土壤中烟草根黑腐病菌的real-time PCR分子检测

根据烟草根黑腐菌与其它近缘真菌在ITS序列上的差异,设计PCR检测引物TbF/TbR,并通过对各菌株基因组DNA扩增验证其特异性;以接种10倍浓度梯度的根黑腐菌孢子的土壤DNA为模板,建立土壤烟草根黑腐菌real-time PCR检测的标准曲线,得出每个反应体系中分生孢子数目的对数（x）和对应的Ct值（y）之间呈线性关系:y=-1.5373x+24.955,R2=0.9909（P < 0.01）。通过对5块烟田土壤烟草根黑腐菌检测和烟田烟草根黑腐病的调查,证实上述方法可以准确检测土壤中烟草根黑腐菌孢子数量。      

棘孢木霉T-6对烟草促生及对黑胫病和根黑腐病的抗病作用

利用生防菌防治土传病害是植物病害防治中的重要措施,在温室盆栽条件下研究了棘孢木霉T-6对烟草促生和抗病效果。结果表明,棘孢木霉T-6对烟草黑胫病菌、烟草根黑腐病菌的菌丝生长抑制率分别达49.62%、59.23%;温室盆栽条件下,棘孢木霉T-6对黑胫病和根黑腐病的防治效果分别达到74.45%和75.14%。棘孢木霉T-6处理后提高了烟草叶片叶绿素含量、类胡萝卜素含量和超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶的活性,棘孢木霉T-6处理的烟株生长状况明显好于对照。棘孢木霉T-6能够促进烟株生长和提高烟草对黑胫病和根黑腐病的抗性,具有良好的应用潜力。     

放线菌F8对烟草黑胫病的拮抗作用及其产酶活性

从山东五莲于里黑胫病烟田健康烟株根际土壤分离到一株拮抗放线菌,编号为F8.为了科学评价该菌株在烟草黑胫病生防中的应用潜力,测定了其抑菌活性、产酶活性及控病效果,并通过形态学及16S rDNA序列分析研究其分类地位.结果表明,该菌株对于供试的烟草黑胫病菌具有较强的抑制作用,经无菌滤液处理后的菌丝生长畸形且停滞;该菌株具有几丁质酶、纤维素酶及蛋白酶活性.温室盆栽试验的防治效果显示接种后30 d,F8发酵液对烟草黑胫病的防效为70.3%;根据菌株形态特征、培养特性、生理生化特性及16S rDNA序列分析,鉴定该菌株为链霉菌属不产色链霉菌(Streptomyces achromogenes subsp. streptozoticus).     

皖南烟田三种土传病原物分子检测

为检测皖南烟田土传病害的分布,2011-2012年从皖南烟区烟田共采集土样51份,采用分子生物学方法对烟田土壤进行了烟草黑胫病、根黑腐病和青枯病检测。结果显示,烟田土壤中烟草黑胫病菌、根黑腐病菌和青枯病菌的阳性率分别为19.6%、41.2%和56.9%,3种烟草土传病原菌在皖南烟区多数烟田均有分布,其中青枯病菌检出率最高。本研究证明了应用分子生物学方法检测土传病原菌的可能性,生产上可为烟草种植提供理论依据。     

两株烟草根际拮抗菌的生防和促生效果研究

使用植物根际促生细菌(PGPR)来防治土传病害是目前生物防治的研究热点。在温室内进行盆栽试验以研究从烟株根际筛选出的两株生防细菌对烟草黑胫病的防治和促生效果,试验设4个处理,分别为接种生防菌YC0573、YC0136、药剂对照(甲霜灵锰锌)和发病对照。结果表明,温室条件下YC0573和YC0136的防治效果分别达到90.9%和95.4%,均高于甲霜灵锰锌(86.4%);接种生防菌的烟株生长状况明显好于对照烟株。对不同生长期烟株叶片叶绿素含量、电解质相对渗透率以及超氧化物歧化酶、过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶、过氧化氢酶等系统抗性相关指标进行测定,结果显示,两株拮抗菌可诱导烟株产生系统抗性(ISR),增强对病害的防御力,并且能有效防治烟草黑胫病,促进烟株生长,具有良好的应用潜力。     

