车前子对晶状体上皮细胞氧化损伤防护作用的信号转导机制

目的:研究车前子对过氧化氢(H₂O₂)所致氧化损伤的晶状体上皮细胞(LEC)内钙(Ca²⁺)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,探讨归肝经明目中药防治白内障的细胞信号转导机制。方法:将H₂O₂与传代培养的牛LEC共同孵育复制氧化损伤模型,同时加入车前子水提取液孵育后,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测LEC活性,用荧光分光光度法检测LEC内钙离子的浓度([Ca²⁺]_i)、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量,并探讨不同浓度的车前子及孵育12、24、36h的影响。结果:H₂O₂组LEC活性下降,车前子可明显增强氧化损伤的LEC活性(P<0.01),呈浓度依赖关系和时间依赖关系。H₂O₂组LEC的[Ca²⁺]_i升高,车前子可显著降低由氧化损伤所致的LEC的[Ca²⁺]_i的升高(P<0.01),呈时间-效应关系。H₂O₂组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降,车前子可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低(P<0.01)、cGMP水平显著升高(P<0.01),也呈时间-效应关系。结论:车前子可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡,[Ca²⁺]_i、cAMP和cGMP信号系统及其相互作用调节生物学效应可能是其细胞和分子生物学的主要作用机制。     

神经生长因子对新生大鼠脑细胞内游离钙浓度的影响

目的 观察神经生长因子(NGF)对分离的新生大鼠脑细胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i)的影响。方法 以 Fura-2/AM 为细胞内钙离子的荧光指示剂, 测定谷氨酸(Glu)及过氧化氢(H₂O₂)诱导的新生大鼠脑细胞内[Ca²⁺]_i, 观察 NGF 对此影响。 结果 新生大鼠脑细胞内静息 [Ca²⁺]_i 208±22nmol/L, NGF对神经细胞静息 [Ca²⁺] i 无明显影响, NGF 1～ 100μg/L 能剂量依赖地抑制 Glu 和 H₂O₂ 引起的 [Ca²⁺]_i 升高, 其 IC₅₀ 分别为 42.5 和 27.3 μg/L。结论 NGF 通过降低 [Ca²⁺]_i 的水平来保护大脑皮质神经元抗谷氨酸毒性及过氧化氢损伤。     

马齿苋总黄酮对血小板源性生长因子致家兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的: 研究马齿苋总黄酮(Portulaca total flavone,PTF)对血小板源性生长因子-BB型(PDGF-BB)致血管平滑肌细胞(Vascular smoothmuscle cell,VSMC)增殖的影响并探讨其机制。方法: 采用组织贴壁法培养家兔胸主动脉血管平滑肌细胞,细胞计数法观察PTF(8、24、72 mg/L)对PDGF-BB所致的VSMC增殖作用的影响;氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入方法测定VSMC DNA的合成;流式细胞仪分析增殖细胞周期,荧光分光光度计测定VSMC内 [Ca²⁺]_i。结果: PTF以浓度依赖方式抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖、DNA合成,血管平滑肌细胞处于G₁/G₀ 期的细胞数增多,而G₂/S期的细胞数显著减少(P<0.01);能抑制高K⁺诱导的VSMC内[Ca²⁺]_i升高(P<0.01)。结论: PTF可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖,其作用机制可能与其降低VSMC内高钙浓度[Ca²⁺]_i有关。     

大豆异黄酮活性组分对 H2O2 诱导的 PC12 细胞损伤的影响

目的: 探讨大豆异黄酮活性组分对 H₂O₂ 诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法: 以 H₂O₂ 损伤PC12细胞为氧化应激损伤的模型, 采用光学显微镜观察细胞形态, MTT 法判断细胞的存活率, LDH 法检测细胞的损伤程度。结果: 不同浓度大豆异黄酮能明显改善 H₂O₂ 导致的细胞甲瓒减少, 大豆异黄酮处理组细胞存活率明显高于 H₂O₂ 处理组(P<0.01);而 LDH 漏出率则明显低于H₂O₂ 处理组(P<0.05)。结论: 大豆异黄酮活性组分对 H₂O₂ 诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

