金纳米棒联合125I粒子诱导肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

【摘要】 目的 探讨叶酸偶联二氧化硅包覆的金纳米棒（GNRs@SiO2 FA）联合125I粒子诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其可能的机制,为临床提高肝癌125I粒子组织间植入疗效提供理论依据。方法 将体外培养的肝癌HepG2细胞随机分成空白对照组,单纯金纳米棒组,单纯125I粒子照射组及金纳米棒联合125I粒子照射组,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,PT PCR检测bax mRNA、bcl 2 mRNA表达水平,免疫细胞化学检测凋亡相关基因bax、bcl 2表达水平及肿瘤细胞核增殖性抗原Ki67表达情况。结果 流式细胞仪检测4组肝癌HepG2细胞凋亡率,单纯金纳米棒组、单纯125I粒子照射组较空白对照组均有升高（P < 0.05）;联合组较单纯金纳米棒组和单纯125I粒子照射组明显升高,差异有统计学意义（P < 0.05）。联合组bax mRNA表达明显高于单纯金纳米棒组与单纯125I粒子照射组,bcl 2 mRNA表达明显低于单纯金纳米棒组与单纯125I粒子照射组。肝癌HepG2细胞bax表达于胞质,bcl 2表达于胞质和胞膜,Ki67表达于胞核,均表现为棕黄色细颗粒状沉淀。4组肝癌HepG2细胞凋亡相关基因bax、bcl 2及增殖核抗原Ki67蛋白表达量比较,差异均有统计学意义（P < 0.05）;联合组较单纯金纳米棒组和单纯125I粒子照射组Bax蛋白阳性表达率明显升高,Bcl 2、Ki67蛋白阳性表达率明显降低,差异有统计学意义（P < 0.05）。结论 金纳米棒与125I粒子联合应用能更有效增加肝癌细胞凋亡率,其机制可能是通过增加Bax蛋白的表达,抑制Bcl 2蛋白的表达来实现。
     

不同活度125I粒子植入抑制兔VX2肝癌机制研究

【摘要】 目的 探讨125I粒子组织间植入诱导肝癌细胞凋亡的机制。比较不同活度125I粒子组织间植入诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖的作用强度。方法 将24只兔VX2肝癌模型随机分为3组,分别植入不同初始活度的125I粒子:0 mCi组（对照组,n=8）、0.7 mCi组（n=8）及1.0 mCi组（n=8）。5周后处死实验兔,取出肿瘤病灶,检测125I粒子对肿瘤细胞凋亡、肿瘤生长相关因子表达的影响及caspase 3 活性改变。结果 不同初始活度125I粒子均可使肿瘤细胞凋亡率上升, Bcl 2、VEGF表达下调,Bax表达上调,1.0 mCi 125I粒子组作用均更加明显（P＜0.05）。不同初始活度125I粒子可增加肿瘤组织中caspase 3活性,两治疗组间差异无明显统计学意义（P＞0.05）。结论 125I粒子植入后不仅通过诱导肿瘤细胞凋亡抑制肿瘤生长、增殖,还影响凋亡相关基因及编码蛋白表达,抑制肿瘤细胞新生血管生成。     

不同浓度乙醇消融VX2兔移植性肝肿瘤的实验研究

目的探讨不同浓度乙醇经皮瘤内注射(PEI)疗法对兔移植型肝癌的治疗效果.方法31只新西兰兔肝内植入VX2瘤块(1 mm3),移植后14 d行CT扫描,测量肿瘤体积.然后采取以下治疗:A组经皮瘤内注射无水乙醇(9只)、B组注射75%乙醇(9只)、C组注射50%乙醇(9只)、D组未予任何处理(对照组,4只).治疗后7、14、21 d分别行CT、MRI扫描,观察病灶的变化并测量大小,每组处死2只取病理观察肿瘤大小、光镜下观察肿瘤的凝固性坏死与对照组比较,治疗后60d内观察各组生存期的长短.结果PEI治疗前和治疗     