健康与感染黑胫病烟株根际土壤与茎秆细菌群落结构与多样性

  背景和目的  黑胫病为烟草常见土传病害,当环境条件适宜时,土壤中的病原菌便会侵染烟株导致发病。  目的  研究感染黑胫病前后烟株根际土壤、发病茎秆以及病健交界茎秆细菌群落结构与多样性。  方法  以健康与感染黑胫病烟株根际土壤和茎秆为研究对象,通过PCR技术扩增样本中细菌16S rRNA基因的V3-V4可变区域,采用Illumina Miseq高通量测序技术对扩增片段进行测序,分析健康与感染黑胫病烟株不同部位细菌群落结构与多样性。  结果  感染黑胫病烟株根际土壤细菌群落较健康烟株丰富度增加,但多样性略有降低;发病烟株茎秆发病部位和病健交界部位的细菌群落丰富度和多样性较健康烟株均有增加,发病茎秆病健交界部位增幅显著。门水平上,变形菌门（Proteobacteria）、酸杆菌门（Acidobacteria）以及放线菌门（Actinobacteria）等为根际土壤优势菌门,且在健康与感染黑胫病烟株中各优势菌门相对丰度无显著性差异。茎秆样品中变形菌门与蓝细菌门为优势菌门,病健交界茎秆中2者的相对丰度与健康茎秆和发病茎秆存在显著性差异。属水平上,健康与感染黑胫病烟株根际土壤中主要菌属为Candidatus_solibacter、芽单胞菌属（Gemmatimonas）和鞘脂单胞菌属（Sphingomonas）等。所有茎秆样品中优势菌属为蓝细菌（norank_c_Cyanobacteria）和劳尔氏菌属（Ralstonia）,病健交界茎秆中蓝细菌相对丰度与健康茎秆和发病茎秆差异显著。  结论  感染黑胫病后烟株各部位细菌群落结构发生改变,细菌群落多样性增加;所有样品中均检测到青枯病病原菌茄科劳尔氏菌,表明烟草黑胫病与青枯病存在混合发生的情况。因此在对烟草黑胫病防治的同时也需加强青枯病的防治。      

枯草芽孢杆菌BC80-6发酵条件的优化及对烟草根黑腐病的控病效果

探究了3种枯草芽孢杆菌BC80-6处理液对烟草根黑腐病菌菌丝生长、孢子萌发的抑制作用,对其发酵条件进行了优化,并开展田间控病防效试验。结果表明:10~(-1)倍枯草芽孢杆菌BC80-6的活菌液对烟草根黑腐病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制效果最好,抑制率分别为93.2%、95.3%。通过单因素试验及正交试验对菌株BC80-6培养基的配方进行优化,确定培养基的最佳配方为蔗糖1.5%、酵母浸出物0.5%、硫酸镁0.06%(质量体积比)。最佳发酵条件:发酵温度28℃、时间24 h、初始pH 6.5、摇床转速180 r/min、接种量5%、装液量40 mL(250 mL三角瓶)。枯草芽孢杆菌活菌液对烟草根黑腐病的田间防效为88.19%。     

两株生防菌对烟草黑胫病的抑制活性及其鉴定

为测定烟草黑胫病生防菌K9-3和L14-2两菌株的生防潜力,通过对峙培养法、孢子萌发试验和盆栽试验测定对烟草黑胫病病原菌的抑制能力,以双层滤纸法和盆栽检测法测定在烟草根际定殖能力,并根据形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析,鉴定K9-3和L14-2两株生防菌。结果表明:在室内试验中,这两株生防菌可抑制烟草黑胫病病原菌菌丝的生长、游动孢子囊的形成、游动孢子的释放和休止孢子的萌发;在盆栽试验中,有效防治烟草黑胫病,L14-2对烟草黑胫病的防治效果达到96.29%,K9-3的防治效果为77.78%。同时,K9-3和L14-2均具有良好的根际定殖能力,以双层滤纸法测定其在烟草根部的定殖密度分别为1.30×105cfu.cm-1和7.00×104cfu.cm-1,在盆栽试验中两菌株在烟草根际土壤和烟草根部保持一定的定殖密度,在烟草根际土壤中的定殖密度随着时间经过有所下降,但在烟草根部定殖密度均稳定保持在105cfu.g-1以上。另外,两菌株的鉴定结果,K9-3鉴定为普城沙雷菌,L14-2鉴定为绿针假单胞菌。     