盐酸埃他卡林对H2O2所致PC12细胞损伤的保护

目的: 研究 K_ATP 通道开放剂盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride, Ipt) 对 H₂O₂ 所致 PC12 细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法: 采用培养的PC12细胞, MTT 法测定细胞存活率, HPLC 法测定细胞培养液中谷氨酸(Glu) 的含量, 荧光法测定胞内钙离子([Ca²⁺]_i) 浓度。结果: Ipt 可浓度依赖性的拮抗H₂O₂ 介导的细胞毒性, 提高细胞生存率, 降低胞外Glu的释放以及胞内 Ca²⁺ 浓度。该保护作用可被200 μmol°L^-1 5-HD(线粒体K ATP 通道阻断剂) 部分拮抗。结论: Ipt 可拮抗 H₂O₂ 介导的细胞损伤作用, 该保护作用可能与线粒体ATP 敏感性钾通道相关。     

葡萄糖酸镁对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的: 观察葡萄糖酸镁对心肌缺血再灌注损伤的影响, 探讨葡萄糖酸镁心肌保护作用及其机理。方法: 采用改进了的整体大鼠急性心肌缺血再灌注损伤模型, 检测组织内 Na⁺-K⁺ -ATPase 活力及丙二醛(MDA) 和 Ca²⁺ 含量, 并测定由ADP 诱导的血小板5 min 最大聚集率 AGG(M)。结果: 与假手术组相比, 缺血再灌注组心肌组织内 Na⁺ -K⁺ -ATPase 活力显著下降(P<0.01), MDA 和Ca²⁺ 含量明显升高(P<0.01), AGG(M) 升高(P<0.05)。与缺血再灌注组比较, 葡萄糖酸镁 3 个不同剂量保护组心肌组织内Na⁺ -K⁺-ATPase 活力明显升高(P<0.01), MDA和Ca²⁺ 含量明显降低(P<0.05 或 P <0.01), AGG(M) 也明显降低(P<0.01), 且各作用均随用药剂量的增加而更加显著。结论: 葡萄糖酸镁对心肌缺血再灌注损伤有保护作用, 其保护作用机制与增加Na⁺ -K⁺-ATPase 活性 、减轻钙超载和抑制脂质过氧化反应以及血小板聚集有关。     

川芎嗪对心肌细胞核钙转运功能异常的保护

目的: 观察异丙肾上腺素(ISO) 致大鼠心肌缺血损伤时心肌细胞核钙转运功能的变化及川芎嗪对其影响。 方法: Wistar 大鼠皮下注射 5 mg·kg^-1 ISO 液, 造成心肌缺血损伤模型。超速离心分离纯化心肌细胞核。 酶学方法鉴定核纯度和测定核膜Ca²⁺-ATP 酶活性, 同位素法观测核钙的摄取。 结果: 与正常对照组比较, 心肌缺血组(实验组) 心肌细胞核膜 Ca²⁺ 依赖性ATP 酶活性降低 18.1%(P<0.05), ⁴⁵Ca²⁺ 摄取效率也显著降低, 其最大反应速度(V_max ) 降低 54.6%, 细胞核 Ca²⁺ 依赖性ATP 酶的最大反应速度(V_max ) 降低 33.0%(P<0.05), 平衡常数(K_m ) 降低 42.8%(P<0.01);川芎嗪保护组心肌细胞核 Ca²⁺-ATP 酶活性及核 ⁴⁵Ca²⁺ 摄取与正常对照组比较均未见显著性改变。结论: 川芎嗪对 ISO致大鼠心肌缺血损伤时心肌细胞核钙转运功能降低有保护作用。     

