海藻酸钠固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶的制备及其性质研究

研究了以海藻酸钠包埋法制备固定化S-腺苷甲硫氨酸（sAM）合成酶的条件,并考察了固定化酶的酶学性质。结果表明,最适固定化条件为：海藻酸钠质量分数3％、CaCl2质量分数4％、SAM合成酶加量（以每克海藻酸钠计）75mg、固定化时问30min,在此条件下,固定化酶活力回收率达到42％。固定化酶热稳定性较好,在50℃下保温5h仍保留69％的酶活力,而游离酶则完全失活;固定化酶在碱性条件下的稳定性较好,在pH值7．5～9．0的缓冲溶液中4℃下保温10h仍保留84％以上的酶活力;将固定化酶用于SAM的合成,连续反应5批次后,仍保留82％的酶活力。     

氨基树脂固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶的研究

以氨基树脂为载体对S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶进行固定化,优化了酶的固定化条件并对固定化酶的性质进行了研究。优化的固定化条件为:戊二醛体积分数5%、SAM合成酶添加量20mg·g-1、固定化时间5h。所制备的固定化SAM合成酶的酶活力为476.8U·g-1,酶活力回收率为74.5%。与游离SAM合成酶相比,固定化SAM合成酶的稳定性大幅提高,在50℃孵育5h酶活力仍保留61.2%,而游离SAM合成酶则完全失活;在pH值为6.0~6.5、8.0~9.5的缓冲溶液中,固定化SAM合成酶也更加稳定;固定化SAM合成酶连续催化反应10批次,酶活力保留86.3%;固定化SAM合成酶在4℃储存30d,酶活力保留81.4%。固定化SAM合成酶米氏常数KATPm=0.14mmol·L-1,KLm-Met=0.28mmol·L-1。     

高效液相色谱法分析胞内S-腺苷-L-甲硫氨酸含量及其合成酶活性的优化研究

对重组毕赤酵母胞内S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)含量以及SAM合成酶活性的高效液相色谱(HPLC)测定方法进行了优化。通过调整流动相浓度和洗脱程序,建立了保留时间适中、分离效果好的SAM定量分析方法。结果表明,SAM浓度在0.05～0.5 g·L-1时,其峰面积与浓度线性关系良好,相关系数为0.99996,平均回收率...     

海藻酸钠明胶协同固定化黑曲霉脂肪酶

以海藻酸钠明胶为复合载体,采用包埋法制备固定化黑曲霉脂肪酶,考察了海藻酸钠、明胶浓度等因子对固定化效果的影响,比较固定化酶和游离酶对温度、pH等条件的稳定性。结果表明,制备固定化黑曲霉脂肪酶的最优条件为:海藻酸钠、明胶浓度分别为1.25%和0.5%,CaC l2浓度为10%,给酶量为450 IU/g;固定化酶最适温度为35℃,最适pH为9.0,常见有机溶剂和金属离子对固定化酶的活力影响较小。     

S-腺苷甲硫氨酸制备方法的研究进展

S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是生物体内重要的生理活性物质,参与多种生化反应,临床上被广泛用于治疗抑郁症、神经紊乱、肝病、关节炎等.综述了SAM制备方法的研究进展,述及的SAM制备方法包括化学合成法、微生物发酵法、体外酶促合成法以及全细胞催化法.     

大肠埃希菌与酿酒酵母偶联合成S-腺苷甲硫氨酸

目的为大规模工业化生产S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)提供一套经济合理的生产工艺。方法将经DNA序列测定正确的SAM合成酶基因(SAMS)片段,经Eco RⅠ和NotⅠ双酶切,亚克隆至大肠埃希菌表达载体p ET-28a上,构建SAMS基因重组表达质粒p ET-28a-SAMS。将重组表达质粒转入大肠埃希菌表达宿主BL21(DE3),构建大肠埃希菌表达菌株BL21(p ET-28a-SAMS)。采用混合悬浮培养法,利用含有SAMS基因的重组大肠埃希菌BL21(p ET-28a-SAMS)中的SAM合成酶系和酿酒酵母JM-310中的ATP生物合成酶系,构建一个以葡萄糖为能源的中间偶合ATP再生系统,并对两种细胞的偶联合成比例、偶联时间、通透剂的种类及浓度、偶联缓冲液主要成分的浓度进行优化。结果经双酶切及菌落PCR鉴定证明,重组表达质粒p ET-28a-SAMS及大肠埃希菌表达菌株BL21(p ET-28a-SAMS)构建正确。大肠埃希菌BL21(p ET-28a-SAMS)与酿酒酵母的最佳偶联合成比例为4∶1,最佳偶联时间为5 h,添加5%甲苯通透效果最好,200 mmol/L磷酸缓冲液、200 mmol/L葡萄糖、10 mmol/L腺苷、30 mmol/L Mg Cl2·6H2O、30 mmol/L L-甲硫氨酸为最适偶联缓冲体系。最佳偶联条件下,偶联系统中SAM的浓度最高达1.7 g/L,对照组中SAM的浓度为0.17 g/L。结论本研究建立的方法操作方便,工艺简单,为SAM的廉价生产提供了一条新的途径。     