烟草根黑腐病根际拮抗菌的筛选、鉴定及其促生防病效果

为挖掘对烟草根黑腐病菌有较高拮抗效果的根际促生菌资源,从四川广元和陕西汉中等地采集30份烟草根际土壤,以烟草根黑腐病菌为靶标,采用温度筛选法和平板对峙法分离筛选出有高效拮抗活性的菌株,并对该菌株进行系统发育分析,采用抗生素标记法和温室盆栽法测定菌株LY79的定殖规律、对烟草的促生效果以及对烟草根黑腐病的防治效果。结果表明：（1）从烟草根际土壤分离到一株烟草根黑腐病高效拮抗菌株LY79,经形态学、生理生化鉴定结合16S rRNA和持家基因ropB分析将菌株LY79鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。（2）抗生素标记菌株LY79^A在烟草根际土定殖规律为先下降后上升再下降最终趋于稳定,且施药40 d后仍能在烟草根际土、根系、茎、叶分离到1.34×10⁶、2.91×10⁴、1.81×10⁴、1.01×10⁴ CFU/g的菌株LY79^A,说明其定殖能力较强。（3）菌株LY79对烟草促生效果较好,处理60 d后,烟草的株高、茎粗、整株干质量、根干质量分别增加了34.68%、37.85%、103.79%、72.55%。（4）1×10⁹ CFU/mL浓度的菌株LY79发酵液对烟草根黑腐病的盆栽防效达71.54%,仅略低于对照药剂70%甲基托布津500倍液。解淀粉芽孢杆菌LY79在烟草根黑腐病防治中具有较大的应用潜力。     

基于FUNGuild的镰刀菌根腐病发病烟株根际真菌群落研究

为了解镰刀菌根腐病发病烟株与未发病烟株在根际真菌群落结构与功能上的差异,联合应用高通量测序和FUNGuild技术研究了镰刀菌根腐病发病烟株与未发病烟株根际土壤中的真菌群落,结果表明:（1）镰刀菌根腐病发病烟株根际真菌群落的Shannon指数为4.14,而未发病烟株则高达4.71,未发病烟株根际真菌群落多样性显著高于发病烟株,镰刀菌根腐病发病烟株与未发病烟株根际土壤中的真菌群落在组成上有显著差异;（2）镰刀菌根腐病发病烟株根际真菌以病理营养型为主,占54.64%,而未发病烟株根际真菌则以腐生营养型为主,占46.10%;（3）镰刀菌根腐病发病烟株根际的病原菌相对丰度为30.73%,显著高于未发病烟株的1.12%,镰刀菌在病原菌群落中占绝对优势地位。高通量测序与FUNGuild联用可对土传病害感病烟株的根际优势病原真菌群落进行准确鉴定,可为烟草病害的防控提供科学参考。      

壳寡糖希夫碱配合物对感染TMV的烟叶中叶绿素和相关防御酶活性的调控效应

研究了壳寡糖希夫碱配合物药剂对烟草TMV抑制作用。结果表明:在珊西烟上施用壳寡糖希夫碱配合物药剂后叶片感染TMV的枯斑数减少;（2）施用3,5-二氯水杨醛壳寡糖希夫碱合铜于普通烟后,其受TMV侵染后烟叶中的叶绿素含量下降幅度降低,烟叶中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性均提高。      

采后苯丙噻重氮处理促进梨果实的愈伤

研究采后苯丙噻重氮（benzothiadiazole,BTH）处理对梨果实愈伤的促进作用,探讨苯丙烷代谢及抗氧化 酶在愈伤中的作用。以‘玉露香’梨果实为试材,人工模拟损伤后,用100 g/L BTH处理,在常温（20～25 ℃）、 相对湿度80%～85%的黑暗条件下进行愈伤,通过测定质量损失率和损伤接种梨果实的发病率来评价愈伤效果,比 较BTH处理组和对照组梨果实愈伤期间苯丙氨酸解氨酶、超氧化物歧化酶、过氧化物酶和多酚氧化酶的活力,以及 总酚、类黄酮和木质素含量的差异。结果表明：BTH处理对梨果实愈伤期间的质量损失率没有显著影响;愈伤期 间,BTH处理组和对照组梨果实的发病率均降低,处理组和对照组之间存在显著性差异（P＜0.05）,由此表明, BTH处理降低了梨果实的采后发病率;BTH处理明显提高了苯丙烷代谢途径关键酶苯丙氨酸解氨酶、抗氧化酶多酚 氧化酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活力;此外,BTH处理还有效促进了梨果实总酚、类黄酮和木质素的积 累。相关性分析结果表明,处理组梨果实的发病率和苯丙氨酸解氨酶活力、总酚含量和类黄酮含量之间呈显著负相 关,和过氧化物酶及多酚氧化酶活力之间呈极显著负相关。采后BTH处理可促进梨果实的愈伤,苯丙烷代谢以及过 氧化物酶和多酚氧化酶在愈伤组织形成中发挥了重要作用。     

