香附挥发油诱导A549细胞凋亡作用

超临界CO2装置提取香附挥发油(ACA),研究ACA体外诱导A549细胞凋亡作用及机制。采用MTT法和LDH活性测定确定ACA杀伤A549量效和时效关系;Annexin V-EGFP/PI双重荧光染色观察ACA致细胞凋亡。测定细胞内Ca2+,MDA和ATP浓度及SOD活性,罗丹明123(Rh 123)检测线粒体膜电位(Δψ)分析其诱导凋亡的机制。结果显示:与阳性对照药顺铂(cisplatin,DDP)相比较,ACA诱导肺癌细胞A549凋亡作用效能强大、起效迅速。ACA诱导细胞钙超载、增加氧化损伤,抑制能量代谢致线粒体结构和功能受损,最终使线粒体凋亡通路激活诱导A549细胞凋亡。ACA在抗肺癌药物开发方面具有良好的前景。     

液体发酵桦褐孔菌三萜类成分抑制肿瘤细胞活性研究

探究桦褐孔菌液体深层发酵所得菌丝体中三萜类成分的抗肿瘤活性。采用高效液相色谱法鉴定桦褐孔菌液体深层发酵产物中含有5种已知具有肿瘤细胞生长抑制活性的三萜类成分,采用MTT比色法分析三萜类成分对卵巢癌细胞ES2、SKOV3和肺癌细胞A549和PC9的生长活性的影响,通过细胞周期和细胞凋亡实验研究三萜类成分对卵巢癌细胞和肺癌细胞增殖的影响。结果表明:经过三萜类成分处理3d和6d的肿瘤细胞生长活性均被明显抑制,对卵巢癌细胞ES2抑制的IC50分别为21.1μg/mL和17.6μg/mL,对SKOV3抑制的IC50值分别为33.8μg/mL和10.9μg/mL;对肺癌细胞PC9抑制的IC50分别为21.4μg/mL和19.7μg/mL、对A549抑制的IC50值分别为28.5μg/mL和23.5μg/mL。细胞周期实验结果表明三萜类成分对ES2、A549、PC9、SKOV3的阻滞可能发生在G0/G1期,在16.0μg/mL的三萜类成分处理下,PC9、A549、ES2、SKOV3处在G1期的细胞比例与对照组中各细胞G1期的占比分别提高32.3%、45.7%、10.9%、6.2%,S期的细胞数降低19.1%、57.3%、23.1%、17.5%。细胞凋亡结果表明,经过药物处理2d后,三萜类成分能够有效的诱导卵巢癌细胞ES2、SKOV3和肺癌细胞A549和PC9的细胞凋亡,进一步验证桦褐孔菌三萜类成分具有肿瘤抑制活性。     

戊型肝炎病毒感染调控TLR3信号通路的研究

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是导致急性戊肝的主要原因.通过建立基因IV型HEV感染A549细胞模型,研究病毒感染后TLR3信号通路相关因子表达的变化.病毒感染A549细胞后通过实时荧光定量PCR检测IFN-β的mRNA表达量,Western blot分析磷酸化IRF3(pIRF3)和IKKε蛋白表达水平的变化.结果表明:HEV感染A549细胞后细胞内IFN-β的相对表达水平显著下降,TLR3信号通路介导的pIRF3及IKKε蛋白在病毒感染后表达量显著下降.基因Ⅳ型HEV能够抑制TLR3信号通路介导的IRF3的磷酸化及IKKε蛋白的表达,从而抑制了IFN-β的表达,为进一步研究HEV复制机制和致病机理奠定基础.     

