脱氧雪腐镰刀菌烯醇ELISA定量检测试剂盒的研制*

研制了脱氧雪腐镰刀菌烯醇ELISA试剂盒,用于检测谷物粮食中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxyni-valenol,DON).在抗DON单克隆抗体的基础上,用间接竞争酶联免疫吸附检测试剂盒各项指标.结果为:试剂盒最低检测浓度为20 ng/mL,检测线性范围为50～400 ng/mL,IC<,50> 103 ng/mL.平均加标回收率>80%,批内变异系数小于10%,批间变异系数<15%.用试剂盒测定盲样,其结果与德国拜发试剂盒及免疫亲和柱-高效液相色谱检测结果无显著性差异.说明试剂盒指标符合相关技术要求,具有快速、灵敏、准确、方便等特点.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇酶联免疫检测方法的建立

应用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体12D1建立了竞争间接ELISA方法,用于检测小麦、玉米中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),最低检出限为20ng/mL,检测范围为20￣460ng/mL。用蒸馏水提取掺合DON(250￣4000ng/g)的小麦样品,回收率为82.1%￣96.6%,变异系数为0.6%￣7.1%。     

化学发光酶免疫法检测玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇

应用抗脱氧镰刀菌烯醇单克隆抗体,以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢化学发光体系,建立了一种简便、快速、高特异性的间接竞争化学发光酶免疫法用于检测谷物中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇。所建立的方法分析灵敏度为10.7ng/mL,批内变异系数小于8.1%,批间变异系数小于12.8%,玉米的加标回收率为91.2%～99.5%,与其他常见真菌毒素未见明显交叉,所建立的标准曲线相关系数为0.9902,检测线性范围为12.9～163.7ng/mL,检测时间为40min。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）又名呕吐毒素,是一种有很强细胞毒性、胚胎毒性、一定致畸性、弱致癌性且影响免疫系统的真菌毒素。重点介绍了脱氧雪腐镰刀菌烯醇ELISA试剂盒检测法,以及用此法检测的抚顺地区2008年产部分玉米样品在2009年夏季DON的平均含量。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇胶体金检测试纸的研制及应用

采用合成脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Dexynivalenol,DON)人工抗原,制备抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体(mAb),并以此为基础建立胶体金免疫层析检测试纸,于胶体金读数仪配合使用,用于进行玉米和小麦样品中DON的快速定量检测。通过检测玉米和小麦样品,脱氧雪腐镰刀菌烯醇胶体金试纸方法检测限为87μg/kg,定量限为290μg/kg,线性范围400~5 000μg/kg,相关系数r=0.998。以国家标准(GB/T23503—2009)免疫亲和柱-高效液相色谱法检测样品的结果为认定值,胶体金检测法的准确度在80.7%~143.6%,变异系数范围4.7%~16.4%。采用配对t-检验分析,胶体金检测法与国标液相方法无显著性差异。     

免疫亲和柱净化—高效液相色谱法同时检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物

建立脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其衍生物3-乙酰基—脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-ADON)和15-乙酰基—脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-A-DON)的免疫亲和柱净化—高效液相色谱同时检测方法。小麦样品经超纯水提取、免疫亲和柱净化、吹干、定容后,用配有紫外检测器的高效液相色谱仪进行DON、3-A-DON和15-A-DON三种毒素的同时检测,并与液相色谱质谱法比对。结果表明:该方法检出限,DON、3-A-DON和15-A-DON均为100μg/kg,样品加标回收率范围86.6%~96.5%,变异系数小于10%,具有较好的准确性和精密度。该方法简单、快速、灵敏度高、选择性好,适用于小麦中DON、3-A-DON和15-A-DON的同时检测。     

脱氧雪腐镰刀烯醇时间分辨免疫法的建立

目的：利用抗脱氧雪腐镰刀烯醇多克隆抗体及其人工抗原,采用时间分辨免疫荧光技术建立间接竞争脱氧雪腐镰刀烯醇时间分辨免疫检测方法(DON-TRFIA)。方法：以DON人工抗原(DON-BSA)包被微孔板,与DON标准或样品中的DON共同竞争结合抗DON多克隆抗体,然后用稀土离子Eu3+标记羊抗兔抗体进行示踪检测,并对建立DON-TRFIA进行方法学的考核。结果：该方法的灵敏度为0.01ng/ml,检测范围为0.01～100ng/ml,IC50为4.84ng/ml,批内、批间变异率均小于10%。不同样品添加回收实验表明小麦、玉米、啤酒、面包回收率分别为89.41%～123.2%、115.6%～123.6%、80.35%～118%、87%～92.45%。玉米样品检测结果表明DON-TRFIA与商品化DON-ELISA试剂盒结果高度相关,具有较好的一致性。结论：DON-TRFIA是目前已见报道文献中最灵敏的DON免疫检测法,具有很好的应用前景。     

