异丙酚预处理对缺氧/复氧后培养海马神经元金属硫蛋白-3蛋白表达的影响

目的:本研究观察异丙酚对培养海马神经元缺氧复氧后损伤反应的影响及金属硫蛋白-3(metallothionein-3,MT-3)在其中的作用。方法: 培养7~10 d 海马神经元,以不同浓度的异丙酚(50,150,250 μmol/L)预处理后 24 h 后,制备缺氧 4 h 后复氧 24 h 模型(H/R),Western blot法检测MT-3蛋白表达水平;以MT-3特异性siRNA沉默MT-3表达后,采用MTT法观察异丙酚对H/R海马神经元存活率的影响。结果: 在H/R条件下,异丙酚可浓度依赖性促进MT-3的蛋白表达。以MT-3 siRNA抑制MT-3蛋白表达后,异丙酚提高神经元存活率的作用消失。结论:异丙酚具有神经元保护效应,这一作用可能与其上调MT-3的蛋白表达有关。     

羟丁酸钠对大鼠原代培养皮层神经元缺氧复氧损伤的保护作用与GABAA 受体的关系1

目的 探讨羟丁酸钠(SO) 对大鼠皮层神经元缺氧复氧损伤的保护作用与GABAA 受体的关系。 方法 采用原代培养大鼠皮层神经元建立缺氧复氧损伤模型, 观察细胞的形态学, 测定其LDH 漏出率、MDA 含量、SOD、GPx 活力。 结果 缺氧复氧可引起神经元损伤, LDH 漏出率增加,MDA 含量升高(P <0.01), SOD、GPx 活力降低(P <0.01)。SO 能显著减少损伤神经元的LDH 漏出率及MDA 的生成(P <0.01), 升高SOD、GPx (P <0.01) 的活力, 这种作用可被GABAA 受体阻断剂seurinine 减弱(P <0.01)。 结论 SO 对缺氧复氧神经元损伤的保护作用可能与其激动GABAA 受体有关。     

羟丁酸钠在大鼠海马脑片缺氧复氧损伤中的保护作用机制

目的 研究羟丁酸钠(SO) 在大鼠海马脑片缺氧 复氧(H R) 损伤中的保护作用, 揭示SO 在缺血性脑损伤中的保护作用机制。方法 采用大鼠海马脑片H R 损伤模型。设正常对照组, H R组, SO 1 、10 、100 μmol/L 组, NCS-382 100 μmol/L +SO 100 μmol/L (NCS-382 + SO) 组、NCS-356100 μmol/L (NCS-356) 组。测定脑片孵育液中乳酸脱氢酶(LDH) 释放率, γ-氨基丁酸(GABA) 、谷氨酸(Glu) 含量;脑片进行TTC 染色计算组织损伤百分率;HE 染色观察组织病理形态学变化, 流式细胞仪测定细胞内钙;酶组织化学法检测一氧化氮合酶(NOS) 的表达。结果 SO 明显降低H R 海马脑片LDH 释放率(P<0.01), 提高TTC 染色的A490值, 降低组织损伤百分率(P<0.01), 升高GABA Glu 比值(P<0.01), 减轻H R 所致的组织病理损伤。H R 组脑片细胞内钙荧光强度和NOS阳性神经元明显高于正常对照组(P<0.01) ;SO 100 μmol/L 组、NCS-356 组细胞内钙荧光强度较H R 组显著减弱(P<0.01),NOS 阳性神经元的数目明显减少(P<0.01)。用γ-羟基丁酸(GHB) 受体选择性阻断剂NCS-382 后再使用SO, 细胞内钙荧光强度、NOS 阳性神经元的数目均接近H R组。结论 SO 对大鼠海马脑片H R 损伤有明显的保护作用, 其机制可能与升高GABA Glu 比值, 激动GHB 受体抑制细胞内钙的增高及NOS 的表达有关。     

神经节苷脂GM1 对新生鼠缺血缺氧后NOS表达的影响1

目的: 探讨神经节苷脂GM₁ 对新生儿缺氧缺血性脑病的保护作用及可能机理。 方法:通过建立新生鼠缺氧缺血性脑病动物模型, 观察缺血缺氧后不同时期脑组织的病理变化和一氧化氮合酶(NOS)表达, 以及 GM₁ 对其影响。结果: GM₁ 给药组脑组织损伤明显减轻, 缺血缺氧可诱导脑组织中 NOS 表达水平上调, GM₁ 部分地抑制了缺血缺氧后 NOS 的表达水平。 结论: GM₁ 对新生儿缺氧缺血性脑损伤具有一定程度的保护作用, 其作用可能是通过部分抑制NOS 的表达。     

