Penicilium expansum PED-03固态发酵产脂肪酶及酶学性质研究

利用Penicilium expansum PED03固态发酵产脂肪酶,选用麸皮为碳源、豆粕为氮源,m(麸皮)/m(豆粕)比为1∶4,适宜含水量为50%(V/W),在24℃下发酵4d,脂肪酶活力可达1596U/g。该酶的最适温度为35℃,在50℃以下较为稳定;最适pH值为9.5,在pH6.0～10.0范围内有明显的催化活性;适宜浓度的Na+、Ca+2、Mg+2对酶反应有促进作用,而Cu2+、Fe2+和Mn2+等对酶反应有不同程度的抑制作用。利用P.expansumPED03脂肪酶在非水相中对外消旋烯丙醇酮(4羟基3甲基2(2烯丙基)2环戊烯1酮,allethrolone)进行酶法拆分,35℃反应36h时转化率(C)可达理论值的96%,产物的对映体过量值(eep)可达99%,显示了良好的应用潜力。     

海洋青霉碱性脂肪酶液态发酵和部分酶学性质研究

从海洋菌中分离筛选到1株碱性脂肪酶产生菌H-19,对该菌产脂肪酶的液态发酵条件进行了优化,优化后的培养基组成(%):葡萄糖0.5,大豆油1.0,蛋白胨1.0,(NH4)2SO40.5,NaCl 2.75,KCl 0.1,MgCl20.5,MgSO4.7H2O 0.2,CaCl20.05;发酵培养基起始pH8.0,发酵温度28℃,摇床转速180 r/min,发酵周期48 h,脂肪酶的活力可达17.43 IU/mL。酶的最适反应pH为9.4,最适温度36℃,半失活温度为60℃。     

1株耐热脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件研究

通过固体平板法,从食堂下水道污泥中筛选到1株耐热脂肪酶产生菌LJM-1,采用摇床培养法对该菌株的产酶条件进行了研究,结果表明,该菌株产脂肪酶的适宜培养基组成是:玉米粉淀粉6.0%﹑酵母粉3.5%﹑KH2PO40.3%﹑MgSO4.7H2O0.05%、(NH4)2SO40.5%﹑NaCl0.1%;适宜培养条件:培养温度40℃,初始pH7.7,摇床转速150r/min,装液量100mL/250mL三角瓶,接种量2.5%(体积分数),种龄72h,发酵时间48h。在此条件下,脂肪酶最高酶活为112.6U/mL。在单因素试验的基础上,采用正交试验对棉粕发酵脱毒条件进行了优化,得到最佳发酵条件是:初始pH7.7,培养温度40℃,接种量1.5%,发酵周期2d,酶活力达131.6U/mL。     

胰脂肪酶固定化及其水解天然黄油制备奶香底料的研究

利用吸附法将脂肪酶固定在三种阴离子树脂载体上,以大孔阴离子树脂D201为载体得到的固定化脂肪酶活性最大,且有较高的可操作性,重复使用3次,活性依然保留为原来的80%.用固定化酶催化天然黄油的水解反应,短时间内水解率可达到20%左右.用GC-Ms检测水解产物组成,检测到90多种挥发性成分.     

一株低温脂肪酶产生菌的筛选鉴定与产酶发酵初探

从无锡惠山采集的土样中筛选得到一株产低温脂肪酶的细菌,经形态和16S rDNA序列鉴定,命名为Serratia marcescens SYBC Y-R.利用合成培养基初步确定摇瓶发酵产脂肪酶的最适碳源为乳糖(质量浓度2.5 g/L),最适氮源为氯化铵(质量浓度1.5 g/L),钙离子明显地促进了该菌发酵产脂肪酶.     

产漆酶真菌筛选及其固态发酵条件的初步研究

目的筛选产漆酶真菌,优化固态发酵培养基组成,研究粗酶的酶学性质.方法平板筛选获得菌株,通过测定漆酶活性优化培养基的组成.结果获得了固态发酵条件下产漆酶活性较高的菌株.优化后培养基的组成:豆粕和木屑比例1:1,木糖0.5%,酒石酸铵2.0%,培养基含水量65%.漆酶最适温度60℃,低于50℃时漆酶较稳定,最适pH 3.5,pH 6.5～9.0之间漆酶稳定性较好.结论得到了产漆酶活性较高的菌株,培养基优化后漆酶活性提高7倍.     