反相高效液相色谱法测定酶促转化法制备的S-腺苷甲硫氨酸

反相高效液相色谱法测定酶促转化法制备的S-腺苷甲硫氨酸,采用Luna C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为100%0.02 mol/L乙酸铵,用乙酸调pH值至4.0;流速为1.0 mL/min,用二极管阵列检测器检测,检测波长为254 nm,在200~800μg/mL范围内线性良好(r=0.9997),检出限为2.3 ng。     

重组大肠杆菌全细胞催化合成S-苷甲硫氨酸

从大肠杆菌(E.ColiK12)基因组DNA中克隆出甲硫氨酸腺苷转移酶基因,构建了能高效表达甲硫氨酸腺苷转移酶的重组大肠杆菌E.ColiJM109(pBR322-MAT)。将重组大肠杆菌细胞用于催化合成S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的研究中。实验发现,用φ(甲苯)=2%的水溶液对重组细胞进行通透化处理后,能大幅提高SAM的产率。探讨了底物浓度、温度、pH、反应时间以及菌体密度对反应转化率的影响。最佳反应条件为:底物浓度(ATP)30 mmol/L,反应温度35℃,pH=7.0,反应时间8 h,细胞密度80 g湿细胞/L反应液。在此条件下,底物ATP的转化率超过95%。     

S-腺苷酰-L-甲硫氨酸对肝癌细胞HepG2增殖、迁移及癌基因C-myc表达的影响

目的探讨S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAMe)对肝癌细胞HepG2增殖、迁移及癌基因C-myc表达的影响,为深入研究SAMe在肝癌治疗中的作用奠定基础。方法体外培养HepG2细胞,MTT法检测不同浓度SAMe作用不同时间对HepG2细胞增殖的影响;细胞划痕法检测最适浓度SAMe对HepG2细胞迁移能力的影响;RT-PCR、免疫细胞化学法及Westernblot法检测SAMe对HepG2细胞癌基因C-myc转录、蛋白定位及表达的影响。结果终浓度为15.0μmol/L的SAMe处理细胞5d,细胞抑制率达54.6%,且抑制作用呈时间与剂量依赖性;经15.0μmol/LSAMe处理的细胞迁移能力明显下降,愈合速率为对照组的76.78%;细胞中癌基因C-myc的转录和蛋白表达均明显下降,蛋白定位无明显变化。结论 SAMe可通过降低C-myc的表达,抑制HepG2细胞的增殖和迁移,为肝癌治疗性药物的研究提供了一个新的方向。     

淀粉凝胶强度及其影响因素研究

研究了淀粉凝胶以及添加了食品添加剂的改性淀粉凝胶的强度及其影响因素,包括淀粉的浓度、体系的pH值、凝胶陈化时间以及金属离子浓度等对淀粉凝胶强度的影响。实验结果表明:控制淀粉浓度为15%时,明胶的添加量为2.0%、海藻酸钠的添加量为1.5%、凝胶陈化时间为7 d、体系pH值为6~7、钙离子含量为1.0%时,淀粉凝胶的强度达最大值;海藻酸钠和明胶对淀粉凝胶强度具有明显的增强作用。     

海藻酸钠及其共混溶液的流变性研究

研究了海藻酸钠溶液,海藻酸钠与羟甲基纤维素、丙三醇、明胶、粒子填充剂等共混溶液的流变性能。结果表明:海藻酸钠溶液属于切力变稀的非牛顿流体;随溶液浓度的提高,粘流活化能增加;海藻酸钠相对分子质量增大,其溶液的结构粘度指数增大。海藻酸钠共混溶液的表观粘度随羟甲基纤维素的加入而增大;随明胶和丙三醇的加入而减小;随粒子填充剂的加入,先增加后减小。     

SA-CMC固定反硝化细菌好氧反硝化性能探究

为扩大反硝化菌应用和抗逆性,以海藻酸钠(SA)和羧甲基纤维素钠(CMC)为载体、用CaCl2交联,联合包埋脱氮副球菌,制作反硝化菌剂,探究有氧条件下,菌剂的好氧反硝化性能.结果表明,有氧条件下,所得菌剂对硝态氮的还原能力显著高于游离态菌(总氮氧化物去除率分别为95.6％和9.6％).CMC含量升高能显著提高菌剂好氧反硝...     

