烟草马铃薯Y病毒综合防治技术试验报告

试验表明，该病来源于烟田邻近的马铃薯地块的感病马铃薯植株。烟田离马铃薯地近发病率高，反之则低。蚜虫是主要传毒媒介。作业不科学也可传毒。综合预防措施：远离马铃薯地，及时消灭蚜虫，科学进行田间作业等；发病初期喷药物“病毒Ａ”控制该病有较好效果     

过氧化物酶活性与烟草对马铃薯Y病毒抗性关系的研究

本文测定了接种马铃薯Y病毒脉坏死株系后烟草抗病转基因品系9608(转PVY-NIb的NC89)和非转基因NC89叶片组织透性和过氧化物酶活性,并对过氧化物酶同工酶带谱进行了分析。结果表明,抗病转基因9608和感病NC89叶片的组织透性与叶片内过氧化物酶活性的变化趋势一致,两者在接种后均呈增高趋势,但感病NC89的增高幅度明显高于抗病转基因9608;接种后,转基因9608和非转基因NC89的过氧化物同工酶均出现了一条新酶带,9608的新酶带在接种后第2d开始出现,而NC89的新酶带则在接种后第6d开始出现,且明显强于9608。      

烟草马铃薯Y病毒病病株的空间分布

为了确定马铃薯Y病毒病(PVY)病株空间的分布型,对田间病害的11次调查结果进行了聚集度指标计算,对不同发病率下丛生指数I、Ca指标、聚块性指标m*/m、扩散系数C等进行了分析,并根据Iwao理论抽样数公式计算出不同病株密度下的理论抽样数.结果表明:病株密度在4.32653株/样方以下(发病率<17.31%)时,PVY田间病株呈聚集分布,病株个体问相互吸引,分布的基本成分为个体群;当病株密度为5.48148-7.96296株/样方(发病率21.93%～31.85%)时,病株呈均匀分布.病株为聚集型分布的,其理论抽样数应大于均匀分布,在田间发病率1.143%～9.061%时,理论抽样数可相应选定2950-425株.     

病毒诱导的基因沉默防控烟草马铃薯Y病毒病研究

  背景  病毒诱导的基因沉默（virus-induced gene silencing,VIGS）是植物抗病毒侵染的一种自然机制。  方法  以马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）脉坏死株系（PVYN）的外壳蛋白（coat protein, CP）基因为靶向序列,构建烟草脆裂病毒（Tobacco rattle virus,TRV）介导的基因沉默表达载体pTRV2-CP,转化农杆菌GV3101后,与pTRV1-GV3101混合成TRV: : CP（OD₆₀₀ 0.4~0.6）喷施处理剪叶后的烟苗,测定其侵染效率。人工接种PVY于对照及TRV: : CP处理的烟苗,RT-qPCR检测、表型观察和小区试验评价TRV介导的VIGS体系对PVY侵染的沉默效果。  结果  ① 与TRV: : 00相比,接种PVY 35 d时,TRV: : CP处理的烟株中PVY累积量减少了72.8%;②VIGS表达载体45 d内能有效表达;③温室盆栽和田间小区试验TRV: : CP处理对PVY防治效果分别达到85.12%和73.08%。  结论  研究建立的VIGS体系能够沉默PVY CP基因的表达,有效防治烟草马铃薯Y病毒病,为PVY的防治提供了新的方法。      

烟草马铃薯Y病毒病与气象因子的相关性

为了明确烟草马铃薯Y病毒病发生的适宜气候条件,依据云南昭通市昭阳区2009—2011年的病情观测数据及其同步气候观测资料,分析了气象因子对烟草马铃薯Y病毒病发生的影响。结果表明:气温、降水、日照时数与烟草马铃薯Y病毒病发生初期、盛期及其发病株率、病情指数密切相关,其发病株率、病情指数与气温、降水量均呈正相关,与日照呈负相关,在气温高、降水多、日照少的气候条件下,容易导致烟草马铃薯Y病毒病的发生蔓延。     