椭球形金纳米棒作为癌细胞靶向探针的研究

【摘要】 目的 制备椭球形核-壳结构二氧化硅包覆的金纳米复合材料。方法 选用二氧化硅作为壳材,制备椭球形二氧化硅包覆的金纳米棒,并用硅烷耦联剂和二氧化硅耦联,将叶酸联接到二氧化硅包覆的金纳米棒（GNRs@SiO2?蛳 FA）,用罗丹明异硫氰酸酯与GNRs@SiO2?蛳 FA表面的氨基基团反应,得到罗丹明标记的GNRs@SiO2?蛳 FA。用MTT比色法研究其生物相容性。结果 表面修饰后的金纳米棒有良好的生物相容性。透射电镜观察到金纳米颗粒以细胞吞噬方式进入细胞,可靶向结合于叶酸高表达的癌细胞;激光共聚焦显微镜见GNRs@SiO2?蛳 FA能携带荧光探针进入细胞内,可作为荧光物质或药物的载体。结论 GNRs@SiO2?蛳 FA可靶向作用于癌细胞,并可作为荧光试剂或其他生物标记物的载体,应用于疾病的诊断及肿瘤125I粒子治疗等方面。     

液氮冻存瘤块构建VX2肝癌模型效果研究

【摘要】 目的 观察液氮冻存的活性良好VX2兔肝癌瘤块复苏后构建兔肝癌模型的效果,并与常规方法构建兔肝癌模型作比较。方法 选取生长状态良好的VX2瘤块,剔除坏死组织并用锡箔纸包裹,液氮冻存3个月。20只日本大耳白兔随机分为两组,A组（对照组,n=10）予新鲜瘤块肝脏原位种植法构建兔肝癌模型,B组（实验组,n=10）予新鲜瘤块液氮冻存3个月复苏后肝脏原位种植法构建兔肝癌模型。2周后作增强CT扫描和DSA血管造影观察成瘤效果及瘤体血供情况。荷瘤兔处死后观察大体标本并作苏木精-伊红（HE）染色、血管内皮细胞生长因子（VEGF）和CD31免疫荧光染色,后者用于计算微血管密度（MVD）。结果 A组和B组建模成功率均为100%。两组肿瘤生长、VEGF和MVD表达均无明显差异。结论 液氮冻存瘤块构建的兔VX2肝癌模型CT、DSA影像学表现及组织学特征与常规方法无显著差异,瘤块整体冻存法可较好地保存瘤株活性,从而节省人力物力。
     

温控射频消融治疗VX2肝癌实验研究

【摘要】 目的 探索不同温度控制条件下射频消融（RFA）治疗兔VX2肝癌后靶区内肿瘤细胞凋亡及增殖变化。方法 采用开腹组织块法构建兔VX2肝癌模型,随机分为对照组（n=6,未行RFA）和实验组A组（n=24,射频针温度50～70℃）、B组（n=24,射频针温度70～90℃）、C组（n=24,射频针温度90～110℃）。实验组分别接受CT引导下不同温控RFA,靶区由消融中心向外周依次分为针道区、消融区和交界区;采用苏木精-伊红（HE）染色观察肿瘤及周围肝组织病理学变化,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）和增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组化法检测各区带肿瘤细胞凋亡及增殖情况。结果 RFA后实验组各组各区带6个时间点（术后即刻,1、3、7、14、21 d）标本肿瘤细胞凋亡指数（AI）和增殖指数（PI）与对照组比较,均有统计学差异（P＜0.05）;B、C组区带各时间点AI均高于A组（P＜0.05）,B、C组间无明显差异（P＞0.05）;术后7、14、21 d时B、C组消融区和交界区PI均低于A组（P＜0.05）,且术后21 d时C组PI低于B组（P＜0.05）。结论 RFA温控在50～110℃能达到基本灭活针道区兔VX2肝癌细胞的作用,选择90～110℃温控更利于彻底控制肿瘤。