无致病力青枯菌株对烟草青枯病的控制作用

为进一步揭示无致病力菌株对烟草青枯病的控病机理,以无致病力青枯菌株为材料,针对烟草青枯病进行了温室控病及田间小区试验,并通过抗药性标记测定其抗药性突变菌株在烟株体内的定殖状况,同时分析处理后烟株体内苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)的活性变化。结果显示:无致病力菌株Tbw1-7-3在温室盆栽条件下对青枯病的相对防效达89.4%,其田间防效在发病初期10~20 d与药剂农用链霉素处理间无明显差异,且其抗药性突变株在烟株根表和体内可短暂定殖。同时菌株Tbw1-7-3能提高寄主中PAL、POD和PPO 3种酶活性及促进病程相关蛋白(PRP)的积累。无致病力菌株对烟草青枯病具有较好的控制作用,以菌株Tbw1-7-3的防效最优。田间试验也显示Tbw1-7-3菌株在发病初期具有良好的控病效果。无致病力青枯菌株的控病机理可能兼有占位效应及诱导抗病性。      

壳寡糖膦酸酯对烟草花叶病毒抗性及其机理的初步研究

为开发新的生物源抗烟草花叶病毒(TMV)剂,对合成的5种壳寡糖膦酸酯进行了抗性盆栽试验研究,通过心叶烟的鉴定发现,5种药剂对TMV都具有显著的抗病效果,其中浓度为200 μg·mL-1的COS-P-3处理效果最佳,达到了90.79％的枯斑抑制率,分别比市售药剂二(辛基胺乙基)甘氨酸盐和宁南霉素提高51.8％和24.0％,显著提高了预防效果.用筛选出的抗病毒剂处理豫烟5号,烟草叶片的叶绿素含量比接种对照明显提高,而同时超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性均有不同程度的提高.结果表明,新型壳寡糖膦酸酯COS-P-3通过诱导烟草防卫反应、提高防御酶活性,保护叶片中叶绿体合成,从而减轻病毒的侵害.     

Sanitizer treatments alleviate lignification of sliced few-flower wildrice (Zizania latifolia Turcz.)

To investigate the effects of sanitation processing on the lignification of few-flower wildrice (FFW), fresh-cut FFW was treated with water (control), 80 mg/L peroxyacetic acid (PAA), 100 mg/L ClO₂ or 50 mg/L H₂O₂, packed in polyethylene film bags and stored at 2 °C for 21 days. Firmness, lignin, cellulose, hemicellulose and lignin forming related enzymes activities were examined. Sanitizer treatments inhibited the increases of firmness, lignin and cellulose than the control. The changes of hemicelluloses did not show a difference between the control and PAA treatment. An increase in the activities of phenylalanine ammonia lyase (PAL), peroxidase (POD) and polyphenol oxidase (PPO), and a reduction in catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) activities, were detected in the sliced FFW in the incompatible interaction. Compared with the control, sanitizers suppressed the activities of PAL, POD and PPO, but enhanced the activities of SOD and CAT during 21 days of storage. These enzymatic activities varied with different sanitizers. These results show that 80 mg/L peroxyacetic acid (PAA), 100 mg/L ClO₂ or 50 mg/L H₂O₂ sanitation processing can maintain tenderness, alleviate the lignification and fibrosis of fresh-cut FFW.     

