以变性染色皮粉为底物的蛋白酶活力检测方法研究

以活性染料Remazol brilliant blue R(RBB)对皮粉进行染色,制备了在较宽的pH范围内稳定的热变性染色皮粉。研究了反应时间、底物和蛋白酶浓度等因素对酶催化染色皮粉水解速度的影响,建立了一种基于变性皮粉-RBB底物的蛋白酶活力检测方法。用建立的方法,对几种常用的制革蛋白酶进行酶活力测定,并与常用的基于酪素底物的福林法和LVU法进行对比,结果表明:对于大部分蛋白酶,2种底物检测结果有较大差异。     

基于低温活性染料标记皮粉底物的蛋白酶性能表征方法

建立了一种以低温活性染料标记的未变性皮粉(胶原纤维)为底物的快速测定蛋白酶活力的方法。优化了染色皮粉的制备方法,考察了底物的性质,优化了酶活力检测条件,并对几种蛋白酶的活力进行了测定。结果表明,染色后皮粉的结构未发生明显的改变,适合在较宽pH值范围进行蛋白酶活力测定,测定结果具有较好的重现性;蛋白酶不同底物作用性能有较大的差异,相对于酪蛋白和热变性染色皮粉,新建立的方法的测定结果对制革过程中酶的选用和使用条件的优化更具实际的指导意义。     

地衣芽孢杆菌弹性蛋白酶纯化和性质研究

用地衣芽孢杆菌发酵液制备弹性蛋白酶粗酶液,采用硫酸铵分级沉淀和Sephadex凝胶柱层析的方法分离纯化弹性蛋白酶,并对弹性蛋白酶的酶学性质进行研究。结果表明：弹性蛋白酶粗酶液经40%～70%饱和度的硫酸铵纯化后比活力提高到120U/mg,经凝胶柱层析纯化后比活力可达到292U/mg,纯化倍数为12.6,SDS-PAGE法证实弹性蛋白酶分子质量为29.5kD。对酶学性质的研究结果表明：弹性蛋白酶最适反应温度为55℃,最适反应pH值为7.4,以刚果红-弹性蛋白为底物,米氏常数Km为9.67mg/mL。低浓度金属离子Ca2+和K+对酶活力有促进作用,而Mg2+、Mn2+、Zn2+和Al3+对酶活力则有抑制作用。     

一种测定酱油曲中蛋白酶活力方法研究

以底物Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-pNA(琥珀酰-丙氨酰-丙氨酰-脯氨酰-亮氨酰-对硝基苯胺)在蛋白酶催化下生成显色基团对硝基苯胺为基础,结合多功能酶标仪检测显色基团对硝基苯胺(pNA)含量,建立酱油曲中蛋白酶活力的新检测方法。在单因素试验的基础上,选定底物浓度、反应pH值、反应温度3个因素的3个水平进行中心组合试验,通过响应面分析得出酶活测定最优条件。结果表明,底物浓度、反应温度对酶活有显著影响,酶活测定的最佳条件为:底物浓度2.23mmol/mL,反应温度40.6℃,反应pH值为8.7。同时与GB/T23527-2009《蛋白酶活力的测定福林法》的方法进行了比对,新建立方法与国家标准方法检测结果具有显著相关性(R2=0.903)。     

中华猕猴桃蛋白酶性质的研究及其在肉类嫩化剂制备中的应用

本文研究了中华猕猴桃蛋白酶的一些性质和它在配制肉类嫩化剂中的应用。此酶对两种不同的底物具有两种不同的最适pH,即以酪蛋白为底物时,最适pH为5.0～6.5,而以笨甲酰精氨酸乙酯(BAEE)为底物时,最适pH为7.5。在pH4.0～10.0范围内,酶能保持稳定。在65℃热处理16分钟,酶活力残存50%。将此酶配制成肉类嫩化剂处理牛肉,其蛋白萃取液中总可溶性含氮及可溶性非蛋白氮含量均比对照样品高,其脯氨酸甘氨酸含量也有明显的增加。这表明猕猴桃蛋白酶对肌肉组织中的胶原蛋白和弹性蛋白产生了一定作用。流变性质试验也表明该嫩化剂是有效的。     

