三种阿尔茨海默症治疗药物促体外培养小鼠皮层神经元活性的比较

目的:观察并比较3 种阿尔茨海默症治疗药物盐酸美金刚胺、美曲磷酯及白藜芦醇对体外培养小鼠皮层神经元活性的影响, 为寻找作用机理更优的先导化合物提供理论依据。方法:采用体外培养皮层神经元细胞的方法, 解剖分离15 d 胚胎小鼠皮层神经细胞, 接种于96 孔板, 48 h 后加药并培养72 h, 相差显微镜及免疫组织细胞化学方法进行形态学观察, 并以MTT 法观察3 种药物对小鼠皮层神经元活性的影响。结果:盐酸美金刚胺显著促进小鼠皮层神经元活性, 并呈现出一定的量效关系;美曲磷酯10 pmol·L^-1, 0.1, 1, 10 nmol·L^-1 剂量组对皮层神经元细胞活性没有影响, 而美曲磷酯0.1,1 μmol·L^-1剂量组显著抑制皮层神经元细胞活性;0.1 nmol·L^-1白藜芦醇显著促进皮层神经元细胞活性, 而白藜芦醇0.1, 1, 10 μmol·L^-1剂量组显著抑制皮层神经元细胞活性。结论:盐酸美金刚胺促小鼠皮层神经元活性较高, 故以其为先导化合物设计药效更高的阿尔茨海默症治疗药物的方案是可行的。     

不同浓度丹参酮对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的: 探讨不同浓度丹参酮对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制。方法: 建立大鼠脑片缺氧缺糖损伤模型, 设立对照组、缺氧缺糖损伤组、丹参酮20 mg·L^-1组和丹参酮200 mg·L^-1组。利用2, 3, 5-三苯基氯化四氮唑(TTC) 染色定量比色、乳酸脱氢酶(LDH) 、免疫组化、电镜评价不同浓度丹参酮对脑损伤的保护作用。同时激光共聚焦显微镜测定脑片胞内钙变化。结果: 不同浓度丹参酮(20 、200 mg·L^-1) 抑制脑片OGD 损伤所致的TTC 染色降低, 减少LDH 释放, 减轻神经元凋亡, 改善神经元超微结构的病理损伤。OGD 损伤增加bax 和bcl-2 蛋白表达和胞内钙离子浓度。不同浓度丹参酮(20 、200 mg·L^-1) 进一步上调bcl-2 蛋白表达, 降低bax 蛋白表达, 同时抑制胞内钙离子浓度。与丹参酮20mg·L^-1相比, 丹参酮200 mg·L^-1作用较强。结论: 不同浓度丹参酮具有脑保护作用, 能够抑制缺氧缺糖损伤导致的大鼠脑片神经元损伤及其凋亡过程, 且丹参酮对于胞内钙离子的调控可能是其发挥保护作用的重要机制之一。     

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂 BPI-2009的抗肿瘤作用及其机制的研究

目的: 探讨一种口服的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR) 酪氨酸激酶抑制剂(BPI-2009) 的抗肿瘤作用及其机制。方法: Western blot 方法检测 BPI-2009 对 酪氨酸激酶和EGFR自动磷酸化的抑制作用, MTT 法检测 BPI-2009对多种肿瘤细胞的生长抑制作用, 使用A431 肿瘤模型的荷瘤裸鼠进行体内的肿瘤抑制试验。结果: 通过对 EGFR激酶抑制剂化学文库的筛选, 发现 BPI-2009是一个有效的 EGFR 激酶抑制剂。BPI-2009 对EGFR 激酶的半数抑制浓度(IC₅₀) 为 5 nmol°L^-1, 当其浓度达到 62.5 nmol°L^-1 的时候可以完全抑制EGFR激酶的活性, 但在 100 nmol°L^-1 时对 Abl 、Abl相关基因(Abl-related genes, Arg) 以及 c-Src 酪氨酸激酶都没有明显的抑 制作用。 BPI-2009 可以 阻断EGFR介导的细胞内蛋白酪氨酸的磷酸化, IC 50 为45 nmol°L^-1。在肿瘤细胞生长抑制试验中, BPI-2009 对于肿瘤细胞的生长抑制作用与 EGFR在细胞中的表达密切相关。人类肿瘤细胞 A431 移植瘤抑制试验的研究表明 BPI-2009 经口给药每天 1 次在100 mg°kg^-1, 肿瘤抑制率达 64%, 有明显的剂量效应关系, 并没有发现明显的病态和体重下降。结论: BPI-2009 是一种有效的高选择性的以 EGFR 酪氨酸激酶为靶点的抗肿瘤药物。     