圆弧青霉脂肪酶基因的克隆和表达

圆弧青霉PG37总RNA甲醛变性电泳呈现真核生物所特有的 2 8SrRNA和 18SrRNA条带 .根据PG37所产碱性脂肪酶 (LipPC)N末端氨基酸残基序列和真核生物mRNA在 3’端具有poly(A)等所提供的生物信息 ,采用RT PCR技术扩增了LipPC成熟肽和 3’非编码区的cDNA片段 ,并将该PCR产物直接克隆至pUCm T载体中 .序列分析表明 ,LipPC含有 2 5 8个氨基酸残基 ,其中保守的五肽序列为Gly His Ser Leu Gly .进一步采用ClonTech公司的SmartTM PCRcDNA文库构建试剂盒 ,扩增、克隆和测定了自转录起始点至编码区的cDNA片段 ,从而完成了LipPC完整cDNA的分析测定 .最后将编码完整脂肪酶蛋白质的cDNA克隆至 pGEX 5X 3表达载体中 ,SDS PAGE检测结果表明 ,大肠杆菌BL2 1所表达的GST LipPC融合蛋白质分子质量约为 5 3ku .     

大米黄酒糟固态发酵生产优质酵母蛋白质饲料及其应用研究

对大米黄酒糟固态发酵生产优质酵母蛋白质饲料的生产工艺进行了优化,并对产品质量进行检测和质量评定,表明该产品具有良好的应用价值和广阔的应用前景.     

毛霉蛋白酶的组分特性及对大豆蛋白水解的研究

毛霉是腐乳酿造的主要微生物之一,其分泌的蛋白酶对大豆蛋白具有较高的水解效率以及对蛋白水解物良好的脱苦效果,因此在大豆蛋白水解加工方面显示出很好的应用前景.本研究采用多种蛋白纯化的方法从毛霉胞外分离纯化出三种不同的蛋白酶组分.在探讨了各组分蛋白酶性质的基础上,考察了各种蛋白酶组分对大豆蛋白的水解效果.结果显示,纯化得到的碱性蛋白酶组分Pb1对大豆蛋白具有相对较强的水解能力,而酸性蛋白酶对大豆蛋白水解能力较差,碱性蛋白酶与酸性蛋白酶之间具有良好的协同作用.     

脂肪酶生产菌株的筛选及其发酵条件优化

为获得具有高产脂肪酶能力的菌株,以橄榄油为唯一碳源进行富集,再经过维多利亚蓝B平板初筛和两次摇瓶复筛,从自然界中筛选得到一株具有较高酶活的革兰氏阴性短杆菌G1。通过提取16S r DNA进行同源比对,确定该菌属于伯克霍尔德氏菌属。该菌经紫外和ARTP复合诱变得诱变株G1-7-4,酶活较原始菌株提高了51.87%。在单因素试验考察各因素对脂肪酶酶活的影响的基础上采用响应面法对影响酶活的重要因素进一步优化,得到最佳发酵条件:玉米油33.09 m L/L,酵母膏31.90 g/L,初始p H 6.67。该条件下酶活最高达到80.62 U/m L,为初始条件下的24.81倍。该脂肪酶的最适p H为8.0,在30~80℃范围内均具有较高酶活,最适反应温度为50℃。     

北苍术固态发酵菌株的筛选、鉴定及发酵工艺优化

为筛选出适合北苍术固体发酵的菌株,以菌落数和粗多糖得率为筛选指标,获得适合北苍术发酵的乳酸菌,以含水量、接种量和发酵时间为因素,在单因素试验基础上,利用响应面法对发酵工艺进行优化。结果表明,从保存的菌株中共筛选出3株适合北苍术发酵的乳酸菌,通过生理生化试验以及16S rDNA测序确定该3株菌分别为乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）和戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）。北苍术固态发酵的最佳条件为含水量50%、接种量5.5%、发酵时间2 d。在此条件下,北苍术粗多糖得率达到10.10%,相比未发酵组提高了37.45%。抗氧化试验表明,发酵能够显著提高北苍术粗多糖的DPPH自由基清除率和羟自由基清除率（P<0.05）。     