微生物弹性蛋白酶催化动力学特性研究

研究了弹性蛋白酶的酶学性质与酶促反应动力学.研究表明,弹性蛋白酶的作用最适pH值与所用缓冲体系有关,在硼砂-硼酸缓冲体系中,最适pH值为7.8,而在Tris缓冲体系中,最适pH值为8.48;酶的作用最适温度为50℃,当温度高于60℃时,酶活性下降辐度较大,差异极显著.酶在pH3～7即酸性条件下,酶活较低,而在pH7～12时酶活较高,且趋于稳定.大部分金属离子对酶的活性有抑制作用,尤其是Ba+、Ca+、Al+和Cu+等金属离子可使酶的活性直线下降,而钠离子对酶的活性没有明显影响.采用Lineweaver-Burk方法,获得酶催化动力学参数Vmax=0.09512U/mL,km=0.00741m/ml,应用Michaelis-Menten方程求得弹性蛋白酶以弹性蛋白为底物的催化动力学方程为V=0.09512[S]/0.00741+[S].     

柠檬酸沉淀法提取生姜蛋白酶的工艺优化

目的对柠檬酸沉淀法提取生姜蛋白酶的工艺进行优化,并确立最佳酶反应条件。方法采用柠檬酸沉淀法提取姜汁中生姜蛋白酶,比较加入不同浓度柠檬酸反应后的酶活力值;在不同pH缓冲液、底物浓度和温度条件下测定酶比活力,并确定最佳酶反应条件。结果柠檬酸浓度为20 mmol/L时,酶活力最高,为353.153 U。最佳酶反应条件如下:反应底物浓度为1%,反应温度60℃,反应pH值为5。结论柠檬酸沉淀法操作简单、提取效率高,通过生姜蛋白酶酶促反应的条件优化,可以实现生姜蛋白酶酶活的快速测定。     

大鲵肉肌基质蛋白中胶原蛋白肽和弹性蛋白肽特性

对大鲵肉肌基质蛋白中提取的胶原蛋白肽和弹性蛋白肽特性进行研究。以大鲵肉肌基质蛋白为原料,分别采用胶原蛋白酶和弹性蛋白酶进行酶解,测定酶解产物光谱特性、氨基酸组成、分子质量、物理特性及体外抗氧化能力。结果表明：胶原蛋白肽和弹性蛋白肽提取率分别为45.11%和37.36%;紫外光谱结果表明,胶原蛋白肽和弹性蛋白肽最大吸收峰分别位于210～230、200～220 nm;红外光谱结果表明,在酰胺A、B、Ⅱ带胶原蛋白肽和弹性蛋白肽均有吸收峰,在酰胺Ⅲ带仅胶原蛋白肽有吸收峰;氨基酸含量测定结果表明,胶原蛋白肽和弹性蛋白肽含有人体7 种必需氨基酸,疏水性氨基酸含量较高,芳香族氨基酸含量较低;在分子质量13～150 kDa的Marker标记范围内,观察不到胶原蛋白肽和弹性蛋白肽的电泳条带;黏度测定表明,胶原蛋白肽和弹性蛋白肽具有一定黏性;扫描电子显微镜结果表明,胶原蛋白肽结构呈海绵状,片状较大,弹性蛋白肽结构呈大小不一的碎片状,结构松散,均有一定的抗氧化能力,且抗氧化能力与多肽质量浓度呈正相关。     

纤维素酶活力测试探讨

采用3,5-二硝基水杨酸为显色剂,分别以滤纸和CMC为底物,测定纤维素酶的FPA和CMC酶活,比较了两种底物测定酶活的方法,结果表明酶液稀释倍数与酶活力之间存在一较窄的线性范围,在此范围内酶活力测试相对较稳定;另外,从酶的应用效果看内切酶活力对之影响较大。     

纤维素酶活力测试探讨

采用3,5-二硝基水杨酸为显色剂,分别以滤纸和CMC为底物,测定纤维素酶的FPA和CMC酶活,比较了两种底物测定酶活的方法,结果表明酶液稀释倍数与酶活力之间存在一较窄的线性范围,在此范围内酶活力测试相对较稳定;另外,从酶的应用效果看内切酶活力对之影响较大.     