阿米替林对谷氨酸损伤中枢神经细胞的保护作用

目的: 研究阿米替林(Ami) 对谷氨酸损伤培养大鼠皮层神经细胞的保护作用。 方法: 分离培养15~ 18 d 胎龄的大鼠神经细胞, 加入谷氨酸(Glu), 造成神经细胞的损伤, 测定乳酸脱氢酶、一氧化氮、 丙二醛及超氧化物歧化酶的含量。观察谷氨酸对神经细胞的损伤作用及阿米替林的保护作用。 结果: 加入谷氨酸后, 神经细胞出现明显损伤性变化, 死亡率升高, 培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、 一氧化氮(NO) 含量增加, 细胞匀浆中丙二醛(MDA) 生成增加, 超氧化物歧化酶(SOD) 含量明显减少。Ami 10^-8~10^-6 mol·L^-1 能不同程度地减轻上述损伤性变化。结论: Ami 对谷氨酸所致的神经细胞损伤具有保护作用, 其作用机制可能与抗脂质过氧化作用有关。     

κ-阿片受体与β1-肾上腺素受体交互作用抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大

目的: 观察选择性 kappa 阿片受体(kappa opi-oid receptor,κ-OR)与 β 肾上腺素受体(β adrenergicreceptor, β-AR)在心肌细胞肥大方面的交互作用。方法: 以 体 外 培 养 的 乳 鼠 心 肌 细 胞 为 模 型, 10 μmol°L^-1 的异丙肾上腺素(β肾上腺素受体激动剂,β-AR)诱导心肌肥大, 观察 1μmol°L^-1的 U50,488H(κ-OR激动剂,U50)对其作用。进一步探索在100 nmol°L^-1ICI118, 551(β₂ -AR 阻断剂)存在情况下,κ-OR的激活对心肌肥大的作用。用 Lowry's 法测心肌细胞的蛋白质含量;用消化分离法,并利用计算机图象分析系统测心肌 细胞的体积;用[³H]leucine 掺入法测定心肌细胞蛋白的合成。结果: 异丙肾上腺素使心肌细胞总蛋白含量、体积、蛋白合成明显增加;1 μmol°L^-1 的 U50, 488H 使 ISO 诱导的心肌细胞总蛋白含量、体积、蛋白合成减少, 这种作用可被选择性 κ-OR阻断剂-nor-BNI(norbinaltorphimine)抑制。在 ICI118, 551 存在的情况下, U50 也能起到减弱 ISO 诱导心肌细胞肥大的作用。结论: U50,488H 通过激活 κ-OR 与β₁ -AR 交互作用抑制 ISO 所诱导的心肌细胞肥大。     

灵芝多糖肽对小鼠巨噬细胞自由基的清除作用

目的: 研究灵芝多糖肽对小鼠腹腔巨噬细胞自由基的清除作用。方法: 用四氧嘧啶、叔丁基氢过氧化物(tBOOH) 为氧化剂, 分别在小鼠体内、体外损伤小鼠腹腔巨噬细胞, 以DCHF-DA 为荧光指示剂,用共聚焦显微镜观察巨噬细胞的荧光变化, 并用共聚焦显微镜作时间系列扫描, 观察巨噬细胞荧光的动态变化。结果: 四氧嘧啶(75 mg·kg^-1, iv) 、叔丁基氢过氧化物(7.76 ×10^-5 mol·L^-1) 可造成巨噬细胞的氧化损伤, 使荧光密度增加, 灵芝多糖肽可减轻其损伤, 使荧光密度减少。时间系列扫描显示:随时间改变, 灵芝多糖肽可减少静息状态下小鼠腹腔巨噬细胞荧光密度, 也可减少由PMA(50 nmol·L^-1) 诱导的呼吸爆发状态下小鼠腹腔巨噬细胞荧光密度。结论: 灵芝多糖肽具有抗氧化作用, 对小鼠腹腔巨噬细胞自由基有清除作用。     