Sp1促进A549细胞增殖、EMT、侵袭和血管生成的研究

研究Sp1转录调控原癌基因c-Met促进肺癌A549细胞增殖、EMT转化、侵袭和血管生成,抑制A549细胞凋亡的分子机制.首先采用双荧光素酶报告基因和染色质免疫共沉淀(ChIP)法检测Sp1与c-Met基因启动子结合情况.之后,在A549细胞中过表达和沉默表达Sp1,Western-blotting法和免疫荧光法研究Sp1转录调控c-Met,促进A549细胞增殖、EMT转化、血管生成,侵袭并抑制A549细胞凋亡的分子机制.与癌旁组织和正常组织相比,在肺癌组织样本中,Sp1和c-Met均呈现高表达;Sp1能够与c-Met基因启动子结合;Sp1转录调控c-Met通过激活c-Met-ERK通路,促进A549细胞增殖、抑制A549细胞凋亡;Sp1转录调控c-Met亦能促进A549细胞EMT转化,侵袭和血管生成. Sp1转录调控c-Met能够促进A549细胞增殖、EMT转化,侵袭和血管形成,抑制A549细胞凋亡.在肺癌发生发展进程中,Sp1转录调控c-Met发挥重要作用.     

Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T细胞白血病Molt-4细胞周期和凋亡的影响

为了研究Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T淋巴细胞白血病细胞株Moh-4增殖和凋亡的影响,采用MTT法检测了BILB021对Molt-4细胞增殖的影响,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化,流式细胞术检测药物作用前后细胞周期和凋亡的改变,Westernblotting检测BIIB02l对细胞周期和凋亡相关蛋白的影响。结果显示：BIIB021以时间和刺量依赖性方式抑制Molt-4细胞增殖,48、72h的IC50分别为384．6nmol／L和301．8nmol／L;Hoechst33258染色可观察到细胞内出现凋亡小体,且随着药物浓度增大,凋亡小体的数目也逐渐增多;流式结果同样显示,随着药物浓度升高,细胞凋亡率逐渐上升,400nmol／LBILB021可诱导细胞凋亡率达34．4％;另外,BIIB021可显著阻滞细胞于GO／G1期;Westernblotting显示BILB021激活Caspase-8、-9、-3和PARP,下调CDK4／6,上调p21和p18,并能明显抑制Akt和p65。由此表明,BIIB021能激活死亡受体途径和线粒体途径诱导Molt-4细胞凋亡,并通过影响CDK4／6和p21、p18使得Molt-4细胞被阻滞于GO／G1期,抑制细胞增殖;BIIB021对Mott-4的Akt和NF-kB也有抑制作用。     

胡椒碱对人胃癌SGC-7901细胞抗肿瘤活性的体外实验研究

胡椒碱（Piperine）是一种从胡椒属植物中提取的生物碱,具有镇静、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性.探讨胡椒碱对人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用.采用MTT比色法测定其对SGC-7901细胞增殖抑制率;通过免疫荧光法、流式细胞术、Western blot法对其进行抗癌机制研究.MTT结果显示Piperine处理细胞72h的IC50值为37.41 μmol·L-1,且呈现时间剂量依赖性; Hoechst33258染色荧光显微镜观察发现Piperine能诱导SGC-7901细胞核形态学改变,部分细胞呈现典型的凋亡形态学特征;Annexin V-FITC/PI荧光双染结果亦证实Piperine可以诱导SGC-7901细胞发生凋亡;DAPI和DCFH-DA染色流式细胞术分析显示Piperine诱导SGC-7901细胞G2/M期阻滞、细胞活性氧产生增加; Western blot分析发现Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达逐渐增加,呈现剂量依赖性,且Bax/Bcl-2比例增加.因此,Piperine具有抑制SGC-7901细胞增殖和诱导凋亡的抗肿瘤活性.     