一株强化发酵甜瓣子的乳酸片球菌特性及应用效果评价

甜瓣子是以蚕豆制曲后加盐水发酵而成的,是郫县豆瓣风味形成的关键阶段。筛选适用于强化甜瓣子发酵的专用乳酸菌,以期应用于强化甜瓣子发酵。以甜瓣子为原料筛选生长速度快、产酸能力强的高效乳酸菌,研究其生长特性。利用筛选得到的高效乳酸菌制备菌剂并用于强化甜瓣子发酵,分析甜瓣子品质。该研究筛选得到1株乳酸片球菌ND1,37℃培养6 h、OD610达1. 375,培养24 h发酵液中乳酸含量达到1. 296 g/100 g。ND1在4～50℃条件生长良好,高温更利于其生长,在37～45℃生长速度最快;能耐受10%的盐,在盐含量(质量分数)为0%～8%的条件生长良好;在pH 3. 5～6生长速度快。利用菌株ND1发酵得到的乳酸菌剂活菌数可达1. 07×10¹²CFU/g,利用该菌剂发酵甜瓣子,可有效提高甜瓣子中有机酸(尤其是乙酸、苹果酸、乳酸)含量,强化甜瓣子风味。该研究筛选的乳酸片球菌ND1具有良好的温度、酸度、盐度适应性,能改善甜瓣子中有机酸含量,有望被用作强化甜瓣子发酵增香的乳酸菌,改善郫县豆瓣品质。     

酶法提取蛋黄油的工艺

利用酶法从鸡蛋黄粉中提取蛋黄油 ,通过正交试验选出酶解法提取蛋黄油的最佳工艺条件 :底物质量浓度为 2 0 g/dL ,先用每 10 0g底物中加入 1g蛋白酶A ,并保持其最适 pH和温度 ,反应时间为 2h ;再用每 10 0 g底物中加入 1.5 g的蛋白酶B ,并同时调节到相应的最适 pH和温度 ,反应时间为 2h ,该条件下蛋黄油得率为 5 8.89% .最后 ,对蛋黄油的主要成分进行了分析     

产黄青霉β-甘露聚糖酶的高效表达、性质及应用

将产黄青霉(Penicillium chrysogenum)来源的β-甘露聚糖酶(PcMan26A)在毕赤酵母中高效表达,经高密度发酵,发酵液酶活力达25200 U/mL.该酶属于GH26家族,与黑曲霉(Aspergillus niger) CBS 513.88来源的β-甘露聚糖酶同源性最高(67.8％),是一个新型β...     

Autofluorescence of adipose tissue measured with fibre optics

The optical absorbance and fluorescence of porcine subcutaneous adipose tissue were measured directly with fibre optics. Either mercury or xenon light sources were used to illuminate tissue samples through one branch of a bifurcated light guide. Fluorescence was detected through the other branch of the light guide. Grating, prism and continuous interference filter monochromators were installed at appropriate locations in the light path and measurements were made with a computer-operated photomultiplier whose dynamic range was optimized at each wavelength measured. There was a small absorbance peak at 420 nm. With excitation at 365 nm, the peak of the fluorescence emission spectrum was at 510 nm with a secondary plateau from 430 to 450 nm. Proline powder and purified biochemical Type III collagen were also autofluorescent with a peak emission at 510 nm. Adipose cells associated with bovine heart valves were examined by fluorescence microscopy to obtain preparations containing adipose cells plus all three histological types of connective tissue fibres on the same section. Reticular fibres (around adipose cells) together with collagen and elastin fibres (in the heart valves) were all autofluorescent. It is suggested that the major source of adipose tissue fluorescence is from the reticular fibres that surround adipose cells, with minor contributions from other sources such as collagenous septa, vascular elastin and, possibly, cytoplasmic components.     

猪骨粉酶解工艺优化

对猪骨粉进行酶解,探讨酶的种类、温度、时间、底物质量分数和pH值对酶解效果的影响。在单因素试验的基础上,对酶解温度、时间、底物质量分数和pH值4因素进行正交试验。结果表明：选用木瓜蛋白酶、酶用量10000U/g、在55℃、底物质量分数5%、pH8的条件下酶解4h,酶解效果最好。     

Monascus pigment production by solid-state fermentation with corn cob substrate

Natural pigments are an important alternative to potentially harmful synthetic dyes. We investigated the feasibility of corn cob powder as a substrate for production of pigments by Monascus purpureus KACC 42430 in solid-state fermentation. A pigment yield of 25.42 OD Units/gram of dry fermented substrate was achieved with corn cob powder and optimized process parameters, including 60% (w/w) initial moisture content, incubation at 30°C, inoculation with 4 mL of spores/gram of dry substrate, and an incubation period of 7 days. Pigment yield using corn cobs greatly exceeded those of most other agricultural waste substrates. The pigments were stable at acidic pH, high temperatures, and in salt solutions; all important considerations for industrial applications. Our results indicate the viability of corn cob substrate in combination with M. purpureus for industrial applications.     

