化能力变化。结果表明：4种颜色小扁豆多酚在消化过程中逐渐释放,肠消化阶段释放量最大,模拟消化结束时,白、红、黑、绿小扁豆多酚释放量分别为1.76、1.91、1.94和2.56 mg GAE/g;黄酮和花青素在胃消化阶段释放量最大,模拟消化结束时,黄酮释放量分别为0.82、1.75、4.15和3.92 mg R/g,花青素释放量分别为0.06、0.15、0.19和0.20 mg/g;黑、绿小扁豆活性物质释放量高于红、白小扁豆。模拟消化过程中,不同消化阶段小扁豆消化产物抗氧化能力具有显著差异（P<0.05）,胃消化阶段4种颜色小扁豆清除DPPH·能力较强,进入肠消化后,DPPH·清除能力显著减弱（P<0.05）,绿色小扁豆消化产物对DPPH·清除能力和铁离子还原力最强。相关性分析表明黄酮释放量和小扁豆抗氧化能力相关性更强,黄酮是小扁豆的主要抗氧化物质。