     

介入性灌注化疗与热灌注化疗对兔VX２肝癌模型的作用比较研究

目的观察热灌注化疗对兔VX２肝癌模型疗效及安全性。方法新西兰大白兔２０只,制备兔肝VX２模型,随机分为对照组（A）和实验组（B）,分别A组给于常温（２２～２５℃）５％葡萄糖１００ml ＋５－Fu（２０mg ／kg）,B组给于６０℃５％葡萄糖１００ml ＋５－Fu（２０mg ／kg）,用B超观察处理前后肿瘤大小,抽血查ALT变化。结果A组肿瘤体积由（１６２７±４７３）mm ３ 缩小为（１３３４±６４１）mm ３ ,B组肿瘤体积由（１６８２±３９７）mm ３ 缩小为（１１３０±５５９）mm ３ ,两组差别有统计学意义（P＜０．０５）;ALT A组由（７５５±２０３）u／L增加为（８３４±２６２）u／L,B组由（７８１±１９７）u／L增加为（８６５±２３７）u／L,组间差异无统计学意义。结论介入性热灌注化疗比常温灌注化疗对兔VX２肝癌模型有更高的抑制作用。     

两种方法建立兔VX2肝癌模型的比较及影像学评估

【摘要】 目的 比较两种方法建立兔VX2肝癌模型的成瘤情况及CT、DSA表现。方法 采用新西兰白兔40只,随机分成A、B两组,每组20只。A组采用开腹包埋植入VX2瘤块,B组采用CT引导下穿刺种植VX2瘤块,术后2周行CT及DSA检查。结果 A组成瘤率为50%（10/20）,B组为85%（17/20）,组间差异有统计学意义（P < 0.05）。与A组相比,B组操作简单、成瘤率高。两组CT及DSA造影表现一致。结论 两种方法建立的兔VX2肝癌模型的CT及DSA影像学表现无差别,CT引导下经皮穿刺种植法的应用优于开腹种植。

     

海藻酸钠微球与碘化油栓塞治疗兔VX2肝转移瘤对比研究

【摘要】 目的 对比海藻酸钠（KMG）微球与碘化油栓塞治疗兔VX2肝转移瘤模型效果,分析KMG微球栓塞治疗肿瘤的安全有效性及可行性。方法 VX2肿瘤细胞悬液（浓度1×107/ml）1 ml接种新西兰大白兔脾脏,制作兔肝转移瘤模型。50只成功建模的兔模型随机分为3组,A组（n=20）以KMG微球栓塞肝固有动脉,B组（n=20）于以碘化油栓塞肝固有动脉,C组（n=10）未作栓塞。A、B组接种瘤株后15 d作DSA造影及栓塞治疗。分别观察各组模型兔子生存时间（接种VX2瘤株至死亡）,栓塞前、栓塞后7 d及栓塞后14 d测定谷氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）值,栓塞后7 d CT灌注扫描检测瘤灶边缘血流量（BF）、血容量（BV）及肝动脉分数（HAF）;兔模型死亡后取肝脏作苏木精-伊红（HE）染色病理切片,镜下观察肿瘤坏死情况。结果 A组KMG微球栓塞剂平均用量为（0.15±0.03） g,B组碘化油栓塞剂平均用量为（1.3±0.4） ml,均无栓塞剂反流。栓塞后7 d、14 d血清ALT、AST值,A、B两组均较术前明显升高,C组变化不明显;A、B两组与C组相比,差异均有显著统计学意义（P=0.015,P=0.005）,但A、B两组间差异无统计学意义（P=0.423）。栓塞后7 d CT灌注扫描显示,A组BV、BF、HAF值明显低于B组（P=0.003,P=0.002,P＜0.000 1）。兔模型生存时间分别为A组（46.28±2.85） d、B组（43.92±2.17） d、C组（33.44±1.86） d,A、B两组均明显长于C组（P=0.001,P=0.004）。A、B两组组织病理HE染色显示,癌巢中央可见大片坏死,坏死区中残存瘤细胞核明显固缩。结论 KMG微球作为肿瘤栓塞剂安全有效、可行。KMG微球栓塞治疗兔VX2肝转移瘤效果优于碘化油。