激光宽带熔覆侧向送粉喷嘴设计

激光宽带熔覆侧向送粉喷嘴在激光宽带熔覆中起着重要的作用。文章设计了一种激光宽带熔覆侧向送粉喷嘴,介绍了喷嘴的结构特性以及工作原理,通过旋转轴杆调节挡条的移动实现粉末出口宽度可调。对喷嘴进行送粉实验,通过在喷嘴下端放置接粉槽收集粉末,计算粉末的有效利用率,实现粉末利用率在50%左右。     

PROTEOLYTIC ACTIVITY OF CRUDE ENZYME EXTRACTS OF SQUID ILLEX ARGENTINUS LIVER

The extract obtained from the acetone powder of frozen stored squid liver had optimum proteolytic activity against hemoglobin at pH 2.6 to 4.0. About 90% of the activity at pH 3.0 was inhibited by pepstatin and about 15% was inhibited by phenylmethanesulfonyl fluoride or iodoacetamide. The activity was increased by dithiothreitol and cysteine by about 55 and 40%, respectively. At pH 3 the enzyme extract had a temperature optimum of 45 to 50C; at 5C the activity was about 15% of that at 45 to 50C. At pH 7 the optimum activity was at about 45C. Heating of the extract without substrate at pH 3 and 7 caused a rapid decrease in proteolytic activity above 35 and 30C, respectively. A water extract of the liver was used to treat isolated bovine myofibrils at pH 5.5 and 0C. After 20 h a fragment of slightly lower m.w. than that of the myosin heavy chain was detected. After treatment at pH 7 and 0C, little degradation of the myofibrillar proteins was evident. At 20C the myofibrils were hydrolyzed to several products.     

一株产广谱细菌素乳酸菌菌株的分离鉴定及其细菌素特性研究

目的:从母乳婴儿粪便筛选获得产广谱细菌素的乳酸菌菌株,并对其所产细菌素的理化及生物学特性进行研究分析,预测其在食品工业中的应用前景。方法:以课题组从母乳婴儿粪便分离得到的23株乳酸菌为试材,采用牛津杯琼脂扩散法,选取单增李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）和大肠杆菌（Escherichia coli）为指示菌筛选产广谱细菌素的优良菌株。通过菌体形态观察、生理生化特征及16S r DNA序列分析对菌株进行分类学鉴定,并从耐酸、耐热、蛋白酶敏感性、抑菌谱等角度分析菌株所产细菌素生物学特性。结果:分离得到1株产广谱细菌素菌株BL-1,发现该菌株所产细菌素具有较好的热稳定性和酸耐受性,在pH为2、121℃条件下细菌素活性仍然保持稳定,酶敏感性强,胃蛋白酶可将其完全分解,使用安全性较高,且抑菌谱较广,对受试的李斯特菌（Listeria monocytogenes）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aereu）等革兰氏阳性菌和大肠杆菌阴性菌均表现出较强抑菌活性。最后该菌株经分类学鉴定为鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）。结论:从母乳婴儿粪便中分离出一株产广谱细菌素鼠李糖乳杆菌BL-1,该菌所产细菌素具有优良的食品加工特性,有作为天然食品防腐剂的巨大应用前景。      

粗壮脉纹孢菌所产纤维素酶的性质研究

本文对粗壮脉纹孢菌(Neurosporacrassa)所产纤维素酶的一般酶学性质进行研究,得出的结论如下:该酶的最适催化反应pH为4.8～5.3,最适催化反应温度为45～50℃,在50℃及pH为4.8时该酶稳定。CMC、C1和β-葡萄糖苷酶活力变化范围有一定差别。锰离子对该酶活力有一定的增强作用,而铜离子和铝离子对其活力有明显的抑制作用。在产酶培养基中加入洗衣粉可以促进产纤维素酶活力,而洗洁精则会抑制产酶活力。