过表达Akt1细胞株的构建及鉴定

Akt1是细胞信号传导通路中的关键信号分子,具有促进细胞增殖、生长、迁移、侵袭,以及抑制细胞凋亡,抵抗化疗和放疗等重要作用。文章通过构建pLJM1-Akt1重组质粒,利用慢病毒侵染的方法将重组质粒转染至K562、Bel-7404细胞,用嘌呤霉素筛选得到Akt1稳定过表达的Bel-7404/Akt1、K562/Akt1细胞株,通过Western bloting分析细胞株中Akt1的表达情况。结果显示：Bel-7404/Akt1与K562/Akt1细胞中Akt1表达量明显高于野生型Bel-7404细胞与K562细胞,成功构建过表达Akt1的K562/Akt1、Bel-7404/Akt1稳转细胞株。Akt1过表达细胞株的成功构建为寻找和筛选高效、低毒、强特异性的Akt1抑制剂以及逆转细胞多药耐药（multidrug resistance,MDR）的研究提供了实验模型。     

过表达Akt1细胞株的构建及鉴定

Akt1是细胞信号传导通路中的关键信号分子,具有促进细胞增殖、生长、迁移、侵袭,以及抑制细胞凋亡,抵抗化疗和放疗等重要作用。文章通过构建pLJM1-Akt1重组质粒,利用慢病毒侵染的方法将重组质粒转染至K562、Bel-7404细胞,用嘌呤霉素筛选得到Akt1稳定过表达的Bel-7404/Akt1、K562/Akt1细胞株,通过Western bloting分析细胞株中Akt1的表达情况。结果显示:Bel-7404/Akt1与K562/Akt1细胞中Akt1表达量明显高于野生型Bel-7404细胞与K562细胞,成功构建过表达Akt1的K562/Akt1、Bel-7404/Akt1稳转细胞株。Akt1过表达细胞株的成功构建为寻找和筛选高效、低毒、强特异性的Akt1抑制剂以及逆转细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)的研究提供了实验模型。     

人参皂苷Compound K对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

对人膀胱癌T24细胞进行体外培养,采用MTT方法观察不同浓度人参皂苷Compound K处理细胞24、48、72h后对细胞增殖的抑制作用,利用Hoechst33342对细胞进行染色,荧光显微镜观察细胞形态学变化,应用流式细胞术观察人参皂苷Compound K对T24细胞凋亡的诱导作用,并应用WesternBlotting检测不同浓度人参皂苷Compound K处理后T24细胞中caspase-3及相关蛋白的表达情况。结果显示,人参皂苷Compound K对膀胱癌T24细胞的增殖具有较强的抑制作用,呈浓度和时间依赖关系,并诱导肿瘤细胞凋亡,同时caspase-3活化型表达量增加。说明人参皂苷Compound K能够显著抑制膀胱癌T24细胞的活力,有效地诱导T24细胞凋亡。     

Dickkopfs分泌蛋白调控肿瘤细胞机制

Dickkopfs是Wnt/β-catenin信号通路的抑制因子,具有抑制肿瘤生长的作用。Dickkopfs分泌蛋白可用作临床诊断和治疗的靶点,因此,有关Dickkopfs分泌蛋白精准有效调控肿瘤细胞机制及靶向抑制剂的研究,是癌症研究中重要的研究对象之一。目前的研究对Dickkopfs蛋白家族缺乏系统性归纳,因此对Dickkopfs在肿瘤细胞中的调控机制进行分析。结果发现:DKK1、DKK2、DKK4主要通过引起蛋白酶体β-catenin降解、诱导细胞凋亡和阻止细胞增殖来抑制Wnt/β-catenin通路;DKK3是通过对β-catenin的下游信号通路因子进行负调控的详细机制。阐述了Dickkopfs分泌蛋白在临床诊断、治疗及预后的应用,并对其可能存在抑制肿瘤血管生成机制进行了展望。     

奥沙利铂对结肠癌细胞株的体外作用研究

以结肠癌细胞株HT29和SW620为系统,研究奥沙利铂对结肠癌细胞株的体外增殖抑制作用及对细胞凋亡的影响.经奥沙利铂作用的细胞,通过MTT法测定细胞存活率、光学显微镜观察细胞形态变化、AO/EB染色法和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡等情况.结果表明奥沙利铂具有抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡的活性.     