黄芪总提物对肝癌细胞生长、甲胎蛋白分泌及γ-GT 活性的影响1

目的 研究黄芪总提物(TEA) 对肝癌细胞生长、甲胎蛋白(AFP) 分泌及γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)活性的影响。方法 以两种人肝癌细胞株HepG2 细胞和Bel-7404 细胞分别与TEA(5 ~ 160 mg · L^-1)共培养6 d, 利用MTT 比色、ELISA 及细胞分化检测等方法。结果 TEA(5 ~ 160 mg ·L^-1)可抑制两种人肝癌细胞增殖, 并且明显降低HepG2 细胞高水平分泌AFP 。T EA(20、40 和80 mg ·L^-1)可抑制肝癌HepG2 细胞的γ-GT 活性, 升高白蛋白(ALB) 含量。TEA(40 和80 mg · L^-1)亦可抑制肝癌Bel-7404 细胞的γ-GT 活性, 并升高ALB 含量。结论 TEA 具有抑制肝癌生长、AFP分泌及γ-GT 活性的作用。     

阿魏酸乙酯对过氧化氢损伤人血管内皮细胞的保护作用

目的: 观察阿魏酸乙酯对人血管内皮细胞的保护作用。方法: 实验分对照组、模型组、阿魏酸4个剂量组、阿魏酸乙酯4个剂量组。过氧化氢诱导血管内皮细胞损伤,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞存活数量,用比色法测细胞培养液中过氧化物丙二醛含量及乳酸脱氢酶的活性。结果: 阿魏酸乙酯及阿魏酸不同剂量(2,4,8,16 nmol·L^-1 )对过氧化氢损伤的人血管内皮细胞具有保护作用,可抑制过氧化氢损伤的血管内皮细胞释放乳酸脱氢酶和丙二醛。相同剂量组的阿魏酸乙酯的作用强于阿魏酸。结论: 阿魏酸乙酯具有减轻过氧化氢损伤,保护血管内皮细胞的作用,并且其作用强于阿魏酸。     

9-(4-乙氧羰基苯氧基)-6, 7-二甲氧基-1, 2, 3, 4-四氢吖啶盐酸盐对PC12细胞缺氧缺血损伤的保护作用

目的 研究9-(4-乙氧羰基苯氧基)-6, 7-二甲氧基-1, 2, 3, 4-四氢吖啶盐酸盐(EDT) 对神经细胞缺血缺氧损伤的影响。方法 离体培养的PC12 细胞, 用连二亚硫酸钠造成缺氧/复氧损伤模型, 用NaCN 加缺糖造成拟缺血损伤模型, 通过MT T 微量比色、培养介质LDH 活力测定研究EDT 对两模型的保护作用。结果 在10^-8～10^-6 mol·L^-1范围内, EDT 浓度依赖地降低两种损伤所致培养介质内LDH 的释放, 增加MTT 比色值, 同时10^-6 mol·L^-1 EDT 对两模型的保护作用具有时间依赖性, 48 h 达效应平台。结论 EDT 对PC12 细胞缺血缺氧损伤具有保护作用。     

盐酸埃他卡林对缺氧诱导神经细胞凋亡的影响

目的: 探讨盐酸埃他卡林(Ipt) 对缺氧诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡的影响。方法: 用电镜和流式细胞分析技术, 检测原代培养的大鼠皮质神经细胞凋亡;应用免疫组化法, 观察凋亡相关蛋白Bcl-2 、Bax 表达的改变。结果: Ipt 10 μmol·L^-1可减轻缺氧诱导的细胞染色质浓缩现象, 逆转缺氧诱导的Bcl-2表达的下调, 对Bax 表达无显著影响;Ipt (0.1~10 μmol·L^-1) 能剂量依赖性地降低凋亡细胞百分率, 以10 μmol·L^-1 浓度组效果最好, 其作用可被ATP 敏感性钾通道特异性阻断剂格列本脲(Gli) 所拮抗。结论: Ipt 对缺氧诱导的神经细胞凋亡有明显的抑制作用, 其作用机制与ATP 敏感性钾通道、Bcl-2 表达相关。     

