胶体金法试剂与EIA试剂检测梅毒螺旋体抗体的临床比较分析

目的探讨胶体金法梅毒螺旋体(TP)抗体试剂的灵敏度与特异性。方法用胶体金法与EIA法对188份梅毒患者血清样本进行检测。结果TP抗体S/CO值在>10.0时,胶体金法与EIA法的阳性符合率只有85.3%。结论胶体金法检测TP抗体S/CO值高值样本时存在着一定的漏检率。     

第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品的研制

目的研制第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品。方法从国内11省市几十万名供血员中筛选出871份样品,以多种试剂对其进行复核,对备选参比品样品再进行免疫荧光吸收法检测,并对人类免疫缺陷病毒抗体、乙型肝炎病毒抗体、丙型肝炎病毒抗体、类风湿因子及非特异性抗体进行检测。根据样品复检及确证结果,选定30份样品,分装并分发至11个实验室,进行会同标定。结果已制备出第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品,并建立了相应的质量标准。结论第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品已被国家有关部门批准正式使用。     

磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒螺旋体

目的应用磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒特异性抗体和反应素。方法应用磁凝集法梅毒检测试剂(Tre-ponema pallidum magnetic particle agglutination,TPMPA)检测梅毒阳性血清,分析梅毒阳性血清符合率、梅毒血清抗体滴度、假阳性检出率及交叉反应。结果用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测26份梅毒阳性血清样品,结果均为阳性,与省血液中心和省疾控中心的检测结果的符合率为100%;应用TPMPA-B试剂检测梅毒抗体滴度结果均较用梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂(TRUST)检测结果高2个滴度;用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测正常血清,结果均为阴性,与省血液中心检测结果相符;用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测5份风湿病患者血清和13份慢性肝病患者血清,均未出现交叉反应。结论磁凝集法梅毒检测试剂具有良好的特异性和敏感性,操作简便、省时,可初步用于检测梅毒特异性抗体和反应素。     

梅毒螺旋体优势表位抗原嵌合表达蛋白对国家参考品的反应性

目的　采用含梅毒螺旋体 (Tp)不同优势表位抗原连接嵌合表达 ,筛选用于ELISA试剂检测梅毒抗体的多表位抗原。方法　筛选Tp优势抗原表位 ,进行不同的连接嵌合表达 ,用于ELISA试剂检测 3 0份国家参考品血清。结果　不同抗原组合连接 (Tp15 47、Tp42 15 47、Tp17 42 15 47)对血清的反应性不同。结论　含有多个抗原表位的嵌合抗原 ,能提高检测灵敏度     

应用反应素过筛试验(RST)诊断梅毒的研究

参考文献研制了RST抗原，以本所RPR和TRUST抗原为对照，检测254份血清标本，其中梅毒血清54份，非梅毒血清200份。结果表明RST抗原特异性和敏感性良好，反应模式优于TRUST和RPR抗原。     

梅毒螺旋体特异性抗原TP17、TP0453的表达及以其作为诊断抗原的间接ELISA方法的建立

目的表达、纯化梅毒螺旋体特异性外膜蛋白TP17和TP0453,并以其作为包被抗原,建立新型梅毒酶联免疫诊断方法。方法 PCR扩增TP17和TP0453基因,分别克隆入pET-22b(+)和pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-22b(+)-TP17和pET-28a(+)-TP0453,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物纯化后进行Western blot鉴定。以纯化的重组TP17和TP0453蛋白作为诊断抗原,建立间接ELISA方法,并对该方法进行验证。结果 PCR分别扩增出500和800bp的TP17和TP0453基因片段,测序结果与GenBank中登录的CDS序列完全一致。重组表达质粒pET-22b(+)-TP17和pET-28a(+)-TP0453经双酶切鉴定正确;重组TP17和TP0453蛋白的相对分子质量分别约为18000和29000。表达量分别约占菌体总蛋白的18%和24%,纯化的重组TP17和TP0453蛋白的纯度分别>95%和>90%。两种重组蛋白均能与梅毒标准血清发生特异性反应。检测70份梅毒参考血清和定值质控血清的批内变异系数(CV)≤4.35%,批间CV≤6.69%,表明精密性良好;对国家标准血清盘的检测灵敏度为94.4%,特异性为97.1%,符合率为95.7%,最低检出限为0.25NCU/ml。结论表达和纯化的重组TP17和TP0453蛋白具有良好的抗原性和特异性,可用于梅毒血清学诊断。     

