梅毒螺旋体特异抗原TP0684的克隆和表达

目的克隆并表达梅毒螺旋体外膜蛋白TP0684,为研制早期诊断试剂盒提供依据。方法PCR法扩增TP0684编码基因。T-A克隆后构建表达质粒pET-22b(+)-TP0684,经酶切鉴定后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定。结果PCR法扩增出了1212bp的目的片段,原核表达质粒pET-22b(+)-TP0684酶切鉴定正确,测序结果与GenBank上公布的该基因的CDS序列完全一致。转化E.coli BL21(DE3)后,IPTG诱导目的蛋白表达率为25%,SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量约43000,Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应。结论所表达的TP0684重组蛋白具有良好的免疫反应性,为进一步研究梅毒血清学诊断试剂奠定了基础。     

梅毒螺旋体特异性抗原TpN47基因片段的克隆与表达

目的在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体(Tp)TpN47(68~410 aa)重组蛋白。方法采用PCR法从Tp全基因组中扩增TpN47(202~1230 bp)片段,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22 b(+)-TpN47,经酶切鉴定后转化EcoliBL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化,Western blot鉴定其免疫反应性。结果PCR法扩增出约1 000 bp的目的片段,原核表达质粒pET-22 b(+)-TpN47经酶切鉴定正确,表达的蛋白约占菌体总蛋白的43%,相对分子质量约为39 000,以包涵体形式存在。经纯化后蛋白纯度达95%以上,Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应。结论所表达的TpN47重组蛋白具有良好的免疫反应性,为开发临床检测效果更好的梅毒诊断试剂盒奠定了实验基础。     

第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品的研制

目的研制第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品。方法从国内11省市几十万名供血员中筛选出871份样品,以多种试剂对其进行复核,对备选参比品样品再进行免疫荧光吸收法检测,并对人类免疫缺陷病毒抗体、乙型肝炎病毒抗体、丙型肝炎病毒抗体、类风湿因子及非特异性抗体进行检测。根据样品复检及确证结果,选定30份样品,分装并分发至11个实验室,进行会同标定。结果已制备出第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品,并建立了相应的质量标准。结论第二套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品已被国家有关部门批准正式使用。     

梅毒螺旋体抗体快检试剂国家参考品的研制

目的建立梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)抗体快检试剂国家参考品,确定其质量标准。方法通过对134批TP血浆的复核、确证,组建TP抗体快检试剂国家参考品,经多家实验室协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估。结果 TP抗体快检试剂国家参考品由20份阴性、10份阳性、3份最低检出限及1份重复性样品组成。质量标准为20份阴性参考品中应至少18份为阴性,10份阳性参考品中应至少9份为阳性,最低检出限参考品中应至少1份为阳性,且稀释用血浆应为阴性,重复性参考品检测10次,应均为TP抗体阳性,其颜色反应应一致。参考品的均匀性及稳定性均符合国家参考品标准。结论研制的参考品可作为TP抗体快检试剂的质量控制及评价使用。     

应用反应素过筛试验(RST)诊断梅毒的研究

参考文献研制了RST抗原，以本所RPR和TRUST抗原为对照，检测254份血清标本，其中梅毒血清54份，非梅毒血清200份。结果表明RST抗原特异性和敏感性良好，反应模式优于TRUST和RPR抗原。     

梅毒螺旋体-15脂蛋白的原核表达及其纯化

目的原核表达梅毒螺旋体-15(Treponema pallidum-15,TP-15)脂蛋白基因,并进行纯化及鉴定。方法人工合成455 bp的TP-15基因序列,克隆至原核表达载体p ETDuet-1,构建原核表达质粒p ETDuet-1/TP-15,经双酶切及测序鉴定后,将鉴定正确的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达;表达产物经Ni2+亲和层析纯化,纯化产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果重组质粒p ETDuet-1/TP-15经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达产物相对分子质量约27 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的2.34%,纯化后蛋白纯度达99%以上,可与HRP标记的梅毒螺旋体多克隆抗体发生特异性结合。结论构建了原核表达质粒p ETDuet-1/TP-15,并于E.coli中成功表达,纯化后获得了高纯度的TP-15蛋白,为进一步研究建立梅毒病人血清检测试剂盒奠定了基础。     

流感嗜血杆菌感染反向血凝诊断试剂盒的研制

应用自制的流感嗜血杆菌（Hi）血清提取的免疫球蛋白致敏醛化血球制备的反向血凝诊断试剂盒，与美国Difco血清制备的试剂盒相比，其灵敏度无差异，均可达2～4ng／25μl，而特异性较好。应用该试剂盒检测了152份正常人血清，29份肺炎病人血清，311份尿标本（其中55份为正常儿童尿，256份为肺炎病人尿），60份肺炎病人痰标本。正常人标本检测结果均为（一），病人血清、尿、痰标本阳性率分别为13％、7％和10％。     

梅毒诊断用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)的研究

作者参考文献制备了TRUST抗原。并以目前国内广泛应用的USR抗原作平行对比,检测了3922份血清标本,其中非梅毒患者血清3700份,梅毒患者血清222份,结果显示其特异性、敏感性良好,可以作为梅毒血清学的一种常规试验。     