烟草上马铃薯Y病毒的提纯与检测

本文是关于制备马铃薯Ｙ病毒抗血清及ＥＬＩＳＡ检测技术的实验结果。采用垫层差速离心、蔗糖密度梯度离心提纯ＰＶＹ,纯化的ＰＶＹＯＤ２６０／ＯＤ２８０为１．５６,将提纯的病毒制品免疫家兔,制备抗血清,经微量沉淀及环状沉淀试验,用提纯病毒测定抗血清的效价均为１／２０４８,并对制备的ＰＶＹ—ＩｇＧ作灵敏度及特异性测定。     

烟草上马铃薯Y病毒的RT-PCR检测

本文根据已报道的PVY CP基因序列,设计合成了2套扩增PVY CP基因全序列和中间部分序列的寡核苷酸引物,用两套程序分别对马铃薯Y病毒普通株系(PV YO)和马铃薯Y病毒坏死株系PV YN) CP基因进行RT-PCR扩增,结果分别得到了与预期大小一致的804和301bp片段,健康植株对照中未扩增到任何产物,建立了RT-PCR检测烟草上马铃薯Y病毒的程序。      

黔南烟草马铃薯Y病毒(PVY)株系的分子鉴定

为了揭示贵州省黔南烟区马铃薯Y病毒(PVY)株系分布及分子变异规律,先利用血清学方法初步鉴定PVY株系,再选择19个PVY分离物进行分子鉴定.结果表明,克隆的19个PVY cDNA片段全长均为1074 nts,包含1个801 nts的完整cp基因,编码266个氨基酸.序列比对发现,19个黔南PVY分离物cp基因核苷酸序列相似性为87.0％ ～ 99.9％,与GenBank登录的其他17个PVY株系cp基因序列相似性为86.6％ ～ 99.9％.系统进化树分析表明,黔南烟区19个PVY分离物中,有3个PVY分离物与PVYN株系和PVYNTN亲缘关系较近,而其他16个PVY分离物与PVYNN:O株系的亲缘关系最近.     

贵州黔南烟草马铃薯Y病毒(PVY)株系的血清学鉴定

2010年从贵州省黔南州烟草产区共采集201个表现明显马铃薯Y病毒病症状的烟草样本。采用Tas-ELISA检测PVY的3个株系PVYN、PVYO和PVYC。结果显示,201个样本中共检测出171个样本受到PVY侵染,其中PVYN37个,占21.6%;PVYO133个,占77.8%;PVYC0个,PVYN和PVYO复合侵染1个,占0.6%。PVY株系分布具有一定规律,侵染黔南州烟草的PVY以PVYO为主要株系,PVYN侵染相对较少,为次要株系,所有样本均没有检测到PVYC侵染,复合侵染零星发生。     

基于叶片光谱分析的烟草马铃薯Y病毒病严重度诊断

为利用光谱分析方法实现马铃薯Y病毒(PVY)病的有效监测预警,采用ASD非成像光谱仪获取了感病后不同严重度烟草叶片的光谱数据.分析结果表明,随着马铃薯Y病毒病严重度的增加,叶片光谱反射率在可见光波段(400～700 nm)内呈现逐渐升高的趋势,在近红外波段(700～1300 nm)内呈现逐渐降低的趋势.利用一元线性回归...     

烟草马铃薯Y病毒病流行规律的初步研究

根据1996~2002年有关气象因素的数据,建立了气温、降水量与PVY病情指数的相关方程。选用几种模型对PVY的流行规律进行拟合检验,确定Gompertz模型为短期流行过程的最优拟合方程,并建立了流行速率与有翅蚜量关系的模型。根据田间病情调查的结果,初步得出模拟病害近距离传播的时空动态模型。     