赤芍 801 对大鼠脑缺血/再灌注损伤后脑源性神经营养因子表达的影响

目的: 探讨赤芍 801 (propyl gallate, PG) 对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后神经功能损伤、细胞凋亡及脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophic factor, BDNF) 表达的影响。方法: :线栓右侧大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA) 制成SD 大鼠短暂局灶性脑缺血模型, 实验大鼠随机分成:正常对照组、假手术组 、模型组、溶媒组、PG 组(分 PG 23.5、47、94 μmol/kg 3 个亚组) 等 5组。采用 Longa 等评分法进行大鼠神经功能评分;TUNEL 染色法观察缺血/再灌注不同时段(1、2、4、7 d) 模型鼠缺血区周边组织阳性神经元数量;免疫组织化学、蛋白免疫印迹法检测缺血/再灌注后不同时段各组缺血区周边组织 BDNF 的表达情况 。结果: 脑缺血/再灌注后 1 d, 模型大鼠神经功能缺损评分 、TUNEL 阳性细胞数均达到高峰。与此相仿, 该时段缺血周边区的 BDNF 表达亦达到高峰, 此后逐渐下降 。该时段TUNEL 阳性细胞数和 BDNF 表达与其它各时段(2、4、7 d) 比较均有升高(P<0.01) 。予上述不同剂量组的 PG干预后, 47、94 μmol/kg 组大鼠的神经功能缺损评分、TUNEL 阳性细胞数均有明显下降, 同时缺血周边区的 BDNF 表达有明显增加;并以 94 μmol/kg组为著 。结论: 脑缺血/再灌注后 BDNF 的早期表达增加可能对促进缺血周围区的损伤修复有重要作用;PG 能有效减轻脑缺血/再灌注损伤后神经细胞凋亡, 改善神经功能缺损症状, 机制可能与其促进 BDNF 的表达有关。     

反义寡核苷酸抑制早期生长反应基因-1表达对内皮细胞缺氧复氧损伤的影响

目的: 研究反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,AS-ODN)抑制早期生长反应基因1(early growth response gene-1,Egr-1)表达对内皮细胞缺氧复氧(anoxia/reoxygenation,A/R)损伤的影响。方法: 采用新生大鼠进行心脏微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)原代培养,取3~4代的CMECs建立缺氧复氧模型。细胞随机分为6组:对照(Con)组、缺氧复氧组(A/R)、溶剂组(LIP)、反义寡核苷酸转染组(AS)、正义寡核苷酸转染组(S)和错配寡核苷酸转染组(Sc)。通过测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及内皮细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,观察内皮细胞损伤程度;应用ELISA法测定细胞培养上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,观察内皮细胞炎症反应水平;Western-blot法检测培养内皮细胞中Egr-1的蛋白表达水平;显微镜下观察细胞形态学改变并计算存活率。结果: A/R造成内皮细胞内MDA升高,SOD下降,上清液中LDH、TNF-α含量升高,A/R刺激下细胞Egr-1的蛋白表达水平明显升高;A/R刺激前给予AS-ODN可抑制Egr-1蛋白的表达,减轻内皮细胞的损伤及炎症反应程度,提高细胞存活率。结论: AS-ODN抑制培养内皮细胞Egr-1的表达,并降低A/R损伤,提示Egr-1与缺氧复氧所致的心脏微血管内皮细胞损伤密切相关。     

黄体酮防治大鼠缺血再灌注脑损伤中细胞凋亡及p53蛋白的变化

目的: 探讨黄体酮对缺血再灌注损伤脑的保护机制。方法: 采用SD 大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(transient middle cerebral artery occlusion,MCAO),将大鼠随机分为6 组:假手术组、缺血再灌注组、二甲基亚砜溶剂(dimethyl sulfoxide, DMSO) 对照组、黄体酮(progesterone, PROG) 预防组、PROG 治疗组、PROG 预防治疗组, 应用免疫组织化学和细胞死亡原位末端标记(Insitu end labeling, ISEL) 法研究脑组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白p53 的表达情况。结果: 高倍视野下p53 蛋白阳性细胞数, 各药物处理组凋亡细胞数与缺血再灌注组和对照组之间差异有显著的统计学意义(P <0.05)。结论: PROG 可减轻局灶性缺血再灌流脑损伤, 减少大鼠脑缺血再灌注后的脑细胞凋亡。抑制脑神经细胞中p53 蛋白表达可能是其发挥保护作用的分子机制之一。     