纳米均相时间分辨荧光免疫法检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇方法的建立

目的:利用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)多克隆抗体,采用纳米均相时间分辨荧光免疫法测定技术(AlphaLISA)建立间接竞争DON定量检测方法.方法:DON-BSA包被发光微粒,生物素化羊抗兔抗体与包被有链霉素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测条件并评价检测性能.结果:该方法的灵敏度为0.007ng/mL,检测范围为0.007～100ng/mL,批内批间变异系数均<5%.不同样品添加回收实验:玉米、小麦、啤酒回收率分别为84%～110%、67%～100%、74%～100%.结论:DON-AlphaLISA是目前DON检测中最灵敏的方法之一,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景.     

免疫亲和柱净化结合高效液相色谱法测定小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇

使用小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)免疫亲和柱结合高效液相色谱法(HPLC)测定方法。使用该方法简便、快速、灵敏度高,能准确检测出小麦粉中雪腐镰刀菌烯醇含量。经水提取后,采用免疫亲和柱净化,通过高效液相色谱-紫外检测器测定,检测小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量,根据峰面积定量。实践研究显示:小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇经水提取,免疫亲和柱净化后检测线性较好,相关系数大于等于0.999,定量限为16μg/kg,脱氧雪腐镰刀菌烯醇加标回收率为90.6%,RSD为2.1%。     

酶联免疫吸附法测定小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇

目的 建立小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol, DON)含量测定的酶联免疫吸附(ELISA)分析方法。方法 选取山东省4地区小麦样品80份, 用不同溶剂对小麦中的DON进行提取后,构建小麦中DON的ELISA检测方法, 根据国家标准对检测结果进行评价。结果 选用84%的乙腈水溶液作为提取溶剂, 其平均回收率可达100.2%, 较为理想。该ELISA方法检测小麦中DON, 线性范围是5~5000 ng/g, 回归方程Y= 0.0419X 0.0222, 相关系数r=0.9868, 样品中DON含量为5.27~3639.38 ng/g , 中位数为79.25 ng/g, 在所检测的80份样品中, 有4份超出了国家规定的上限标准(1000 ng/g), 76份符合国家规定, 合格率为95％。结论 该方法灵敏、快捷, 适用于小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测。     

Quantitative Determination of Deoxynivalenol (DON) Using the Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay (AlphaLISA)

An indirect competitive Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay (AlphaLISA) was established by using anti-deoxynivalenol (DON) polyclonal antibody and coating antigen DON-bovine serum albumin (BSA) for detection of DON in cereals. DON-BSA was coated on Acceptor bead, the kit also contains donor bead sensitizer particles coated with streptomycin. The optional test conditions and analytical performance of the method were studied. Working concentration ranged from 0.007 to 100 ng/ml and the sensitivity for detection was 0.007 ng/ml. The intra- and inter-batch coefficient of variation (CV) of the assay were both below 5%. The recovery rate of artificially contaminated cereals ranged from 81.1% to 110.9% while the mean recovery of DON from cereals was 94.4%. This study suggests that DON-AlphaLISA method is a good method with high sensitivity and rapidity for quantitative analyzing DON in cereals.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)直接竞争ELISA方法的建立

利用前期制备得到的DON酶标抗原(辣根过氧化物酶标记)以及抗DON抗体,建立检测食品中DON含量的直接竞争ELISA方法。该方法的检测范围1～100ng/mL,灵敏度达0.56ng/mL,半数抑制浓度IC50为10ng/mL;与DON类似物T-2毒素的交叉反应率为12%;玉米淀粉样品回收率在80.2%～91.1%之间,平均批间变异<15%,平均批内变异<3%。     