4 种归肝经明目中药对晶状体上皮细胞凋亡相关基因Bcl-2 和Bax 的调控

目的:探讨4 种归肝经明目中药车前子、青葙子、菊花和熟地对实验性氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelial cell, LEC)凋亡相关基因Bcl-2和Bax 的调控。方法:将SD 大鼠双眼随机分成7组:空白对照组、过氧化氢(H₂O₂)组、吡诺克辛(PS)组、车前子组、青葙子组、菊花组和熟地组。无菌操作摘除眼球并在手术显微镜下分离晶状体, 使晶状体孵育在300 μmol·L^-1 H₂O₂ 培养液中复制LEC 凋亡模型, 同时采用4 种归肝经明目中药干预, 置二氧化碳培养箱共同孵育24 h 。取晶状体前囊膜采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2 和Bax 的蛋白表达并进行比较。结果:正常SD 大鼠LEC 中Bcl-2 和Bax 均有表达, Bcl-2 表达较Bax 表达强;H₂O₂组Bcl-2 表达显著下调, Bax 表达显著上调(P <0.01),Bcl-2/Bax 比率下降;与H₂O₂ 组比较, 4 种归肝经明目中药可明显上调Bcl-2 表达, 下调Bax 表达(P <0.01),Bcl-2/Bax 比率上升;PS 与4 种归肝经明目中药的调节作用相似, 但弱于4 种归肝经明目中药的作用(P <0.05)。结论:4 种归肝经明目中药调控凋亡相关基因Bcl-2 和Bax 的表达可能是其抑制LEC 凋亡的分子机制。     

四种归肝经明目中药防护晶状体氧化损伤和上皮细胞凋亡的研究

目的:探讨四种归肝经明目中药车前子、青葙子、菊花和熟地对晶状体氧化损伤及晶状体上皮细胞(lens epithelial cell, LEC) 凋亡的防护作用。方法:将21 只(42 眼) 新西兰白兔晶状体分成7 组:空白对照组、Fenton 组、吡诺克辛钠(PS) 组和车前子、青葙子、菊花及熟地四种归肝明目中药组。采用Fenton 反应复制兔晶状体氧化损伤模型, 在显微镜下观察各组晶状体的混浊程度, 并分别测定晶状体酶性和非酶性抗氧化剂水平。同样, 将21 只(42眼) SD 大鼠双眼随机分成上述7 组, 采用H₂O₂ 复制LEC 凋亡模型, 同时分别采用上述不同药物干预。应用TUNEL 法检测LEC 凋亡及凋亡率、透射电子显微镜观察LEC 超微结构改变和凋亡小体形成。结果:四种归肝明目中药组的晶状体混浊程度均明显轻于Fenton 组;四种归肝明目中药组晶状体中酶性抗氧化剂的活性和非酶性抗氧化剂的含量均明显高于Fenton 组。四种归肝明目中药组LEC 凋亡率均显著低于H₂O₂ 组(P <0.01), 且与PS 组均有显著性差异(P <0.05) 。超微结构研究显示, H₂O₂ 组绝大多数LEC 发生凋亡, 并呈凋亡各期改变;四种归肝明目中药组均仅有少数LEC 发生凋亡, 并多为早期或中期的轻微改变。结论:四种归肝经明目中药均可通过提高晶状体的抗氧化能力对抗晶状体的氧化损伤, 抑制LEC 凋亡, 减轻晶状体的混浊, 且明显优于PS 滴眼液。     