异甘露聚糖酶生产菌的诱变育种及固态发酵条件的优化

为了提高异甘露聚糖酶活性,对实验室保藏的一株分泌异甘露聚糖酶的枯草芽孢杆菌K-6(Bacillus subtilis K-6)进行紫外诱变育种,并优化一株正突变株的固态发酵条件。出发菌株枯草芽孢杆菌K-6的酶活力为206.0U/mL,经紫外线诱变处理后,挑选在培养基上透明水解圈较大的菌株进一步复筛,获得枯草芽孢杆菌K-6-9高产突变株,酶活力为349.3U/mL,高于出发菌株69.6%。连续5代发酵,K-6-9的酶活力范围为343.0～350.3U/mL,表明该突变菌株产酶性能稳定。以K-6-9为菌种,采用单因素试验和正交试验进行最佳固态发酵产酶条件的优化,结果表明：该突变株的固态发酵适宜发酵条件为：发酵时间72h、接种量3%、初始pH 7.5、装料量25g/250mL;培养基组成为：酵母细胞壁添加量8%、料液比1:1.2、麸皮添加量40%,此优化条件下固态发酵K-6-9菌株产酶酶活力最高达601.6U/mL。     

圆弧青霉BD26碱性脂肪酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),以圆弧青霉BD26总RNA为模板,扩增出774 bp cDNA片段,将该基因片段克隆到表达载体pET-28a(+)上并转化Escherichia coil BL21(DE3),得到重组菌株BL21/ Lip PD。经IPTG诱导,菌体在固体琼脂显色平板上形成明显透明圈。SDS-PAGE电泳显示该脂肪酶分子质量约为27 ku。表达条件优化结果表明,当工程菌培养至OD_(600)为0.5时,加入IPTG至终浓度为1.0 mmol/L,在32℃诱导培养1 h,比酶活达29.30 U/mg。     

红曲霉白色突变株固态发酵生产酸性蛋白酶的研究

红曲霉白色突变株因不产色素可扩大红曲霉的使用范围,对经紫外诱变后的红曲霉白色突变株(W1)进行固体发酵并对其所产生的酸性蛋白酶的性质进行初步研究.研究表明此酸性蛋白酶最适反应温度为50 ℃,在30～40 ℃下相对稳定;最适反应pH为3.0,在pH 3.0～5.0之间相对稳定;Mn2 、Ag 、K 对酸性蛋白酶有激活作用,Fe3 、Al3 、Mg2 、Cu2 对酸性蛋白酶有一定抑制作用.通过Sephadex-G75凝胶过滤层析及SDS-PAGE蛋白质电泳分析此蛋白酶的相对分子量范围大约在55000～60000之间.     

Study of the Extraction,Concentration, and Partial Characterization of Lipases Obtained from <Emphasis Type="Italic">Penicillium verrucosum</Emphasis> using Solid-State Fermentation of Soybean Bran

Microbial lipases constitute an important group of enzymes with high biotechnological potential, but their application is limited due to production costs. The present study aimed to evaluate the extraction conditions, concentration with ammonium sulfate, and the partial characterization of the enzyme extracts (in terms of the optimum temperature and pH and their stability at low temperatures). It was shown that the optimal extraction conditions were established at 37 °C and pH of 7.0 and that the best conditions for precipitation with ammonium sulfate were with 60% saturation for 5 h. In the partial characterization of the concentrated extract, the optima conditions were obtained at 42 °C and pH of 8.5. In a study carried out with the concentrated enzymatic extract, the hydrolytic activity was shown to be practically the same as the initial value after 91 days of storage at both 4 and −10 °C.     