     

兔VX2肝转移瘤影像学表现与病理结构对照研究

【摘要】目的探讨兔肝转移瘤模型血供来源及其影像学表现与病理结构的关系。 方法新西兰大白兔40只,于脾脏种植VX2肿瘤细胞悬液1 ml,浓度1×107/ml。瘤株接种后第14天作CT灌注扫描,第15天作DSA造影,分别观察肝转移瘤数目及大小,测定CT灌注成像转移瘤中心区域、转移瘤边缘及瘤周正常肝组织血流量(BF)、血容量(BV)、肝动脉供血分数(HAF),计算肝动脉灌注量(HAP)和门静脉灌注量(PVP);镜下观察转移瘤病理切片。 结果38只兔完成CT灌注扫描、DSA。CT发现6只兔有1个肝转移瘤,32只兔有多发肝转移瘤,大小为1.2～2.1 cm,以环形强化为主要特征;DSA显示1只兔有1个肝转移瘤,37只兔有多发肝转移瘤,大小为0.9～2.3 cm,以环形染色为主要特征。18只兔(47.37%)经DSA发现的肝转移瘤数明显多于CT,DSA发现而CT未发现的肝转移瘤大小为0.9～1.3 cm。DSA和CT分别显示37只兔(97.37%)和32只兔(84.21%)有多发肝转移瘤(P＜0.01)。CT灌注扫描显示肝转移瘤边缘及中心区域BV值及BF值高于瘤周正常肝组织,转移瘤边缘高于中心区域(P＜0.01);转移瘤边缘HAP值高于瘤周正常肝组织,PVP值低于瘤周正常肝组织(P＜0.01)。低倍镜下病理观察显示转移瘤中心为坏死组织和少量瘤细胞,坏死细胞排列松散,呈嗜碱性红染;外周为浓染的肿瘤细胞、结缔组织及炎性细胞,与正常组织边界欠清,可见丰富的新生毛细血管;10×40倍镜下观察转移瘤中心坏死区为大量无核的坏死细胞,少量瘤细胞无胞质,仅可见浓染细胞核;外周为生长活跃的瘤细胞,形态不规则,胞核大而深染,胞质量少,可见丰富血窦。 结论DSA检出较小肝转移瘤优于CT,肝转移瘤主要供血来源于肝动脉,肝转移瘤中心区域主要为坏死组织和少量瘤细胞,外周主要为生长活跃的瘤细胞和丰富的新生毛细血管,如此病理结构决定了肝转移瘤CT增强扫描以环形强化为主要特征,DSA以环形染色为主要特征。

     

兔VX2膀胱癌移植瘤模型实验研究

【摘要】 目的 通过模拟原位膀胱癌发生机制构建兔VX2膀胱癌移植瘤动物模型,研究其生物学特性及影像学表现。方法 采用同轴法穿刺接种VX2细胞株于25只新西兰大白兔膀胱,接种术后14、21、28 d分别作CT平扫及增强扫描,评估肿瘤种植及生长情况。取兔膀胱组织标本作大体解剖学及组织病理学检查,同时观察腹腔淋巴结及肝肺转移情况。结果 22只实验兔建模成功,植瘤成瘤率为88.0%（22/25）。植瘤后14、21、28 d瘤体平均长径分别为（1.38±0.20） mm、（2.30±0.08） mm、（3.22±0.24） mm,且瘤体变化差异有显著统计学意义（P＜0.01）。VX2移植瘤CT表现为膀胱壁局部不规则增厚或肿块突起,呈均匀强化（14 d）或环型强化（21、28 d）,肿瘤腔内呈不同程度充盈缺损。种植瘤大体形态及其影像学特征基本相符,组织病理学表现为血管丰富的低分化鳞状细胞癌,呈浸润性生长,21 d后瘤体中心出现坏死,21、28 d出现肝、肺及腹腔淋巴结转移。结论 本研究成功构建兔VX2膀胱移植瘤模型,基本反映了膀胱癌发生与发展过程,适合CT动态观察及实验研究。
     