多非替利衍生物CPU228(V03) 对大鼠心室肌细胞钙瞬变的调节

目的:在β-受体激动情况下, 研究多非替利衍生物CPU 228 对电刺激触发心肌细胞的胞浆Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i) 变化及钙瞬变动力学参数的影响。方法:游离单个大鼠心室肌细胞, Fluo-3/AM 负载, 电刺激诱发心室肌细胞钙瞬变, 定量测定心室肌细胞内Ca²⁺浓度变化, 异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO) 100 nmol°L^-1激动β-受体, 观察CPU 228 1 μmol°L^-1对钙瞬变动力学参数、[Ca²⁺]_i 及钙负荷水平的影响。结果:CPU228 1 μmol°L^-1对大鼠心室肌细胞[Ca²⁺]_i 的影响不明显(P>0.05);ISO 100 nmol°L^-1显著升高大鼠心室肌细胞[Ca²⁺]_i 和细胞内钙负荷水平, 缩短钙瞬变时程, 并且增加钙瞬变的消除速率。CPU 2281 μmol°L^-1显著抑制ISO 的上述作用。结论:在β-受体激动情况下, CPU 228 可以降低心肌细胞[Ca²⁺]_i,使ISO 改变的钙瞬变动力学参数恢复到正常水平。     

过氧化氢对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的: 研究过氧化氢(H₂O₂)对单个大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流(Ica,L)的影响。方法: 用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞;用标准的全细胞膜片钳技术记录钙通道电流,观察5mmol·L^-1H₂O₂引起单个大鼠心室肌细胞Ica,L改变。结果: 在5mmol·L^-1H₂O₂作用下,大鼠心室肌细胞Ica,L峰值电流密度从4.89±0.52pApF增加至9.80±0.65pApF(P<0.05,n=10),电流-电压曲线下移,但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变;H₂O₂对Ica,L激活时间常数-电压曲线无明显影响,但可使其灭活时间常数-电压曲线明显向上移;H₂O₂对Ica,L稳态激活曲线无明显改变,但可使其稳态失活曲线明显左移,V0.5从(-26.85±5.3)mV左移至(-37.20±4.5)mV(P<0.05,n=5)。结论: H₂O₂可以增加大鼠心肌细胞Ica,L,且使其失活明显减慢。     

海狗油对实验性脂肪肝脂代谢和血栓素 A2 及丙二醛的影响

目的: 探讨海狗油抑制脂肪肝的作用机理。方法: 小剂量四氯化碳合并高脂饲料复制大鼠脂肪肝模型 7 周后, 模型组灌胃(ig) 给予等体积橄榄油;辛伐他汀组给予辛伐他汀 4 mg°kg^-1°d^-1, 海狗油低、中、 高 剂 量 组 ig 海 狗 油 0.5、 1.6、 4.8g°kg^-1°d^-1, 连续 8 周, 正常大鼠作为空白组。测定肝脂、肝内前列环素的代谢产物(6-keto-PGF_1α) 与血栓素A₂ 的代谢产物(TXB₂) 含量, 观察脂质过氧化作用和组织学检查结果。结果: 海狗油各组肝细胞内TXB 2 含量降低, 6-keto-PGF_1α/TXB₂ 比值增加, 超氧化物歧化酶(SOD) 活性升高, 甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)、游离脂肪酸(FFA) 含量显著降低, 组织学检查显示肝内脂变减轻, 细胞色素P₄₅₀ 2E1(CYP2E1) 免疫组织化学染色显色指数减小。结论: 海狗油使实验性脂肪肝的肝脂和肝内血栓素A₂ 的代谢产物减少, 即抑制肝脂合成、促进肝脂代谢(直接作用);使肝内血液粘度减少、血液流动性增加(间接作用), 从而对实验性脂肪肝有抑制作用;同时海狗油使 MDA 含量降低、SOD 活性升高而有抗氧化作用。     