米帕明对大鼠皮层神经细胞缺血性损伤的保护作用

目的: 研究米帕明(Imi) 对培养大鼠神经细胞缺血和谷氨酸(Glu) 损伤的保护作用。方法: :分离培养 15～ 18 d 胎龄的大鼠神经细胞, 用连二亚硫酸钠消除培养基中的氧, 合并培养基缺糖模拟细胞缺血性损伤;加入Glu 模拟兴奋毒性损伤, 测定乳酸脱氢酶、一氧化氮、丙二醛和超氧化物歧化酶的含量变化, 观察缺血和Glu 对神经细胞的损伤及 Imi 的保护作用。结果: :缺血及 Glu 引起神经细胞明显损伤性变化, 死亡率升高, 培养上清液中乳酸脱氢酶、一氧化氮含量升高, 细胞匀浆中丙二醛生成增加, 超氧化物歧化酶含量明显减少。Imi 10^-8 ～ 10^-6 mol·L^-1能不同程度地减轻上述损伤性变化。结论: :Imi 对神经细胞缺血性损伤有保护作用, 机制可能与抗脂质过氧化及钙拮抗作用有关。     

Ca2+/CaM-CaN 途径参与神经肽Y 诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的: 探讨Ca²⁺ CaM 依赖的钙调神经磷酸酶(CaN) 途径在神经肽Y(NPY) 诱导心肌细胞肥大中的作用。方法: 用NPY (10、100 nmol·L^-1) 刺激WISTAR 乳鼠心肌细胞, 并用CaN 特异性抑制剂环胞霉素A 加以干预。应用3H-Leu 掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率, 用免疫印迹(Western-blot) 和组织化学法分别测定心肌细胞内CaN-α蛋白表达和CaN 酶的活性。结果: 较高浓度NPY(100 nmol·L^-1) 可明显增加心肌细胞3H-Leu 掺入量(P < 0.05), 加入CsA 可阻断上述效应;NPY(100 nmol·L^-1) 还可明显增加心肌细胞内CaN 酶比活性(P <0.05), 并刺激心肌细胞CaN-α蛋白表达(P <0.05) 。结论: NPY 可活化大鼠心肌细胞Ca²⁺CaM-CaN 途径, 而CaN 特异性抑制剂环胞霉素A 可抑制NPY 诱导的心肌肥大, 说明Ca²⁺ CaM 依赖的钙调神经磷酸酶(CaN) 途径参与神经肽Y 诱导的心肌细胞肥大效应。     

吡格列酮对培养的心肌细胞肥大的抑制作用

目的: 利用体外培养的乳鼠心肌细胞, 观察吡格列酮对高浓度葡萄糖与去甲肾上腺素共同诱导的肥大心肌细胞的影响, 进一步推测吡格列酮对糖尿病性心肌肥大的可能作用及作用机制。方法: 以培养的乳鼠心肌细胞为模型分组给药后, 用显微镜目镜计数心肌细胞搏动的频率;用Lowry' s 法测心肌细胞的蛋白质含量;用[³H] leucine 标记法测定心肌细胞蛋白的合成;利用计算机图象分析系统测心肌细胞的体积。结果: 吡格列酮在1 ～ 10 μmol·L^-1 浓度对25. 5 mmol·L^-1高糖与1 μmol·L^-1去甲肾上腺素联合诱导的肥大心肌细胞的蛋白含量、蛋白合成及体积均有显著的抑制作用。其抑制肥大的效果比1 μmol·L^-1 维拉帕米更为显著;同时观察到10 μmol·L^-1吡格列酮同1 μmol·L^-1维拉帕米一样有抑制心肌细胞搏动的作用。结论: 吡格列酮能有效抑制高糖与去甲肾上腺素联合诱导的心肌细胞肥大。这种作用可能是通过作用于PPARγ来实现的。     