木瓜脂肪酶规模化制备及其酶解奶油的风味分析

木瓜乳中含有丰富的酶类,其中木瓜脂肪酶（Carica papaya lipase,CPL）作为天然固定化酶备受关注。目前尚无规模化制备CPL的工艺报道,限制了其在工业上的应用。本文通过板框过滤分离木瓜乳中的木瓜蛋白酶和木瓜脂肪酶,然后通过喷雾干燥规模化制备CPL,并优化了喷雾干燥的物料入口温度。在最优的入口温度135 ℃条件下,CPL的得率为4.12%,脂肪酶回收率为88.53%,比酶活为167.60 U/g。研究考察了CPL的酶学性质。结果表明,CPL水解甘油三酯的最适反应pH为9.0,最适反应温度为45 ℃。基于CPL对甘油三酯的水解特性将其作为催化剂酶解奶油制备奶味香基。感官分析结果表明制备的酶解奶油酸味和奶酪味突出,风味独特。固相微萃取-气相色谱质谱联用分析得到其酸含量为总挥发物质的73.28%。该酶制剂制备方法可以大规模高效的制备CPL,获得的CPL可以作为制备奶味香基的生物催化剂。     

产黄青霉抗真菌几丁质酶的纯化及特性分析

为实现抗真菌性能的耐热新型几丁质酶在食品防腐及生物防治方面的应用,从产黄青霉Xch23中分离纯化几丁质酶(Chi-Pc76)并研究其应用特性.通过硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose A52离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析纯化得到均一的Chi-Pc76.最终得到Chi-Pc76纯化倍数17.1...     

酶解和发酵对交联淀粉应用性质的影响

对交联淀粉采用酶解和发酵处理，研究酶解和发酵后交联淀粉的应用性质，结果表明：交联淀粉酶解后其溶胀度和抗剪切性随DE值增加而增加，糊化温度降低；随酶解程度的增大，交联淀粉的粘度下降，粘度稳定性逐渐提高。发酵后交联淀粉的粘度减小；抗剪切性逐渐减弱。     

发酵芝麻粕小肽体内抗氧化和免疫活性

研究从发酵芝麻粕中提取分离出的小肽体内抗氧化和免疫活性。将56 只4 周龄健康昆明小鼠随机分成7 组,分别灌胃生理盐水,低、中、高3 个剂量的小肽（三肽和四肽）,连续灌胃28 d后取血,测定肝脏、脾脏、胸腺系数,血清中丙二醛含量,肝匀浆中的丙二醛含量、超氧化物歧化酶与谷胱甘肽过氧化物酶的活性,脾脏中T淋巴细胞CD3＋、CD4＋和CD8＋数量。灌胃发酵芝麻粕三肽和四肽后,血清和肝脏中丙二醛含量显著下降（P＜0.05）,肝脏中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著升高（P＜0.05）,四肽高剂量组小鼠的CD4＋/CD8＋值显著升高（P＜0.05）。结果表明发酵芝麻粕三肽和四肽均具有体内抗氧化能力,四肽在本实验设定中的高剂量条件下能在一定程度上增强机体的免疫活性。     

Lipase Activities During Malting and Fermentation of Sorghum for Burukutu Production

Local red and white, and SK₅₉₁₂ varieties of sorghum grains were malted, and assayed for amylase, diastatic and lipase activities. The 5‐day malts from the red and white varieties were fermented for 48 h to produce burukutu, during which, lipase activities were monitored. Malt values peaked on day 5, and the red malts had the highest diastatic activities while the white variety had the lowest. Lipase activity in the malts peaked on day 4 with the red having the highest activity. The pH of the fermenting gruels decreased from 5.33 and 5.35 and levelled off at 3.88 and 3.85 for the red and white malts respectively. During fermentation, lipase activity peaks were detected at 0 h, 21 h and 45 h for the red malt with the highest peak at 45 h. The peak fermentation times for lipase activity in the white malt was at 0 h, 21 h and 48 h with the highest peak at 48 h. Lipase activity within the first 39 h was higher in the white gruel. Sorghum malt lipase from the red and white varieties may consist of three isoforms, two of which may have activity optima in the acidic pH range.