酶联免疫法检测呕吐毒素的方法研究

目的:利用抗呕吐毒素的特异性单克隆抗体和包被抗原,建立间接竞争酶联免疫法(ELISA)来检测谷物及其制品中呕吐毒素含量。方法:通过方阵滴定实验确定呕吐毒素最佳抗体浓度和最佳包被抗原浓度,应用酶联免疫测试盒对谷物及其制品中的呕吐毒素进行定量检测的方法学评价,来确立该方法的各项技术指标。结果:方法的最低检测浓度10μg/L;平均RSD为5.8%;回收率平均值为104%;用该方法研制的测试盒在4℃环境下可稳定6个月以上;检测时间小于2h;结论:该方法简便、安全、灵敏度高、重复性好、特异性强、能定性和定量检测谷物及其制品中的呕吐毒素含量。     

Occurrence of trichothecenes in Argentinean beer: a preliminary exposure assessment

The presence of trichothecenes (deoxynivalenol, 3-acetyl deoxynivalenol, 15-acetyl deoxynivalenol, nivalenol, neosolaniol and diacetoxyscirpenol) was studied in 50 samples of Argentinean beer (nine different brands). Gas chromatography with electron capture detector was used for identification and quantification of these mycotoxins. The only mycotoxin detected was deoxynivalenol (DON). It was present in 44% of the samples, 18% were contaminated with more than 20ng/ml. Toxin levels ranged from 4 to 221ng/ml in positive samples. This is the first report on DON contamination of Argentinean beer. The estimate of probable daily intake (PDI) of DON from beer consumption in Argentina does not indicate a health hazard, but it has to be taken into account in calculations of total DON exposure in the population.     

Simultaneous detection of deoxynivalenol and zearalenone by dual-label time-resolved fluorescence immunoassay

BACKGROUND: The health risks of deoxynivalenol (DON) and zearalenone (ZEN) necessitate the development of analytical methods for widespread food and feed screening. We sought to establish a rapid, economic and sensitive dual‐label time‐resolved fluoroimmunoassay (TRFIA) to detect DON and ZEN simultaneously. Eu³⁺‐ and Sm³⁺‐labelled antibodies were used, as lanthanides are more stable and have narrower emission spectra than most fluorescent dyes. RESULTS: The limit of detection was 0.0194 ng mL^?1 for DON (range: 0.0194–100 ng mL^?1) and 0.37 ng mL^?1 for ZEN (range: 0.37–50 ng mL^?1). DON recovery in spiked cereal samples was 88–107%, and for ZEN was 83–108%, with both intra‐ and inter‐assay coefficients of variation (CVs) less than 5%. The dual‐label TRFIA results correlated well with ELISA results (correlation coefficients: 0.9733 for DON and 0.9784 for ZEN). CONCLUSION: The dual‐label TRFIA is a simple, fast and sensitive method for high‐throughput screening of DON and ZEN in food and feedstuff. Copyright © 2010 Society of Chemical Industry     

盐酸克仑特罗ELISA试剂盒的研制

在间接竞争酶联免疫吸附法的基础上,研制了一种可以检测尿样或食品中盐酸克仑特罗的试剂盒。ELISA检测方法的各个影响因素均通过实验进行了优化。该试剂盒具有良好的灵敏度,半抑制率(IC50)为0.6ng/ml,该抗体与肾上腺素等结构类似物的交叉反应率均小于0.3%,回收率为90%～104%,批内变异系数小于6%,批间变异系数小于10%,试剂盒在12个月保存期内稳定。可用于盐酸克仑特罗的快速定量检测。     

呕吐毒素时间分辨荧光免疫层析法的建立与评价

构建并评价了呕吐毒素(Deoxynivalenol,DON)时间分辨荧光免疫层析法(TRFIA)。以Eu3+螯合物的纳米微球为荧光探针标记抗DON单抗,采用竞争抑制建立免疫层析定量方法,优化了微球与抗体标记量,检测的环境温度、反应时间、加样体积及缓冲体系;研究了方法的灵敏度、精密度及准确度。结果表明,每100 μL荧光微球结合纯单抗50 μg,最佳划膜浓度为1.0 mg/mL,最佳测定条件为室温(25±2)℃,10 min,加样体积100 μL,PBS (0.01 mol/L,pH7.2)的缓冲体系,方法的灵敏度为0.25 ng/mL,线性范围为0.5~25.0 ng/mL,玉米、小麦阴性样本(加标浓度200、500、1000、2000 μg/kg)平均加标回收率为91.4%~109.3%,6种典型样本经TRFIA与免疫亲和净化-高效液相色谱法(IAC-HPLC)同时测定DON含量,相关系数r达0.9754。TRFIA具有灵敏度高、速度快、定量准等技术特点,适用于谷物及制品中DON的快速定量。