拮抗菌Burkholderia contaminans对玫瑰香葡萄采后灰霉病的抗性诱导

以玫瑰香葡萄为实验试材,研究洋葱霍尔德氏菌（Burkholderia contaminans B-1）对玫瑰香葡萄采后灰霉病的抗性诱导机理,对经拮抗菌处理贮藏后果实的腐烂率及其抗性相关物质进行测定。结果表明：拮抗菌B. contaminans B-1可有效降低玫瑰香葡萄采后腐烂率,与对照相比,果梗腐烂率降低69.58%,果肉腐烂指数降低63.93%。拮抗菌处理对果实苯丙烷代谢途径、活性氧代谢途径和其他抗性相关酶类活性均有影响。与对照相比,B. contaminans B-1处理可提高葡萄果实苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）和多酚氧化酶（PPO）活性,促进过氧化氢（H2O2）含量积累,延缓过氧化氢酶（CAT）活性峰值出现的时间。此外,拮抗菌处理也可以诱导果实病程相关蛋白几丁质酶（CHI）和β-1,3葡聚糖酶（GLU）活性的上升。     

烤烟伸根期对低温胁迫的生理响应

【目的】研究低温胁迫对伸根期的烤烟生理特性的影响。【方法】采用盆栽方式,在人工培养箱中对耐冷性不同的烤烟品种红花大金元（低温不敏感型）和K326（低温敏感型）进行低温胁迫处理,研究不同低温胁迫时间烤烟的渗透调节物质、保护酶活性、多酚代谢、光合速率和光合色素等的变化情况,筛选出适用于烤烟耐冷性鉴定的指标。【结果】随低温胁迫时间的延长,烤烟的净光合速率和叶绿素耐冷系数呈下降趋势,下降速率与低温胁迫程度呈正相关,与品种的耐低温能力呈负相关;丙二醛和相对电导率耐冷系数在低温胁迫的前3 d随胁迫时间的延长呈上升趋势,上升速率与品种耐低温能力呈负相关;过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、多酚氧化酶（PPO）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性和可溶性蛋白、可溶性糖及总酚耐冷系数随低温胁迫时间的延长先升高后下降,低温不敏感型材料上升速度高于低温敏感型材料。相关分析表明,低温胁迫下,烟叶相对电导率耐冷系数与叶绿素、净光合速率、SOD活性的耐冷系数呈极显著负相关,与可溶性蛋白、POD活性、PAL活性的耐冷系数呈显著负相关,与丙二醛、叶绿素a/b的耐冷系数呈显著正相关。主成分分...     

诱导子对烟草植株叶片酶活性及香气物质积累的效应

采用盆栽试验,通过叶面喷施诱导子,考察了诱导子对烟草次生代谢关键酶活性及香气物质积累的影响.结果表明,经诱导子处理过的烟草叶片苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶和过氧化物酶活性均高于对照,且腺毛分泌物、石油醚提取物、类胡萝卜素、多酚类物质含量也高于对照.综合考虑,100 mg/L浓度的茉莉酸甲酯诱导子和200 mg/L浓度的壳聚糖诱导子处理烟叶较有利于烟草香气成分的生成.     

H2O2对家蝇蛹内部几种酶活性的影响

目的研究外源H2O2对家蝇蛹内与抗性相关的几种酶活性的影响。方法通过H2O2诱导,测定家蝇蛹内过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)以及多酚氧化酶(PPO)的活性变化。结果H2O2处理后蛹内CAT和AsA-POD的活性变化规律与处理前差别不大;POD活性在H2O2处理后12h内出现活性高峰,约为对照组的2.5倍,此后稍高于对照组,最后基本与对照组持平;PPO活性在处理后12h内与对照组相当,此后活性骤然升高,处理后24h达到对照组的2.13倍,然后变化速度减慢,但一直维持在对照组的1.3倍左右,48h后活性开始下降。结论H2O2对CAT和AsA-POD的活性影响较小,对POD和PPO的活性有一定的影响。     

H2O2对家蝇蛹内部几种酶活性的影响

目的研究外源H2O2对家蝇蛹内与抗性相关的几种酶活性的影响。方法通过H2O2诱导,测定家蝇蛹内过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、抗坏血酸过氧化物酶（AsA-POD）以及多酚氧化酶（PPO）的活性变化。结果H2O2处理后蛹内CAT和AsA-POD的活性变化规律与处理前差别不大;POD活性在H2O2处理后12h内出现活性高峰,约为对照组的2.5倍,此后稍高于对照组,最后基本与对照组持平;PPO活性在处理后12h内与对照组相当,此后活性骤然升高,处理后24h达到对照组的2.13倍,然后变化速度减慢,但一直维持在对照组的1.3倍左右,48h后活性开始下降。结论H2O2对CAT和AsA-POD的活性影响较小,对POD和PPO的活性有一定的影响。