ELISA在梅毒检测中的价值

近年来梅毒发病率正呈逐年增长之势 ,为了解两种常用梅毒血清诊断方法的差异 ,本文对ＴＲＵＳＴ和梅毒 ＥＬＩＳＡ两种方法进行了比较。取血浆样本 2 0 70份 ,经ＴＲＵＳＴ检测阳性 90份 ,阴性1980份 ,再经上海科华生物工程股份有限公司的梅毒螺旋体抗体酶联免疫法诊断试剂盒复检 ,结果不一致的样本再用日本富士公司的ＴＰＰＡ试剂盒作进一步检测。结果 90份ＴＲＵＳＴ阳性标本中有 3份梅毒 ＥＬＩＳＡ为阴性 ,1980份ＴＲＵＳＴ阴性标本中 ,12份为阳性 ,共有 15份不一致标本。用ＴＰＰＡ试剂检测这 15份标本 ,结果 3份梅毒 ＥＬＩＳＡ阴性标…     

梅毒诊断用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)的研究

作者参考文献制备了TRUST抗原。并以目前国内广泛应用的USR抗原作平行对比,检测了3922份血清标本,其中非梅毒患者血清3700份,梅毒患者血清222份,结果显示其特异性、敏感性良好,可以作为梅毒血清学的一种常规试验。     

3种不同方法检测梅毒的结果比较分析

目的 探讨与分析3种不同方法检测梅毒的临床价值。方法 对我院98例梅毒患者与50例健康体检者均分别采用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)、梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(胶体金法)检测血清梅毒,对3组检测方法的结果进行比较分析。结果 TRUST的试验检验符合率为86.7%,TPPA的试验检验符合率为100%,胶体金的试验检验符合率为99.0%。TPPA与TRUST相比(χ2=13.92,P<0.01)有统计学差异。胶体金与TRUST相比(χ2=11.08,P<0.01)有统计学差异。结论 胶体金法的检出率明显优于TRUST,但与TPPA相比则无明显差异,故胶体金法在对梅毒的检测中比TRUST的准确率高,比TPPA更易操作,且成本较低。     

梅毒螺旋体-15脂蛋白的原核表达及其纯化

目的原核表达梅毒螺旋体-15(Treponema pallidum-15,TP-15)脂蛋白基因,并进行纯化及鉴定。方法人工合成455 bp的TP-15基因序列,克隆至原核表达载体p ETDuet-1,构建原核表达质粒p ETDuet-1/TP-15,经双酶切及测序鉴定后,将鉴定正确的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达;表达产物经Ni2+亲和层析纯化,纯化产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果重组质粒p ETDuet-1/TP-15经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达产物相对分子质量约27 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的2.34%,纯化后蛋白纯度达99%以上,可与HRP标记的梅毒螺旋体多克隆抗体发生特异性结合。结论构建了原核表达质粒p ETDuet-1/TP-15,并于E.coli中成功表达,纯化后获得了高纯度的TP-15蛋白,为进一步研究建立梅毒病人血清检测试剂盒奠定了基础。     

梅毒螺旋体特异性抗原TpN47基因片段的克隆与表达

目的在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体(Tp)TpN47(68~410 aa)重组蛋白。方法采用PCR法从Tp全基因组中扩增TpN47(202~1230 bp)片段,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22 b(+)-TpN47,经酶切鉴定后转化EcoliBL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化,Western blot鉴定其免疫反应性。结果PCR法扩增出约1 000 bp的目的片段,原核表达质粒pET-22 b(+)-TpN47经酶切鉴定正确,表达的蛋白约占菌体总蛋白的43%,相对分子质量约为39 000,以包涵体形式存在。经纯化后蛋白纯度达95%以上,Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应。结论所表达的TpN47重组蛋白具有良好的免疫反应性,为开发临床检测效果更好的梅毒诊断试剂盒奠定了实验基础。     