梅毒螺旋体特异性抗原TP17、TP0453的表达及以其作为诊断抗原的间接ELISA方法的建立

目的表达、纯化梅毒螺旋体特异性外膜蛋白TP17和TP0453,并以其作为包被抗原,建立新型梅毒酶联免疫诊断方法。方法 PCR扩增TP17和TP0453基因,分别克隆入pET-22b(+)和pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-22b(+)-TP17和pET-28a(+)-TP0453,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物纯化后进行Western blot鉴定。以纯化的重组TP17和TP0453蛋白作为诊断抗原,建立间接ELISA方法,并对该方法进行验证。结果 PCR分别扩增出500和800bp的TP17和TP0453基因片段,测序结果与GenBank中登录的CDS序列完全一致。重组表达质粒pET-22b(+)-TP17和pET-28a(+)-TP0453经双酶切鉴定正确;重组TP17和TP0453蛋白的相对分子质量分别约为18000和29000。表达量分别约占菌体总蛋白的18%和24%,纯化的重组TP17和TP0453蛋白的纯度分别>95%和>90%。两种重组蛋白均能与梅毒标准血清发生特异性反应。检测70份梅毒参考血清和定值质控血清的批内变异系数(CV)≤4.35%,批间CV≤6.69%,表明精密性良好;对国家标准血清盘的检测灵敏度为94.4%,特异性为97.1%,符合率为95.7%,最低检出限为0.25NCU/ml。结论表达和纯化的重组TP17和TP0453蛋白具有良好的抗原性和特异性,可用于梅毒血清学诊断。     

胶体金法试剂与EIA试剂检测梅毒螺旋体抗体的临床比较分析

目的探讨胶体金法梅毒螺旋体(TP)抗体试剂的灵敏度与特异性。方法用胶体金法与EIA法对188份梅毒患者血清样本进行检测。结果TP抗体S/CO值在>10.0时,胶体金法与EIA法的阳性符合率只有85.3%。结论胶体金法检测TP抗体S/CO值高值样本时存在着一定的漏检率。     

过氧化氢化工合成产品的生产与开发

介绍部分过氧化氢化工合成产品的生产开发、主要用途及需求情况。     

淋球菌培养基、氧化酶试纸及奈瑟氏菌快速糖试验试剂盒的检定和应用

应用新研制的淋球菌培养基（WGC）与意大利GC（IGC）和MTM培养基对照进行淋球菌生长试验，其敏感性基本一致。用已知菌株对氧化酶试纸和奈瑟氏菌快速糖试验试剂盒进行检定，亦呈现正确反应。应用WGC与IGC培养基培养9o3例临床标本，培养物经革兰氏染色和氧化酶试纸作初步检定，IGC卜淋球菌阳性402例，WGC上同时田位400例，两者符合率为99．5％，WGC上400例中，有366例用快速糖试验作证实试验，确诊为淋球菌者有364例，两者符合率为99．45％。     

丙型肝炎抗体确证试剂检测结果的分析

目的分析丙型肝炎抗体确证试剂的检测结果。方法用两种国外抗HCV确证试剂(RIBA和MP)分别对89份抗HCVEIA试剂(Ortho)检测为高值阴性或弱阳性样品进行检测,按试剂说明判定结果。并对两种确证试剂对4种丙肝分片段抗体的检出率进行比较。结果两种确证试剂RIBA和MP与Ortho试剂的总符合率分别为43.8%和47.2%,均出现了较多的不确定样品。两种试剂对丙肝NS3抗体和NS5抗体的检出率基本一致,MP试剂对丙肝核心抗体和NS4抗体的检出率显著高于RIBA试剂。结论对于不确定样品,最好结合临床症状及病人追踪检测进一步确诊。     

对国产抗-HBs放免试剂的确证

用北京生物制品研究所出品之抗-HBs放免试剂检测抗-HBs,有时比Abbott同类试剂(Ausab)检出率高。为确证其是否真实,对11份二者检出不一致的血清用血源HBsAg及基因重组HBsAg作中和试验。均能中和。以正常人血清免疫小鼠所获抗血清则与该试剂未出现非特异反应。证明此试剂具有较高灵敏度与特异性。这与中国药品生物制品检定所检定该试剂灵敏度较高(一般为0.5～2.mIU/ml,Ausab一般为1～5mIU/ml)是一致的。     

商品化酶抑制-比色法农残速测试剂盒对农药的敏感性测定

探讨商品化的酶抑制-比色法农残速测试剂盒对50种农药的敏感性测定.使用商品化的酶抑制.比色法试剂盒对嘧啶磷等40种有机磷和10种氨基甲酸酯类农药残留进行5个浓度水平的测定;对有3个浓度水平的抑制率大于0的农药,用抑制率和农药浓度的常用对数进行线性拟合,得出相关系数和抑制率方程,并据此计算IC10和IC50,通过IC10...     

幅照固化粉末涂料用的树脂的开发

幅照固化粉末涂料早已实现了商业化生产，它以高速固化及低能耗及低VOC排放，UV－固化粉末涂料的固化温度可降至120℃以下使用。本文主要叙述此类涂料所用的基本原料以及它们的在配方中选用与调节方面作些讨论。     

甲基丙烯酸甲酯的绿色催化合成进展

合成甲基丙烯酸甲酯(MMA)的传统方法丙酮氰醇法(ACH法)存在着原料毒性大、副反应 多,工艺流程复杂、原子利用率低的缺点。绿色催化合成MMA的方法主要有改进的ACH法、异丁烯 法、丙炔法、丙烯法、甲基丙烯醛氧化酯化法等,这些方法均符合绿色化学的要求。笔者对这几种绿色合 成工艺以及所用催化剂的研究概况进行了综述。