海藻酸钠-硅藻土包埋石油脱硫菌Rhodococcus sp.H-412

生物菌固定化研究对生物脱硫技术的推广应用具有重要的意义。本文以实验室筛选的、符合4S脱硫代谢途径的Rhodococcus sp．H．412为研究对象,二苯并噻吩（DBT）为生物催化脱硫模拟化舍物,考察了脱硫菌Rhodococcus sp．H．412的固定化操作条件和使用条件。试验结果表明：在交联温度为4℃,交联剂氯化钙溶液浓度为0．10mmol／L,海藻酸钠质量分数为3．0％,添加剂硅藻土质量分数为1．0％,菌胶比（菌体湿重：胶体体积）为1：20的条件下,用8号医用针头造粒,可以得到具有较高的脱硫活性、较好的机械强度和传质性能的固定化细胞颗粒。固定化细胞相对游离细菌而言,具有较高的温度适应能力和较宽的pH适应范围。     

Investigations of cell immobilization in alginate: rheological and electrostatic extrusion studies

In this study, the process of electrostatic extrusion as a method for cell immobilization was investigated. We have assessed the effects of concentrations of yeast cells (as a model cell type) and Na alginate on the size of the resulting microbeads and attempted to rationalize the obtained findings by rheological characterization of the cell–alginate suspensions. Under the investigated conditions, microbeads, 50–600 µm in diameter, were produced and the increase in both alginate and cell concentrations resulted in larger microbeads with their sizes having higher standard deviations. Rheological characterization revealed non‐Newtonian, pseudoplastic behavior of cell–alginate suspensions with higher viscosities at higher alginate concentrations. However, the presence of cells even at high concentrations (5 × 10⁸ and 1 × 10⁹ cells mL^?1) did not significantly affect the rheological properties of the Na alginate solution. Finally, we have investigated the kinetics of alginate gelation with respect to the quantity of Ca²⁺ ions and the presence of cells. The molar ratio of α‐L ‐guluronic acid units to Ca²⁺ ions of 4:1 provided complete crosslinking. The presence of cells decreased the rate of network formation as well as the strength of the obtained Ca alginate hydrogel. Copyright © 2006 Society of Chemical Industry     

海藻酸钠改性锌精矿的制备与表征

为了克服锌精矿颗粒在浸出液中的聚团问题,减少有机溶剂的夹带损失,采用表面活性剂海藻酸钠对锌精矿进行表面改性研究.利用分散性实验、测定吸油率、红外光谱（FT-IR）、X射线电子能谱（XPS）等测试方法对改性前后的锌精矿进行了分析和表征.实验结果表明,改性后的锌精矿颗粒在水中表现出良好的分散性.沉降体积由0.85 ml•g^-1降至0.70 ml•g^-1,吸油率由0.15 ml•g^-1降至0.07 ml•g^-1.对改性前后锌精矿的IR谱和XPS能谱图的分析表明,改性后的锌精矿颗粒表面包覆了一层改性剂,改性剂以化学键结合于矿粒表面,对矿粒产生静电和位阻的复合稳定作用.     

高强度海藻酸盐纤维的制备

采用湿法纺丝方法制备高强度海藻酸盐纤维,研究了影响纤维断裂强度的因素。结果表明:海藻酸钠的β-D-甘露糖醛酸单元(M)/α-L-古罗糖醛酸单元(G)质量比越高,纤维断裂强度越低。采用M/G值为0.32的海藻酸钠为原料,氯化钙水溶液为凝固液,纺丝液质量分数为5.0%,凝固浴质量分数为4.5%,凝固浴温度为40℃,纤维烘干温度为30℃,可制得断裂强度达4.675 cN/dtex的高强度海藻酸盐纤维。     

碳酸酯合成过程催化剂离子液体固载方式研究进展

有机碳酸酯是一类重要的化工原料,常被用在药物合成、绿色添加剂、锂电池电解液以及合成聚碳酸酯等领域,碳酸酯的合成是实现CO2碳资源化最有效的途径之一.固载化离子液体兼具均相催化剂的高活性和固相催化剂易于分离和回收等特点,在碳酸酯合成反应中具有广阔的工业应用前景.综述用于合成碳酸酯的固载化离子液体催化剂固载技术研究进展,总...