盐酸埃他卡林对缺氧诱导神经细胞凋亡的影响

目的: 探讨盐酸埃他卡林(Ipt) 对缺氧诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡的影响。方法: 用电镜和流式细胞分析技术, 检测原代培养的大鼠皮质神经细胞凋亡;应用免疫组化法, 观察凋亡相关蛋白Bcl-2 、Bax 表达的改变。结果: Ipt 10 μmol·L^-1可减轻缺氧诱导的细胞染色质浓缩现象, 逆转缺氧诱导的Bcl-2表达的下调, 对Bax 表达无显著影响;Ipt (0.1~10 μmol·L^-1) 能剂量依赖性地降低凋亡细胞百分率, 以10 μmol·L^-1 浓度组效果最好, 其作用可被ATP 敏感性钾通道特异性阻断剂格列本脲(Gli) 所拮抗。结论: Ipt 对缺氧诱导的神经细胞凋亡有明显的抑制作用, 其作用机制与ATP 敏感性钾通道、Bcl-2 表达相关。     

生存素反义寡核苷酸诱导HL-60 细胞凋亡的实验研究

目的: 探讨特异性靶向生存素的反义寡核苷酸(ASODN) 对急性早幼粒细胞系HL-60 细胞凋亡的影响。方法: 应用四唑盐(MTT) 比色法分析细胞增殖;倒置显微镜观察细胞形态学变化;原位末端标记(TUNEL) 法检测细胞凋亡指数(AI);流式细胞术(FCM) 定量检测细胞凋亡;RT-PCR 半定量检测生存素mRNA 的表达。结果: 5～20 μmol·L^-1生存素ASODN 对HL-60 细胞增殖均有抑制作用, 且呈时间和剂量依赖性。ASODN 组凋亡率和生存素基因表达抑制率明显高于对照组。结论: 生存素ASODN 能有效抑制HL-60 细胞生存素mRNA 的表达并诱导细胞凋亡, 表明生存素对维持肿瘤细胞的增殖具有非常重要的作用。     

缺氧-复氧对心室肌细胞的损伤及川芎嗪的保护作用1

目的 观察缺氧-复氧对大鼠心室肌细胞的损伤及川芎嗪的保护作用 。方法 在缺氧-复氧条件下,测量对照组和不同浓度川芎嗪组对杆形心肌细胞百分比、心肌细胞内 K⁺/Na⁺浓度比及Ca²⁺浓度的影响。结果 缺氧-复氧对大鼠心室肌细胞有损伤作用,浓度为 4μmol·L^-1的川芎嗪对缺氧-复氧损伤细胞有保护作用,它能抑制损伤细胞挛缩,提高损伤细胞生存率,抑制心肌细胞内 K⁺/Na⁺浓度比的降低 、增加细胞内 Ca²⁺浓度,且剂量越大,保护作用越好,即川芎嗪对缺氧-复氧损伤细胞的保护呈剂量依赖性 。结论 川芎嗪对缺氧-复氧损伤的大鼠心肌细胞具有保护作用,它能显著地对抗缺氧-复氧对心室肌细胞的损伤作用 。     

人参皂苷Rb1预适应对肥厚乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的: 研究人参皂苷Rb1 对心肌细胞缺氧复氧(H/R) 损伤的保护作用。方法: 用血管紧张素II(Ang II) 刺激乳鼠心肌细胞肥厚, 以0.01 ~ 10μmol·L^-1 Rb1 对H/R 损伤心肌细胞预适应给药48h, 检测心肌细胞表面积(CSA)、细胞蛋白含量(TP)、细胞凋亡率、细胞生存率和乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA) 及一氧化氮(NO) 含量。结果: 与H/R 组相比, Rb1 组CSA 和TP 分别减少41.56%和43.37%;细胞生存率增加2.28 倍;凋亡率降低85.29%;LDH、MDA 含量分别降低59.20% 和72.03%;NO活性增加2.67 倍(P <0.01)。结论: Rb1 显著减轻肥厚心肌细胞H/R 损伤, 机制与抑制细胞凋亡、减少脂质过氧化和LDH 释放、增强NO 活性有关。     

盐酸埃他卡林对大鼠海马神经元谷氨酸受体功能及突触活动的影响

目的: 研究盐酸埃他卡林(Ipt) 对脑神经元谷氨酸受体功能及突触活动的影响。方法: 采用原代培养的大鼠海马神经元, 应用膜片钳全细胞记录技术, 记录Ipt 对培养的海马神经元谷氨酸或天冬氨酸(NMDA) 诱发电流及神经元突触后电流的影响。结果: Ipt (1 ~ 100 μmol·L^-1) 可浓度依赖性地对抗培养的海马神经元谷氨酸或NMDA 诱发电流, 并为ATP敏感性钾通道拮抗剂格列本脲30 μmol·L^-1所对抗。Ipt 抑制培养的海马神经元之间突触联系形成的自发兴奋性突触后电流, 降低其发放频率, 抑制其电流幅度;但对微小兴奋性突触后电流无显著性影响。结论: Ipt 可阻断脑神经元谷氨酸受体功能, 抑制脑神经元谷氨酸的兴奋性突触传递, 其作用与ATP 敏感性钾通道相关。     