不同剂量甘丙肽拮抗剂在三叉神经主核对甘丙肽外向电流的双向作用

目的 在三叉神经主核(PrV) 上检测不同剂量甘丙肽拮抗剂M35 和M40 对甘丙肽外向电流的作用。方法 全细胞膜片钳记录技术。结果 0.01、0.03及0.1 μmol·L^-1 的M35, 使甘丙肽引发的外向电流分别抑制53.1%、40.4% 及27.2%; 但1、3 μmol·L^-1 M35 使甘丙肽外向电流分别增大16.2%及38.4%。而给予0.01 及0.03 μmol·L^-1M40 时, 甘丙肽外向电流增大93.7%及68.4%;0.3、1 及3 μmol·L^-1 M40 使甘丙肽外向电流分别抑制49.2%、69.9%及87.2%。结论 低浓度M35为甘丙肽拮抗剂, 高浓度M35 有甘丙肽激动剂作用;低浓度M40 为甘丙肽激动剂, 高浓度M40 为甘丙肽拮抗剂, PrV 同一神经元上可能存在不同甘丙肽亚型受体。     

HPLC-MS法测定Beagle犬血浆中氧化苦参碱及其药代动力学

目的: 建立Beagle犬血浆中氧化苦参碱的LC-MS测定法,测定它的绝对生物利用度。方法: Beagle犬6只,随机分为2组,采用单剂量双周期自身交叉设计,分别给犬单剂量静脉注射或灌胃氧化苦参碱,用LC-MS法测定给药后的血浆中药物浓度。结果: 氧化苦参碱在2～5000μg·L^-1的范围内呈良好的线性关系(r=0.9990),最低检出限达0.6μg·L^-1,日内和日间误差均小于4.2 %,方法回收率大于96.7 %;氧化苦参碱的药-时数据符合二室模型,C_max为2.42±0.97μg·L^-1,T_max为1.0±0.3 h,T_1/2β为5.54±1.58h,AUC_0→∝为6.12±1.08μg·L^-1·h^-1,绝对生物利用度为(19.4±9.01)%。结论: 该法灵敏、简单,专属性强;氧化苦参碱在Beagle犬体内绝对生物利用度较低。     

血液灌流抢救超大剂量地高辛中毒

目的: 观察1例血液灌流抢救超大剂量( 50mg)地高辛中毒的效果。方法: 使用HA 330 ml 灌流器和YT-160 灌流器, 血管通路为股静脉单针双腔导管。入院后共进行了4 次血液灌流( HP) 治疗。结果: 第1 次HP 前后检测地高辛血药浓度均16 μg·L^-1。第2 次HP 血药浓度9. 22 μg·L^-1。第3 次HP 前血药浓度12. 4 μg·L^-1, HP 后为10. 45 μg·L^-1。第4 次HP 前3. 22 μg·L^-1, HP 后为2. 84 μg·L^-1。结论: 采用间隔一定的时间HP, 多次进行, 可阶梯式降低药物浓度。     

蝎毒组分Ⅲ对人头颈部鳞状细胞癌细胞生长的影响

目的 观察蝎毒组分Ⅲ(SVC-Ⅲ)对人头颈部鳞状细胞癌细胞株(AGZY-973)生长的影响,试图找出SVC Ⅲ抑制鳞状细胞癌的最佳浓度。方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测经不同浓度SVC-Ⅲ 作用下AGZY-973 生长抑制率。结果 SVC Ⅲ能抑制该细胞的生长,SVC-Ⅲ可导致AGZY-973 细胞代谢MTT 的能力显著低于对照组,生长抑制率达68.96%(P <0.01)。当SVC Ⅲ的浓度<40 mg·L^-1时,剂量效应关系明显;而SVC-Ⅲ的浓度>40 mg·L^-1时无剂量效应关系。5-Fu 治疗组生长抑制率达55.27% P <0.01)。结论 SVC-Ⅲ是存在于东亚钳蝎蝎毒中的一种抗肿瘤成分,能够抑制AGZY-973 的生长,并在一定浓度范围内存在剂量效应关系。