免疫毒素细胞内传递途径的免疫金双标记研究

应用免疫金双标记技术对免疫毒素在细胞内传递途径进行了亚显微形态研究。采用5nm胶体金颗粒标记羊抗鼠、15nm胶体金颗粒标记兔抗蓖麻毒素以及免疫毒素(由抗CD_5、CD_2、CD_8及抗金T细胞的单抗DS27、JN205、P218、P81和蓖麻毒素构成),对免疫毒素与Molt-4细胞(人T淋巴细胞系)的相互作用进行了动态观察及超微结构定位。电镜下,在不同时期的实验动态观察中,两种不同粒径的金颗粒相伴随,共同定位于细胞膜及其突起表面、细胞膜被膜小凹(Coated pit)中,随后进入细胞内,定位于内吞小体(endosome)及其所属小管、小泡、多泡小体及溶酶体,并迅速到达跨高尔基氏复合体网状系统(trans-Golgi network)。实验中还观察到细胞膜表面有分布     

采用免疫胶体金标记结合负染色电镜技术对体外组装的中间纤维定性

将免疫胶体金标记与电镜负染色技术相结合，清晰显示体外组装的波形纤维具有１０ｎｍ中间纤维结构特征，抗波形纤维蛋白－金颗粒特异地标记在波形纤维上，用抗波形纤维蛋白－金颗粒对体外组装的微管进行标记则呈阴性反应。实验结果表明将免疫胶体金标记与电镜负染色技术相结合可以同时显示体外组装的细胞骨架纤维的精细结构和蛋白属性。     

胶体金标记技术：———DNA,RNA,蛋白质和糖的定性与定位研究

胶体金标记技术──ＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白质和糖的定性与定位研究丁明孝，梁凤霞，焦仁杰，翟中和（北京大学生命科学学院，北京１００８７１）近年来，我们曾应用胶体金标记技术进行了如下几方面的研究：（１）扫描样品的免疫标记￣［１］；（２）整装细胞的免疫标记及标...     

应用免疫胶体金技术对核骨架-Lamina-中间纤维体系标记定性

用选择性系列抽提技术与整装制样方法相结合,清晰地显示了Hela细胞与BHK_(-21)细胞的核骨架—Lamina—中间纤维结构体系。在此基础上,用电镜免疫胶体金标记技术对这一精细结构体系的成份分别进行定性研究,实验结果说明:Hela细胞与BHK_(-21)细胞核骨架纤维均能被298KD的核骨架蛋白单抗—金颗粒标记,它们的Lamina均被LaminA单抗—金颗粒标记,Hela细胞的中间纤维既能被角蛋白单抗又能被波形蛋白单抗—金颗粒所标记,而BHk_(-21)细胞的中间纤维却只能被波形蛋白单抗—金颗粒标记,不能被角蛋白单抗—金颗粒标记,但BHK_(-21)细胞的Lamina却与角蛋白单抗有交叉反应。将核骨架—Lamina—中间纤维体系的精细结构与其蛋白成份的定性同时准确地显示出来,至今尚未见过报导。     

感染神经元内流行性出血热病毒抗原的免疫金标记

在所有的RNA病毒中,布尼安病毒科(Family Bunyaviridae)的病毒是唯一的具有在感染细胞高尔基复合体及其邻近光面囊泡内芽生成熟的形态发生学特征。我们曾应用常规超薄切片电镜技术,在我国两种出血热(流行性出血热,EHF和新疆出血热,XHF)病毒感染的新生乳鼠大脑海马回神经元内观察到病毒在增生、扩张的高尔基扁囊和囊泡内芽生成熟的图象。本研究应用低温包埋免疫金标记技术进行感染细胞内EHF病毒抗原分子的亚细胞定位,以求阐明高尔基复合体异常增生与病毒抗原分布的关系。     

微波辐射固定及其在免疫金标记技术中的应用

应用微波辐射快速固定大鼠胰腺组织和白血病病人骨髓细胞悬液,再按常规制作电镜超薄切片。包埋后超薄切片免疫金标记β细胞中的胰岛素分泌颗粒显示组织细胞结构清晰,标记率高,(图1)。骨髓细胞悬液包埋前免疫金标记和酶反应定位血小板表面糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa)和胞浆内过氧化物酶均呈现阳性结果(图2)。电镜观察结果表明,经微波辐射固定的生物样品能较好地保存细胞的超微结构,抗原性及其酶活性。根据多次反复试验,我们取得的经验是,在进行微波辐射固定生物样品时,电镜样品固定温度和时间以26～28℃,15秒为宜。由于微波辐射加热温度升高很快,我们采用在炉室内四角放置四个盛有     

