一种来自于尖吻蝮蛇毒的新类凝血酶对血液止血机制的研究

目的: 研究尖吻蝮蛇蛇毒止血酶Agacutase的止血机制。方法: 水蛭素、肝素、苯甲基磺酰氟（PMSF）、钙离子或尿素等分别与Agacutase酶混合,在体外研究它们对酶凝结活性的影响。新西兰白兔静脉注射Agacutase,观察新西兰白兔的血凝和纤溶指标。结果: 水蛭素和肝素对该酶没有影响,PMSF和尿素明显抑制酶的凝结活性,而钙离子激活酶凝结活性。静脉注射Agacutase 0.03~0.12 U/kg 剂量后,各组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短,给药后 2 h 药效达高峰,药效持续 24 h。与给药前比较,各组兔血纤维蛋白原含量和血黏度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致,对活化部分凝血活酶时间（APTT）无影响。结论: Agacutase在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白,但不激活凝血因子II和XIII,在伤口部位加速止血。在正常的血管内,不会造成血栓形成。所有实验结果显示,Agacutase是一个有效的潜在止血剂。     

皖南尖吻蝮蛇蛇毒中抗肿瘤活性蛋白分离纯化及其活体外性研究

目的:分离纯化皖南尖吻蝮蛇蛇毒(WannanAgkistrodon acutus venom) 中抗肿瘤活性蛋白并研究其活性。方法:利用DEAE-sepharose Fast Flow和SP-sepharose Fast Flow 阴阳离子交换层析以及Sephadex G-75 凝胶过滤层析等分离方法从皖南尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化得一种抗肿瘤活性蛋白,用CCK-8 法检测该蛋白对体外培养的白血病K562 细胞、结肠癌细胞(SW480)、胃癌细胞(SGC7901)、肝癌细胞(HepG2) 的增殖抑制作用。结果:分离纯化得一相对分子质量约23700 的抗肿瘤活性组分(ATF1-c), CCK-8 检测对体外培养的K562、SW480、SGC7901、HepG2 细胞的增殖抑制作用, 呈剂量-时间依赖关系。结论:ATF1-c 对体外培养的人癌细胞有明显的抑制和杀伤作用。     

不同剂量蛇毒抗高凝状态酶对小鼠肝癌H22 生长作用的实验研究

目的: 探讨不同剂量蛇毒抗高凝状态酶(AHCSE)对小鼠肝癌H22 生长作用的影响。方法: 小鼠皮下接种小鼠肝癌(H22) 后, 待肿瘤长成10mm² 分别经腹腔注射不同剂量AHCSE, 每天1 次, 连续10 d, 观察瘤重抑制率、瘤体积、抑瘤率、脾指数和白细胞及其组成成分, 统计采用LDS-t, 检验水准α=0.05 。采用白细胞及其组分与脾指数的相关和回归。结果: 中、高剂量组AHCSE 具有明显的抗肿瘤作用, 而低剂量组抗肿瘤作用效果不佳, 但高剂量组的小鼠体重降低明显。实验组的脾系数明显高于对照组, 并且随着AHCSE 的剂量增大脾系数也增大。白细胞随着AHCSE 剂量的增大而增大, 白细胞及其组分与脾指数存在相关性和回归直线。结论: 在一定的范围内, 随着AHCSE 的剂量增大, 抗肿瘤效果增强, 但副作用也增大, 其机制可能与凋亡和激活免疫系统有关。     

尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I通过增强子结合蛋白同源蛋白/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12途径诱导人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的研究