经皮注射医用臭氧治疗兔VX2移植瘤的实验研究

【摘要】 目的 观察臭氧局部注射治疗实体肿瘤的安全性、对肝肾功能的影响及所致的组织病理学改变。方法 建立兔VX2移植瘤模型24只,分为三组,A、B组均为9只,C组6只（假手术组）。向A、B组瘤内分别注入40 μg/ml和70 μg/ml浓度臭氧,并于术前1 d、术后1、3 d抽静脉血。术后3 d处死动物,取病理标本。观察术后动物生命体征、并发症及大体标本的组织学变化。结果 实验动物术后24 h内均出现活动减少、纳差,对刺激反应差,精神萎靡, 24 h后恢复正常。A、B组各有1只荷瘤兔于术中或术后1 h内死亡。术前1 d,术后1、3 d各组血清丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶及肌酐比较无明显差异。肉眼及光镜下见A、B组坏死区大体标本无明显差异。C组镜下可见部分肿瘤细胞突破肌层向深处生长,肿瘤细胞排列紊乱,大量癌巢形成,细胞核大深染,核分裂,异性核。结论 VX2肿瘤内注入浓度为40 μg/ml和70 μg/ml的医用臭氧安全、有效。     

经皮瘤内注射长春瑞滨碘油乳剂治疗兔VX2瘤的实验研究

【摘要】 目的 探讨经皮穿刺瘤内注射长春瑞滨碘油乳剂治疗兔VX2肿瘤的疗效。 方法 建立18只兔VX2肿瘤模型,随机分为3组:长春瑞滨碘油乳剂组8只（A组）,单纯长春瑞滨溶液组8只（B组）,空白对照组2只（C组）。在超声引导下经皮瘤内注药后的第4天行肿瘤超声造影,计算超声造影及大体标本的肿瘤坏死率,并行肿瘤组织病理检查。 结果 A、B、C 3组的超声造影肿瘤肿瘤坏死率分别为64.7%、29.8%、1.7%,大体肿瘤坏死率分别为57.6%、28.2%、1.6%。A组超声造影见肿瘤大部分无增强,病理检查见肿瘤广泛坏死。 结论 经皮瘤内注射长春瑞滨碘油乳剂治疗兔VX2肿瘤具有良好疗效。

     

经肝动脉碘化油/无水乙醇混合剂栓塞消融术治疗兔VX2肝癌的实验研究

【摘要】 目的 通过比较不同容积比例的碘化油-无水乙醇混合剂（Lipiodol ethanol mixture,LEM）治疗兔VX2肝癌模型的效果,确定LEM的最佳容积比例。方法 将18只新西兰白兔按碘化油 ∶ 无水乙醇容积比例3 ∶ 1（A）、2 ∶ 1（B）、1 ∶ 1（C）、1 ∶ 2（D）、1 ∶ 3（E）、1 ∶ 4（F）分为6组,每组3只。1周后取肿瘤组织行病理学检查,观察肿瘤生长率,肿瘤微血管密度,肿瘤细胞凋亡指数（apoptosis index,AI）及肿瘤边缘肝组织损伤情况。结果 A、E、F 3组肿瘤体积增大,A组肿瘤生长率明显高于其他5组,差异有统计学意义（P < 0.05）,B、C、D 3组肿瘤体积缩小,但与肿瘤体积增大的E、F组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。不同容积比例LEM中,无水乙醇比例与肿瘤微血管密度呈负相关（R2 = 0.840,F = 89.432,P < 0.001）。A组肿瘤AI明显低于C、D、E、F组（P < 0.05）, A、B组间差异无统计学意义（P > 0.05）。B组与C、F组间差异有统计学意义（P < 0.05）,其他各组间差异无统计学意义（P > 0.05）。A、B组肿瘤周围肝组织损伤明显低于其他各组（P < 0.05）。结论 从安全性方面考虑,LEM的最佳容积比例为2 ∶ 1。若能做到超选择插管至肿瘤供血动脉,严密透视监视下注射,适当提高无水乙醇比例,疗效更佳。
     