DGD包埋—去包埋样品的免疫标记

小鼠膀胱上皮细胞经细胞选择性抽提和ＤＧＤ包埋后，制备超薄切片，并对其进行免疫标记。结果表明，ＤＧＤ包埋－去包埋样品中的ＡＵＭ蛋白仍可特异地被抗体所识别，这一结果为证明小鼠膀胱上皮细胞中由ＡＵＭ蛋白组成的梭形泡以及腔面不对称单位膜结构均与中间纤维相连提高了证据。本文还对ＤＧＤ包埋后样品免疫标记技术进行了讨论。     

人精子甘露糖受体的胶体金标记电镜观察

本文首次报道人精子甘露糖受体（ＭＲ）的电镜标记技术和初步观察了，采用甘露糖化牛血清白蛋白（ＤＭＡ，Ｓｉｇｍａ，Ａ８３０３）结合１０ｎｍ胶体金制备探针，标记获能前后精子和甲醇处理或Ａ２３１８７诱导顶体反应（ＡＲ）的精子。结果表明，甲醇处理后ＭＲ表达顶体区质膜表面，活精子在ＡＲ过程中以不同方式表达ＭＲ活性；ＭＲ定位于：１．ＡＲ早期的精子顶体区质膜表面。２．ＡＲ期间精子的顶体小泡表面，顶体内膜及顶体基质     

辛德毕斯病毒囊膜蛋白的免疫标记

辛德毕斯病毒(Sindbis Virus,简称SbV)是最小的有囊膜的RNA病毒之一(图1),其囊幕含有二种病毒特异的囊膜蛋白(图1箭头)。病毒囊膜蛋白是在宿主细胞粗面内质网上合成的,经高尔基体加工后转运到细胞质膜上。研究SbV囊膜蛋白在细胞膜上的分布有助于进一步了解病毒的成熟与释放过程及其机制。我们曾参照P.Pinto da Silva的方法用抗病毒囊膜蛋白的抗体对SbV感染的细胞进行胶体金免疫标记,然后制备冰冻断裂复型样品,获得了宿主细胞质膜EF面复型与ES面的标记金颗粒的叠加图象(图2),进而我们探索了标记一复型技术和获得PF面复型与PS面标记金颗粒的叠加图象的方法,前者更有效地显示SbV囊膜蛋白在细胞质膜上的分布(图3),后者则可以把细胞内的免疫标记与冰冻蚀刻技术相结合,以对膜内微粒中的SbV囊膜蛋白进行定性定位的研究(图4),从而在一定程度上弥补了P.Pintoda Silva方法的不足。     

时间分辨荧光免疫分析技术的新进展

时间分辨荧光免疫分析技术的新进展高平，李振甲（北京解放军总医院，北京，１００８３５）本文简要综述近年来时间分辨荧光免疫分析技术（ＴＲＦＩ）的一些新进展。１ＴＲＦＩＡ标记技术１．巯水层析法纯化Ｅｕ３＋标记物ＳｉｒｐａＯｓｍａｎ等用Ｅｕ３＋标记抗体时，先...     

植物钙调素的免疫金标记电镜技术

本文用玉米根尖作为实验材料,建立了植物钙调素免疫胶体全电镜定位技术。采用Epon812常规包埋方法;以脱脂奶粉作为封闭试剂;用过碘酸钠处理切片,使之恢复抗原性。所用的兔抗小麦钙调素抗体对植物钙调素具有较高的亲和力和专一性。本方法具有操作方便。标记特异性较强,超微结构保存较好等特点。     

病毒免疫电子显微学金标记技术的建立

有关金标记技术在病毒学中的应用,国内外已有报道。但迄今为止,未见有将该技术同时应用于液体样品及感染细胞内病毒抗原际记,并对各种不同实验条件下进行对比研究的报道。本研究将金标记技术同时应用于液体样品及感染细胞中脊髓灰质炎、猴轮状病毒、SV_(40)和单纯疱疹等病毒抗原的标记。对反应物混合标记同悬浮标记、低温包埋标记同常觇包埋标记法以及标记条件、反应物浓度等不同实验条件进行了摸索,比较了不同实验方法和条件标记的结果。目的在于建立一种稳定的,可用于多种病毒检测的方法。液体样品阴性染色标记结果表明,反应物混合标记明显优于悬浮法。实验中,只要控制好琼脂扩散时间,注     

脑组织双重免疫荧光标记方法介绍

应用光学技术对荧光标记的组织切片样品进行成像观察是生物学研究的常规手段。本文主要介绍如何制备用于荧光显微镜和激光共聚焦显微镜成像的脑组织石蜡切片免疫荧光双重标记技术。     

流行性出血热患者外周血细胞病毒抗原的免疫金标记

应用流行性出血热(EHF)病毒抗体及胶体金探针对EHF患者外周血细胞进行病毒抗原的定位·光镜免疫金银染色(IGSS)结果显示患者外周血淋巴细胞及血小板表面EHF病毒抗原阳性。采用LowicrylK4M低温快速包埋电镜免疫金染色(IGS)方法,发现金探针特异性定位于淋巴细胞胞质的大小空泡和液泡内(可能为病毒芽生、成熟部位增生、扩大的高尔基囊泡)以及血小板质膜、开放管道系统扩张的管腔内。结果表明EHFV能在人外周血淋巴细胞中复制成熟。血小板表面IGSS阳性物质主要为循环血中EHFV抗原与抗体形成的免疫复合物。     