目的:探讨内质网应激途径在尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I（antitumor component-I from Agkistrodon acutus venom,AAVC-I）诱导人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡中的作用。方法:本实验选择人舌鳞癌Tca8113细胞作为研究对象,体外条件下传代培养取对数生长期细胞进行实验。根据实验目的设为正常对照组、二硫苏糖醇（DL-dithiothreitol,DTT）阳性对照组和AAVC-I实验浓度组。MTT法检测不同浓度的DTT和AAVC-I处理Tca8113细胞24 h后的增殖抑制作用并筛选合适的DTT阳性对照实验浓度和AAVC-I实验浓度组,采用HE染色、Annexin V-FITC/PI双荧光染色法观察细胞凋亡情况,Western blot检测内质网应激葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein 78,GRP78）、增强子结合蛋白同源蛋白（enhance-binding protein-homologous protein,CHOP）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12（Caspase-12）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（Caspase-9）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达水平。结果:随着AAVC-I实验浓度的增加,其对Tca8113细胞的增殖抑制作用增强（P<0.05）,并观察到细胞皱缩变小间隙增大,胞核浓缩,细胞破碎,出现凋亡小体,凋亡率增高（P<0.05）,蛋白GRP78、CHOP、Caspase-12、Caspase-9、Caspase-3表达水平上调（P<0.05）。结论:在AAVC-I诱导人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡中,内质网应激CHOP/Caspase-12途径发挥着正向调节作用。     

轴类件的柔性辊轧成形工艺与实验研究

柔性辊轧成形是成形轴类件的有效方法之一,具有柔性、快捷和低成本的特点,文章简要介绍了该工艺的成形原理和主要工艺参数,制作了实验装置,采用实验方法进行了实际轧制实验,应用电测法测量了轧制力能参数,结合理论计算分析力能参数与工艺参数间的关系,分析结果为成形设备的开发打下了理论基础。     

用于阀芯类零件去毛刺的磁极板优化设计与实验研究

目的 为解决阀芯类零件节流边毛刺去除不均匀和效率低下的问题,对磁极板尺寸和曲率进行规律性研究和实验验证。方法 首先,用Maxwell仿真软件对磁极板的各个参数进行规律性仿真,得出合适的磁极板尺寸;其次,为提高加工区域的磁感应强度值,设计了曲面磁极板,并对其相关参数进行仿真;最后对优化后的装置进行磁感应强度测试,并使用液体磁性磨具对45钢和阀芯棱边毛刺进行去除实验。结果 根据仿真结果发现,磁极板长度比工件大20 mm时,工件轴向磁场分布最均匀,磁极板厚度对磁场影响较小,磁极板宽度应根据加工间隙进行选择。曲面磁极板可以加强加工区域的磁感应强度值,曲率半径越小,加工区域获得的磁感应强度值越大,其中半圆形磁极板效果最佳。对装置的磁感应强度测试也表明,将工件置于磁场中后,其表面磁感应强度值最高达600 mT左右,满足加工需求。最后通过加工实验发现,在转速为500 r/min的条件下,阀芯节流边的毛刺去除效果理想,且轴向加工均匀。结论 该装置可以对阀芯这类导磁性回转类零件产生良好的加工效果。     

重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)对正常动物降糖作用的实验研究

目的 观察rhGLP-1(7-36) 对正常动物的降血糖和促胰岛素分泌作用以及该作用的葡萄糖依赖性。 方法 用不同动物模型sc 不同剂量的rhGLP-1(7-36) 后, 收集血清, 测定血糖值及胰岛素值。 结果 正常C57 小鼠和家兔sc 不同剂量的rhGLP-1(7-36) 后, 血糖和胰岛素分泌均无明显改变, 提示rh-GLP-1(7-36) 并不影响血糖正常动物的胰岛素分泌及血糖;对于给糖负荷动物, rhGLP-1(7-36) 使其胰岛素分泌增加, 并进而使升高的血糖明显降低, 表明rhGLP-1(7-36) 具有明显的葡萄糖依赖的促胰岛素分泌作用。在C57 小鼠和家兔糖耐量实验中发现, rh-GLP-1(7-36) 16 μg·kg-1使糖负荷家兔胰岛素分泌增加, 血糖升高曲线明显降低, 说明rhGLP-1(7-36) 能明显增加动物对糖的耐受。 结论 rhGLP-1(7-36) 通过葡萄糖依赖的胰岛素分泌作用降低过高血糖, 而不降低正常血糖, 同时用量小, 起效快, 安全性高。     

基于碳化硅纤维丝束不规则运动的多孔薄板类零件表面抛光理论与实验研究

汽车空调压缩机用多孔类阀板表面多采用硬研磨工艺进行光整加工,存在表面粗糙度大、孔边有毛刺、阀片与阀板配合表面密封不严等问题.为解决以上问题,提出利用碳化硅纤维丝束抛光替代传统的研磨.完成应用碳化硅纤维丝束进行抛光的运动轨迹的理论分析,采用MATLAB软件对运动参数进行优化仿真,对比分析了毛刷头和工件不同速度对运动轨迹的...     