烟草马铃薯Y病毒病发病的相关因素研究

烟草马铃薯Y病毒病在全国各烟区普遍发生,经研究检测马铃薯带毒种薯是该病最主要的初侵染来源。马铃薯Y病毒N株系寄主范围在测试的25种植物中只侵染茄科的三生烟、白肋烟、黄苗榆烟、烤烟、心叶烟、黄花烟、洋酸浆、辣椒和番茄等。经研究表明,当前生产上主栽品种都高感PVY病毒,邻近马铃薯地和蚜虫越冬场所（杏树）的烟田发病重。蚜虫的发生量是影响PVY病毒病发生程度的重要因素。本研究构建了烟草马铃薯Y病毒病与有翅蚜发生量的数学关系模型,确定了马铃薯Y病毒病的流行以Logistic{ I=1/[1+a^*EXP（-b^*T）]}模型为最优模拟模型,再经逐步回归分析,确定如下最优田间预测模型为：Logit（I）=2.058+0.355Logit（I₀）-0.04SQRT（Ap）,比较回归系数为0.967,比较回归绝对系数0.935。     

烟草脉带病研究进展

综述了烟草脉带病的分布危害、病害消长因素和流行规律以及综合防治等方面的研究成果,在此基础上对转移抗PVY基因烟草的研究现状作了全面总结评述,分析了转移PVY基因烟草存在的问题,提出了解决途径,展望了未来烟草脉带病的研究领域.     

烟草PVY Real-Time PCR定量检测体系的建立及应用

马铃薯Y病毒是近年来危害烟草生产的重要病毒之一,严重影响烟草的产量与品质。本研究利用DNAMAN软件对GenBank数据库中已登录的马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)全基因组序列进行序列比对,设计引物,以烟草肌动蛋白基因为内参,建立了烟草PVY的实时定量检测体系。获得的real-time PCR扩增基线平整,指数扩增明显,斜率大;稳定性和重现性好,变异系数小;循环阈值与PCR起始模板量对数之间存在良好的线性关系。与DAS-ELISA相比,该方法具有高效、灵敏、特异性强等优点,为从分子生物学水平上检测烟草中PVY提供了新的技术手段。     

转马铃薯Y病毒复制酶基因烟草的获得及抗病性分析

重组克隆ＤＮＡ用ＫｐｎＩ／ＢａｍＨＩ双酶切得到马铃薯Ｙ病毒ＮＩｂ基因，将其插入质粒ｐＲＯＫ２相应切点中构成植物表达载体。用重组质粒ｐＲＯＫ２转化农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａ－ｃｉｅｎｓ）ＬＢＡ４４０４菌株，叶盘法将ＮＩｂ基因转入烤烟品种ＮＣ８９的染色体，获得抗卡那霉素的转化再生植株。经抗性筛选、ＰＣＲ检测、无性扩繁和大量重复抗病鉴定，结果表明，转化烟草植株ＤＮＡ中整合了外源目的基因，且表现抵抗２０μｇ／ｍｌＰＶＹＮ的侵染，ＥＬＩＳＡ分析认为抗性植株无病毒累积，初步筛选出对ＰＶＹＮ侵染具有较高抗性的转基因烟草植株。     

受烟草花叶病毒侵染程度不同的烤烟叶片光合特性的变化

研究了受烟草花叶病毒(TMV)侵染程度不同的烤烟叶片光合特性的变化。结果表明,受TMV侵染的烟株叶片叶绿素和类胡萝卜素含量均有不同程度的下降,同时叶绿素荧光参数Fv/F0、Fv/Fm、ΦPSⅡ、qp和NPQ也有所下降。受TMV侵染的叶片的净光合速率(Pn)明显下降,在轻度感病条件下,引起Pn下降的主要原因是气孔限制;在重度感病条件下,引起Pn下降的主要原因是非气孔限制。     

马铃薯Y病毒与介体蚜虫传毒的关系研究进展

对蚜虫的传毒特性、影响传毒效率的因素、传毒机制、蚜虫传播与马铃薯Y病毒病发生流行的关系、蚜虫带毒的检测方法、治蚜与防病的关系等方面的研究进展进行了综述。