hsa-miR-125a-3p是RhoA-肌动蛋白途径的负性调节因子

为了探讨hsa-miR-125a-3p调控肺癌细胞侵袭的作用机制,分别检测了转染正义和反义hsa-miR-125a-3p的人肺癌A549细胞中Rho A mRNA和蛋白水平表达情况,结果显示,两种方式处理的细胞中Rho A mRNA均无明显变化,但Rho A蛋白浓度分别下降和增加;再用包含Rho A 3’-未翻译区(3’-UTR)荧光素酶报告基因与hsa-miR-125a-3p mimics共转染发现,当hsa-miR-125a-3p异常表达时,报告基因活性降低。进一步的实验显示,hsa-miR-125a-3p下调可诱导A549细胞侵袭;Rho抑制剂CT04阻断Rho A后,转染反义或正义hsa-miR-125a-3p的A549细胞侵袭率均无变化;转染正义的hsa-miR-125a-3p的A549细胞中活化Rho A(Rho A-GTP)、Rho A和肌动蛋白丝聚集表达均降低;相反,当转染反义的hsa-miR-125a-3p时,Rho A-GTP、Rho A和肌动蛋白丝聚集表达均增强。上述研究表明,hsa-miR-125a-3p可能通过Rho A-肌动蛋白途径影响肺癌细胞系A549的侵袭能力。     

ATP对大鼠成肌细胞抗H_2O_2凋亡模型分析

为了探讨解决L6大鼠成肌细胞被H2O2损伤的问题,分别用1.210 48、2.420 96、4.841 92 g/L ATP溶液对成肌细胞处理后,利用MTT法、流式细胞仪和荧光凋亡抗体检测了细胞损伤程度.结果表明,经H2O2损伤后L6成肌细胞存活率明显降低,凋亡率增加.各种剂量ATP溶液均能提高L6成肌细胞的存活率,促使抗凋亡因子bcl-2表达增加,促凋亡因子bax表达降低,减少凋亡的发生.其保护程度随ATP溶液剂量的减少而增强,在1.210 48 g/L剂量时效果最为显著.ATP溶液对H2O2诱导损伤的L6大鼠成肌细胞具有明显保护作用,其机制是通过mTOR/STAT3信号通路增强凋亡抑制因子bcl-2表达、抑制凋亡促进因子bax表达,从而与抑制细胞凋亡有关.     

松口蘑菌丝体蛋白质诱导细胞调亡

采用深层发酵技术培养菌丝体并提取分离出的蛋白质,进行体外抗人子宫颈癌HeLa细胞增殖及诱导细胞凋亡机理的研究。试验发现松口蘑菌丝体水提液中活性蛋白质TMP在体外具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,扫描电镜观察到TMP处理细胞产生明显的凋亡小体,TMP对细胞周期的影响是通过抑制细胞从S到G2M期的转化来抑制HeLa细胞增殖,诱导细胞发生凋亡的。DNA电泳出现以200bp左右为单位的DNA碎片。结果表明：采用液体培养方法生产的松口蘑菌丝体蛋白质,具有显著的抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导KG-1细胞凋亡的机制研究

研究蛋白酶体抑制剂MG132对人急性髓性白血病细胞株KG-1的致凋亡作用及其对细胞内信号传导因子NF-kB与凋亡蛋白PARP表达的影响.采用（CK-8法检测MG132对KG-1细胞增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色法,从形态学上观察凋亡的KG-1细胞;Western blot检测NF-kB活性及与凋亡相关的蛋白变化情况.CCK-8法检测结果表明,MG132能明显抑制KG-1细胞生长,并呈现时间依赖性和浓度依赖性;Hoechst染色和Western blot检测实验证明,MG132诱导KG-1细胞发生凋亡的同时,NF-kB活性明显降低,细胞凋亡蛋白PARP降解为P89蛋白.以上结果显示,MG132能诱导KG-1细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制NF-kB信号转导通路,下调NF-kB表达继而增加凋亡蛋白PARP剪切有关.     