蛹虫草提取物对高糖诱导内皮细胞衰老的影响

目的: 探讨蛹虫草乙酸乙酯提取物(CME)对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的影响。方法: 用高糖(40 mmol/L) 诱导建立HUVECs衰老体外模型,以冬虫夏草提取物(CSE)(50 μg/mL)为阳性对照,观察CME(12.5~100 μg/mL)对内皮细胞衰老的干预作用。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;SA-β-半乳糖酐酶(SA-β-gal)染色法检测细胞衰老特异性的SA-β-gal活性;流式细胞术检测细胞周期分布和细胞内活性氧(ROS)含量。结果: 经高糖干预24、48、72 h 后,HUVECs增殖活性OD值明显低于对照组;而且在高糖孵育 96 h 后,SA-β-gal染色阳性细胞率明显增加;孵育 48 h 后,处于G₀/G₁期细胞的百分率和ROS相对水平明显增加(P<0.01)。与高糖组相比,CME(25~50 μg/mL)孵育48和 72 h 后细胞OD值显著提高(P<0.05);CME(12.5~100 μg/mL)孵育 96 h 后SA-β-gal染色阳性细胞率显著降低(P<0.01);孵育 48 h 后G₀/G₁期的细胞百分率(P<0.01)、细胞内ROS水平显著降低(P<0.05);CME 25、50 μg/mL 效果优于CME 12.5、100 μg/mL(P<0.05),且与CSE 50 μg/mL 作用相近(P>0.05)。结论: 蛹虫草乙酸乙酯提取物可促进内皮细胞生长增殖,可能与其降低细胞内ROS水平,减轻细胞氧化应激损伤有关,从而减轻内皮细胞衰老。     

碘化N-正丁基氟哌啶醇抑制兔颈总动脉球囊损伤后血管内膜和平滑肌细胞增殖的作用研究

目的: 探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇(F₂)对兔颈总动脉球囊损伤后内膜及平滑肌细胞增殖的影响。方法: 30只新西兰兔随机分为假手术组、模型组、F₂高剂量给药组(2 mg/kg)、 F₂中剂量给药组(1 mg/kg)、F₂低剂量给药组(0.5 mg/kg)。模型组及F₂各给药组行左侧颈总动脉球囊损伤,各组分别于术后 7 d 取颈总动脉段,常规病理切片,HE染色,免疫组化法测定α-actin、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果: 与假手术组比较,模型组术后 7 d 血管内膜厚度、内膜面积、内膜厚度/中膜厚度、内膜面积/中膜面积、血管壁细胞PCNA表达显著增加(P<0.01),F₂剂量依赖地降低上述指标。与假手术组比较,模型组血管壁α-actin阳性染色减少,F₂各给药组可增加血管壁平滑肌细胞中α-actin阳性染色率。结论: F₂能抑制兔颈总动脉机械损伤后血管内膜和平滑肌细胞的增殖。     

利培酮联合抗抑郁药物治疗抑郁症对照研究的 Meta 分析

目的: 评价利培酮联合抗抑郁药物与抗抑郁药物单一治疗抑郁症的有效性与安全性的差异。方法: 应用循证医学方法对符合标准的10项研究进行分析,评价利培酮联合抗抑郁药物与抗抑郁药物单一治疗抑郁症的疗效、效应大小、痊愈率以及副作用的差异。结果: 同质性检验:(1)有效性:χ²=7.26,d_f=9(P>0.05);(2)安全性:χ²=3.41,d_f=2(P>0.05)。综合检验:研究组与对照组在第1、2、4、6、8周末的综合检验分别为Z₁=14.19(P<0.01)、Z₂=14.00(P<0.01)、Z₄=17.40(P<0.01)、Z₆=12.10(P<0.01)、Z₈=5.94(P<0.01)。效应大小:无论是研究组还是对照组,在第1、2、4、6、8周末与治疗前进行比较的治疗效应大多数达到0.5以上;研究组与对照组干预处理效应的差异效应在不同时段的差异效应都大于0.8。有效性比较:应用固定效应模型或随机效应模型显示研究组所有时段痊愈率、显效率均非常显著高于对照组,而无效率低于对照组(8周末除外)。副作用:两组之间的副作用差异没有显著性(Z=0.20~1.15,P>0.05)。结论: 小剂量利培酮联合抗抑郁药物治疗抑郁症是一种良好的方法,可能特别适宜于难治性抑郁症。