石杉碱甲对大鼠海马脑片 CA1 神经元 θ节律及长时程增强的影响

目的: 研究石杉碱甲(Hup-A) 对大鼠海马脑片CA1锥体神经元θ节律、长时程增强的影响, 以分析其增强学习记忆功能的神经细胞电生理机制。方法: 应用大鼠海马脑片神经元细胞内记录技术, 观察石杉碱甲对大鼠海马脑片的 CA1 锥体神经元 θ节律、长时程增强的影响。结果: (1) 未用药组出现膜电位振荡前后 4~ 10 Hz(θ节律) 功率分量之和无显著性差异, 但在 Hup-A(1 μmol°L^-1) 灌流 15 min 后出现膜电位振荡, 与用药前没有膜电位振荡的 4 ~10 Hz 功率分量之和配对 t 检验比较有显著差异 (n=3, P<0.005)。(2) 在 LTP 期间, 对照组 EPSP 幅度在强直刺激后 30 min 显著性的升高(P<0.05), 而Hup-A 组在强直刺激后 15 min 即出现显著性升高(P<0.01)。结论: Hup-A 可增加大海马锥体神经元在θ频率范围内的功率分量, 并易化 LTP 的诱发, 这可能是其增强学习记忆功能的细胞电生理机制之一。     

川芎嗪预处理对大鼠无创肢体缺血预适应心肌保护作用的影响

目的: 探讨川芎嗪(TMP)预处理对大鼠无创肢体缺血预适应(R-IPC)心肌保护作用的影响。方法: 取成年雄性SD大鼠40只,随机均分为5组,分别为对照(Cont)组、缺血/再灌注(I/R)组、R-IPC组、TMP组、R-IPC+TMP组。预处理时R-IPC组和R-IPC+TMP组每天R-IPC预处理1次,连续 3 d;TMP组和R-IPC+TMP组每天i.p. TMP 10 mg/kg 预处理1次,连续 3 d;末次预处理 24 h 后,制备Langendorff逆灌离体心脏并作I/R损伤模型;检测冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CPK)活性,心肌梗死面积,心肌组织丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、caspase-3活性,细胞凋亡情况。结果: R-IPC或TMP预处理24 h后,大鼠心脏可有效对抗急性I/R损伤性的冠脉流出液中LDH、CPK活性以及梗死面积的增加,心肌组织中MDA含量上升和SOD、GSH-Px活性降低以及caspase-3活性和凋亡指数增加(P<0.01),表现出延迟保护作用;R-IPC与TMP共同预处理 24 h 后,诱发的延迟保护作用--在LDH、CPK活性与梗死面积等指标上,二者间表现为相互协同作用稍逊于SOD、GSH-Px、caspase-3活性和凋亡指数等指标。结论: TMP预处理可有效增强R-IPC对大鼠心脏急性I/R损伤之延迟保护作用。     

环氧化酶2过表达对铝盐致大鼠海马神经元损伤的影响

目的 研究环氧化酶2(COX-2)过表达与铝盐致大鼠海马神经元损伤间的关系。方法 原代海马神经元培养 7 d,予以铝盐负荷(终浓度 200 μmol/L)建立大鼠海马神经元损伤模型,以神经元转染COX-2过表达腺病毒(MOI=100),Western Blot检测COX-2的蛋白表达水平,酶化学法检测海马神经元超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率及MTT值,倒置荧光显微镜观察海马神经元病理形态变化。结果 COX-2过表达腺病毒转染的神经元COX-2蛋白表达增加(P<0.01),SOD活性、MDA含量、LDH漏出率、MTT值,以及大鼠海马神经元细胞的形态和结构未见明显异常变化。而COX-2过表达腺病毒转染在铝盐负荷基础上的海马神经元细胞MTT值和SOD活性明显下降,LDH漏出率和MDA含量明显上升(P<0.01或P<0.05),表现为严重的细胞损伤。结论 单纯的一定程度COX-2过表达不会造成神经元明显损伤,但可增加神经元对铝盐损伤的敏感性。     