梅毒三种检测方法的比较

目的比较TP-ELISA、TP-PA、TRUST三种梅毒检测方法,选择一种适合大批量标本的梅毒筛查方法。方法以TP-ELISA法检测门诊患者标本7468例,TP-ELISA阳性者以TP-PA确认,并检测TRUST。结果共检出TP-ELISA阳性116例,检出率为1.55%。其中TP-ELISA阳性、TP-PA阳性133例,符合率97.4%;TP-ELISA阳性、TP-PA阴性3例,TP-ELISA假阳性率为2.6%。113例TP-PA阳性标本中检出TRUST阳性62例,检出率54.9%(62/113);其余51例TRUST阴性,未检出率45.1%(51/113)。结论TP-ELISA是梅毒筛查的理想方法。     

流感嗜血杆菌感染反向血凝诊断试剂盒的研制

应用自制的流感嗜血杆菌（Hi）血清提取的免疫球蛋白致敏醛化血球制备的反向血凝诊断试剂盒，与美国Difco血清制备的试剂盒相比，其灵敏度无差异，均可达2～4ng／25μl，而特异性较好。应用该试剂盒检测了152份正常人血清，29份肺炎病人血清，311份尿标本（其中55份为正常儿童尿，256份为肺炎病人尿），60份肺炎病人痰标本。正常人标本检测结果均为（一），病人血清、尿、痰标本阳性率分别为13％、7％和10％。     

对国产抗-HBs放免试剂的确证

用北京生物制品研究所出品之抗-HBs放免试剂检测抗-HBs,有时比Abbott同类试剂(Ausab)检出率高。为确证其是否真实,对11份二者检出不一致的血清用血源HBsAg及基因重组HBsAg作中和试验。均能中和。以正常人血清免疫小鼠所获抗血清则与该试剂未出现非特异反应。证明此试剂具有较高灵敏度与特异性。这与中国药品生物制品检定所检定该试剂灵敏度较高(一般为0.5～2.mIU/ml,Ausab一般为1～5mIU/ml)是一致的。     

流行性乙型脑炎特异性IgM、IgG诊断试剂盒的研制和应用

应用乙脑病毒感染BHK21细胞制备抗原，建立检测乙脑特异性IgM、IgG的诊断试剂盒，以ELISA捕捉法检测了107份临床疑似乙脑的患者血清，IgM阳性率为61．7％。该法比血抑法简便、敏感，不需要双份血清，可用于临床早期诊断。应用抗体夹心法检测了21份患者血清，IgG阳性率为61．9％，与ELISA捕捉法检测的符合率达100％。抗体夹心法与ELISA捕捉法可联合用于回顾性临床诊断和大规模流行病学调查。     

基因重组HIV-1 P24抗原的应用分析

目的 分析重组HIV-1-p24抗原,以便研制HIV-抗体诊断试剂。方法 以纯化重组P24为包被抗原,应用ELISA检测HIV-Ab国家参比品和正常人血清。结果20份阳性HIV-Ab检出阳性19份,符合率为95％;20份阴性HIV-Ab检出阴性18份,符合率为90％;50份正常人血清检测结果均为阴性。结论 所研制的重组P24抗原具有较高的特异性和敏感性,可用于制备HIV抗体诊断试剂。     

应用ELISA检测小鼠肝炎病毒抗体

以 DBT 细胞增殖的小鼠肝炎病毒 MHV-3经差速离心浓缩后作为抗原,用辣根过氧化物酶标记的金黄色葡萄球菌 A 蛋白(HRP-SPA)作为第二抗体,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测 MHV抗体。经本中心及三个外单位共检测362份普通群小鼠血清样本,MHV 抗体检出率为149/362(41.16%)屏障系统内小鼠血清样本121份,均为阴性。     

载脂蛋白A1和B检测试剂的研制

目的　研制载脂蛋白A1和B检测试剂。方法　采用硫酸葡聚糖沉淀、超速离心、层析等方法。结果　分离的载脂蛋白A1(ApoA1)和B (ApoB) ,经检定证实其为单一成分 ,用它们为抗原 ,免疫绵羊 ,获得ApoA1和ApoB抗血清 ,检定结果与德国Bochinger公司产品一致。用这两种抗血清配制的浊度检测试剂与德国Diasys公司的同类试剂盒进行对照 ,相关良好。结论　所研制的载脂蛋白A1和B检测试剂达到了国外同类产品的质量水平。