携带IL-24的溶瘤腺病毒联合5-Fu对NCI-H460肺癌细胞的生长抑制效应

研究利用携带IL-24的溶瘤腺病毒(ZD55-IL-24)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)对肺癌细胞NCI-H460生长的体外抑制效应。利用RT-PCR和Western blot法分别检测了IL-24在转录和翻译水平分析,发现IL-24在经ZD55-IL-24感染的NCI-H460中能有效表达,而未感染ZD55-IL-24的NCI-H460则无表达;用结晶紫染色法定性分析了ZD55-IL-24联合5-FU对NCI-H460的生长抑制和杀伤作用,结果表明联合应用比单用时效果更显著;通过MTT法进行的定量分析也表明ZD55-IL-24与5-FU联合处理48 h后,NCI-H460的增殖抑制率显著高于单用ZD55-IL-24或5-FU(P0.05);最后,用Hoechst33258染色法观察了细胞凋亡,结果也显示联合应用ZD55-IL-24和5-FU组的细胞凋亡现象比单用的显著。本研究初步证实了ZD55-IL-24显著提高了NCI-H460对化疗药物的敏感性,联合疗法对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强。     

双基因溶瘤腺病毒联合5-FU抑制肺癌细胞增殖的研究

研究携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒(ZD55-TRAIL-IETD-Smac)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)对肺癌细胞的体外杀伤作用。通过MTT法检测细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot检测杀伤性基因表达与凋亡相关蛋白表达。结果显示ZD55-TRAIL-IETD-Smac与5-FU联合应用能有效地抑制肺癌细胞的增殖,并通过激活Caspase通路诱导肺癌细胞产生凋亡,表明,5-FU能够显著增强携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒对肺癌细胞的杀伤作用,为肺癌的临床应用提供了参考。     

基于网络药理学研究苦瓜活性成分治疗肺癌的潜在靶点及作用机制

肺癌的发病率和死亡率较高,是严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤之一.苦瓜作为药食两用的植物,其活性提取物虽已经被用于肺癌的治疗,但是其对于肺癌的作用机制并不明确.通过文献检索和PubChem构建苦瓜活性成分数据库,并预测活性成分可能的作用靶点,同时检索疾病数据库获取肺癌相关靶点,将苦瓜中活性成分的作用靶点与肺癌疾病靶点相映射得到苦瓜治疗肺癌的潜在靶点;通过网络构建和拓扑异构分析,筛选苦瓜中治疗肺癌的关键化合物和核心靶点,并对潜在靶点基因进行GO功能注释和KEGG通路分析.网络药理学分析结果显示:苦瓜可能主要通过Charantoside V、Caffeic acid、Goyaglycoside a等活性成分作用于AKT1、ALB、EGFR、SRC等靶点,这些活性成分参与了信号转导、凋亡过程的负调控、细胞增殖等生物学过程;关键基因主要富集在PI3K-AKT信号通路、HIF-1信号通路、癌症途径等多条信号通路.研究结果表明,苦瓜通过多化合物、多靶点和多通路的共同作用对肺肿瘤细胞增殖进行抑制,为肺癌新药开发提供理论依据.     

双基因溶瘤腺病毒联合5-FU抑制肺癌细胞增殖的研究

研究携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒（ZD55-TRAIL-IETD-Smac）联合化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）对肺癌细胞的体外杀伤作用。通过MTT法检测细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot检测杀伤性基因表达与凋亡相关蛋白表达。结果显示ZD55-TRAIL-IETD-Smac与5-FU联合应用能有效地抑制肺癌细胞的增殖,并通过激活Caspase通路诱导肺癌细胞产生凋亡,表明,5-FU能够显著增强携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒对肺癌细胞的杀伤作用,为肺癌的临床应用提供了参考。