复方沙棘颗粒对大鼠皮层神经细胞缺血性损伤的保护作用

目的: 研究复方沙棘颗粒对体外培养的大鼠大脑皮层神经细胞谷氨酸(Glu) 损伤的保护作用及机理。方法: 分离培养新生(1 d) 大鼠大脑皮层神经细胞, 加入Glu 模拟兴奋性损伤,MTT 法测定细胞存活率, 比色法测定上清中乳酸脱氢酶(LDH) 含量, 细胞中超氧化物歧化酶(SOD) 、谷胱甘肽(GSH-Px) 活性、丙二醛(MDA) 含量。结果: 细胞经Glu 损伤后,上清LDH 含量、细胞中MDA 含量显著增加, SOD 和GSH-Px 活力明显下降。复方沙棘处理组可有效防止上述改变。结论: 复方沙棘颗粒可有效保护由Glu 引起的大鼠大脑皮层神经细胞的损伤。其机理可能与抗脂质过氧化、清除自由基有关。     

氯胺酮的神经保护作用及其对p38 蛋白磷酸化激活的影响

目的: 研究NMDA 受体拮抗剂氯胺酮对大鼠海马脑片缺糖缺氧(OGD) 损伤的神经保护作用及其对p38 蛋白磷酸化激活的影响。方法: 采用大鼠海马脑片体外OGD 损伤模型, TTC 染色抽提法观察氯胺酮对海马脑片OGD 损伤时的神经保护作用, 免疫印迹法研究“缺血再灌注”不同时间大鼠海马脑片中p38 磷酸化激活变化情况, 以及氯胺酮对p38 磷酸化激活的影响。结果: 氯胺酮显著抑制海马脑片OGD 损伤所致的A 值降低, p38 蛋白在缺血再灌注后磷酸化激活增加, 再灌注15 min 后开始上升, 2 h仍可见持续表达。氯胺酮剂量为5、10 μmol·L^-1时,能显著抑制p38 蛋白磷酸化激活(P <0.05) 。结论: 氯胺酮具有一定的神经保护作用, 其保护作用可能与抑制海马神经元p38 蛋白的磷酸化激活有关。     

毒胡萝卜素诱导大鼠皮层神经元内质网应激及丹红注射液的干预作用

目的 探讨毒胡萝卜素诱导大鼠皮层神经元内质网应激凋亡的机制及丹红注射液的干预作用。 方法 体外培养SD乳鼠皮层神经元,免疫组织化学、免疫荧光染色鉴定神经元纯度。流式细胞术AnnexinV、PI双标检测凋亡率及活性caspase-3、caspase-8、caspase-7、caspase-9表达,Westernbloting免疫印迹分析caspase-12、GRP78、Bcl-2、细胞色素c蛋白表达,Fura-2/AM法荧光分光光度计检测细胞内钙浓度([Ca2+]i)。 结果 SD乳鼠皮层神经元可纯化体外培养。2μmolL毒胡萝卜素作用神经元24、48h细胞凋亡率分别是17.88%、21.38%,丹红治疗组分别是6.30%、6.11%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。毒胡萝卜素诱导神经元GRP78表达上调,剪切活化caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12,使细胞色素c表达增加,Bcl-2表达减少。丹红注射液促进细胞Bcl-2表达,抑制细胞色素c释放,减少活化的caspase-3、caspase-8、caspase-9含量,稳定游离钙浓度。 结论 毒胡萝卜素诱导神经元内质网应激反应性凋亡,丹红注射液能抑制体外培养神经元内质网应激所致凋亡。     

石杉碱甲增强大鼠海马脑片CA1锥体神经元的兴奋性突触传递

目的: 观察石杉碱甲(Hup-A)对海马CA1锥体神经元兴奋性突触传递的影响,以探讨其增强学习记忆功能的神经细胞电生理机制。方法: 应用大鼠海马脑片CA1锥体神经元细胞内记录技术,观察Hup-A对大鼠海马CA1锥体神经元膜电性质和刺激Schaffer侧支诱发的兴奋性突触后电位(EPSP)的影响。结果: (1) Hup-A (1 μmol/L) 灌流 15 min 对CA1锥体神经元的膜电性质没有显著性影响。(2) Hup-A (0.3~3.0 μmol/L)浓度依赖性使EPSP幅度升高、时程延长、曲线下面积增大,该作用可被阿托品 (10 μmol/L) 预处理取消。(3)Hup-A对外源性谷氨酸诱导的去极化反应无明显影响。结论: Hup-A可增强CA1锥体神经元的兴奋性突触传递,其增强突触传递作用与M型乙酰胆碱受体激动有关。