麦胚凝集素与纤维素酶胶体金探针的混合一步法标记

免疫金双标记技术可在超薄切片上同时标记两种不同的细胞组分,但传统的方法是用各个探针分别进行标记处理,费时费力,且两次标记有时相互干扰。本文通过对麦胚凝集素与纤维素酶两种胶体金探针标记条件与标记活性、标记特异性之间关系的分析,实现了在一定条件下两种探针混合的一步法双标记,极大地提高了工作效率,减少了非特异性背景。     

甜菜黑色焦枯病毒电镜与免疫电镜观察

甜菜黑色焦枯病毒电镜与免疫电镜观察孙晓陆王钫肖英王建梅（新疆农科院中心实验室，乌鲁木齐８３００００）甜菜黑色焦枯病是世界范围的甜菜种植中的毁灭性病害。本文报告了甜菜黑色焦枯型病原病毒（ＢＢＳＶ）的电镜与免疫电镜观察结果。寄主鉴别在防虫网室中以常规摩擦...     

单克隆免疫球蛋白轻链相关性肾病的超微结构及免疫电镜研究

目的：探讨电镜及免疫电镜方法在单克隆免疫球蛋白轻链相关性肾病包括轻链沉积病(Light chain deposition disease,LCDD)和轻链型淀粉样变(amyloidosis,AL)诊断中的作用。方法：对我院1994．1～2002．12间接受的肾活检病例进行系统的电镜观察,对疑为LCDD及早期AL的病例进行轻链(κ、λ)的免疫电镜标记。结果：7例符合LCDD的诊断,45例符合AL的诊断。LCDD肾活检组织电镜下可见肾小管基底膜(TBM)外侧、肾小球基底膜(GBM)内侧、鲍曼囊外侧及小血管壁基底膜外侧的点状、颗粒状电子致密物质沉积,其中2例早期病例表现颗粒状物质节段性分布;免疫电镜标记,颗粒状物质被单种轻链标记,其中,κ轻链5例,λ轻链2例。AL肾活检组织电镜下可见肾小球系膜区、GBM及小动脉壁基底膜上的细纤维物质呈团片状或束状分布,其中15例早期病例表现系膜区或,及GBM的细纤维呈节段性分布;15例早期AL的免疫电镜标记结果,细纤维被单种轻链标记,其中,κ轻链4例,λ轻链11例。结论：肾脏LCDD及早期AL的诊断需依赖于电镜检查,免疫电镜检查对肾脏早期LCDD及早期AL的确诊具有不可替代的作用。     

免疫复型技术的应用

自Faulk和Taylor(1971)报导应用胶体金电镜免疫金染色研究细胞表面抗原的分布以来,许多学者进一步证实了胶体金作为特异细胞成份的标记物具有许多独特的优点。近年来金探针标记技术得到了飞速发展。在电镜下定位各种抗原准确而不遮盖超微结构,可以说已发展成为常规技术。但是对于不同的样品,不同的实验要求,细胞表面或细胞内标记等,还需要摸索出各自的理想的制样方法才能达到预期目的。     

金标免疫电镜在自身免疫性大疱病研究中的应用

采用ＬＲ Ｗｈｉｔｅ作为包埋剂,用胶体金标记包埋后直接和间接免疫电镜技术,对天疱疮、大疱性类天疱疮、线型ＩｇＡ大疱性皮肤病皮损组织中的抗体和血清中自身抗体对正常人皮肤的结合部位进行研究。发现ＩｇＧ型天疱疮抗体位于桥粒上;ＩｇＧ型类天疱疮抗体对半桥粒上及透明层中;而线型ＩｇＡ大疱病ＩｇＡ型自身抗体结合在半桥位、透明层和致密层中。提示寻常型天疱疮和落叶型天疱疮抗原均位于桥粒复合体上;大疱性类天疱疮抗原位于半桥粒上及其下方的透明层虽;线型ＩｇＡ大疱病抗原位于半桥粒上、透明层和、或致密层中。本文同时就金标记包埋后免疫电镜在大疱性皮肤病诊断和研究中的价值进行介绍了讨论。     

免疫胶体金标记牛小肠碱性磷酸酶的研究

酶在细胞超微结构上的定位,通常是用细胞化学的方法,根据其底物的特异性通过重金属元素进行标记定位;而对于某些底物特异性较差的酶和同工酶在免疫化学上不同时,应用免疫组织学的方法以其抗原——抗体反应的高度特异性为基础,对酶进行定位研究确是一种有力的手段。特别是应用近几年发展起来的免疫胶体金技术对酶进行定位研究,可以得到高分辩率、高特异性的标记,并可对同一细胞内的不同酶的存在进行双重和多重标记。