电化学治疗兔肝VX2肿瘤后残余肿瘤细胞的生物学特性

【摘要】 目的 探讨电化学治疗（EChT）兔肝VX2肿瘤后残余肿瘤细胞生物学特性的变化。方法 采用移植方法建立兔肝VX2肿瘤模型后行EChT,通过控制肿瘤边缘的酸碱度造成肿瘤残余,采用免疫组化、TUNEL法、活组织细胞内显微注射、明胶酶谱法及电子显微镜观察等方法探讨残余肿瘤细胞生物学特性的变化。结果 ① 病理学观察显示EChT后第1周时残余肿瘤细胞被大量纤维组织包绕;治疗后第2周,残余肿瘤细胞数目增多,其周围仍可见较多的纤维组织。超微结构观察显示,治疗前肿瘤细胞核质比例增大,核异型性明显,线粒体数目较多但发育幼稚,细胞间连接较少。EChT后第1、2周,胞质内线粒体体积增大,发育较成熟,细胞间连接增多。② 增殖细胞核抗原（PCNA）及Ki?蛳 67阳性指数在第1、2周时均比对照组明显降低;凋亡指数及Bax阳性指数在EChT后第1、2周时均明显高于对照组;凋亡指数与Bax阳性指数呈显著正相关。③ Cx32阳性指数及LY扩散范围在治疗后第1、2周均明显高于对照组;显微注射后LY CH荧光染料在肿瘤组织内的扩散范围与Cx32阳性指数呈显著正相关。④ 明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶-9（MMP?蛳 9）相对含量的结果显示与免疫组化染色结果一致,治疗后第1、2周均明显低于对照组。EChT治疗后2周内残余肿瘤细胞的增殖活性明显降低,凋亡指数明显增加,缝隙连接细胞间通讯（GJIC）功能明显改善,侵袭能力明显降低。结论 较大肝癌行EChT治疗时肿瘤残余将难于完全避免,残余癌细胞生物学特性的变化对正确选择治疗后复查及再次治疗时机,提高疗效有重要意义。
     

兔VX2门静脉癌栓模型构建

【摘要】 目的 经肠系膜上静脉插管注入VX2肝癌瘤粒或瘤条,构建不同类型兔门静脉癌栓（PVTT）模型。方法 剖腹后直视下穿刺肠系膜上静脉,在兔门静脉主干近端置入经皮肝穿刺胆道造影（PTC）套管。20只健康大白兔随机分成两组,A组（n=10）注入0.1～0.2 cm瘤粒,B组（n=10）注入0.1 cm×1.5～2.0 cm瘤条。术后1周,DSA造影观察癌栓生长情况,处死后作病理学观察。结果 两组实验兔均成功完成门静脉插管,瘤株接种成功率均为100%。术后1周造影显示,A组8只兔见门静脉一级分支癌栓,2只兔见门静脉主干癌栓,10只兔均见肝内弥漫散在的多发转移灶;B组10只兔均见门静脉主干癌栓,肝实质内未见弥漫性转移灶。结论 采用介入技术将不同大小的VX2肿瘤瘤粒或瘤条种植于兔门静脉内,能形成伴有或不伴有肝内弥漫性转移灶的门静脉主干或一级以上分支癌栓模型。