重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36) 免疫原性的实验研究

目的 观察重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36) [rhGLP-1(7-36)] 对小猎兔犬的免疫原性。方法 健康小猎兔犬随机分为rhGLP-1(7-36) 高、中、低剂量组(200 、100 、50μg kg) 和生理盐水对照组,每组6 只, 雌雄各半。皮下注射给药, 每天1 次,每周6 次, 连续9 个月。采用酶联免疫吸附试验(ELISA) 和碱性磷酸酶免疫斑点试验检测犬血清中的抗体。结果 连续给药3 、9 个月及恢复期血清均未发现抗rhGLP-1(7-36) 抗体。结论 长期给予rhGLP-1(7-36) 对小猎兔犬无免疫原性。     

蝮蛇毒血小板抑制因子对动脉血栓形成的影响及机制研究

目的: 探讨皖南蝮蛇毒血小板抑制因子(AHV-PI) 对家兔动脉血栓形成的影响及可能机制。方法: 新西兰家兔24只,随机分成假手术组、动脉血栓模型组、阳性对照组(奥扎格雷钠,5 mg/kg),AHV-PI(0.1 mg/kg)实验组共4组,每组6只。应用70% FeCl₃溶液化学损伤的方法来制备家兔颈动脉血栓模型,采用血栓弹力仪(TEG)描计血栓弹力图,比浊法测定家兔血小板聚集率,ELISA测定各组血浆中α颗粒膜蛋白(GMP-140)和血栓素B₂(TXB₂)水平,光镜和透射电镜分别观察动脉血栓形成和血小板形态的改变。结果: AHV-PI实验组与模型组相比,血栓弹力图凝血时间(R)值和血凝块形成时间(K)值延长(P<0.01 和P<0.05),Alpha角度、最大幅度(MA)和凝血指数(CI)减小(P<0.05 和P<0.01);血小板聚集率的各项指标均明显降低(P<0.05);血浆中GMP-140和TXB₂含量降低(P<0.01)。AHV-PI实验组光镜下动脉内未见血栓形成,血小板电镜显示血小板形态基本规则,与模型组相比伪足较少,α-颗粒和致密颗粒无明显减少,胞浆空泡化现象减轻。结论: AHV-PI可以通过抑制血小板聚集,防止动脉血栓的形成,其机制可能与之保护血小板超微结构,减少血小板脂质代谢和颗粒内容物的释放有关。     

中华眼镜蛇毒组分CⅡ抗耐药K562/A02细胞作用机制的研究

目的: 研究中华眼镜蛇毒组分C Ⅱ (FC ⅡNNAV) 对多药耐药白血病细胞K562/A02 的抑制作用及机制。方法: 应用MTT 法观察FC ⅡNNAV 体外对K562 和K562/A02 的毒性作用, 流式细胞仪法观察FC ⅡNNAV 体外对K562/A02 细胞P-gp, Bcl-2 蛋白表达的影响, 比色法检测Caspase-3 活性变化。结果: FC ⅡNNAV 对耐药K562/A02 及敏感K562 细胞均有抑制作用, IC50 分别为0.75±0.01 μg·ml^-1 和0.67±0.11 μg·ml^-1。流式细胞仪检测发现FC ⅡNNAV 能使K562/A02 细胞的P-gp, Bcl-2 蛋白表达明显下调;Caspase-3 活性明显增强。结论: FC ⅡNNAV 对细胞K562/A02 及细胞K562 均有较强的抑制作用, 且抑制作用与剂量呈正相关, FC ⅡNNAV 可能通过抑制K562/A02 细胞P-gp, Bcl-2 蛋白表达, 激活Caspase-3 活性而诱导K562/A02 细胞凋亡。     

苦杏仁苷对佐剂性炎症影响的实验研究

目的:观察苦杏仁苷对大鼠佐剂性炎症(机体异常免疫)和小鼠碳粒廓清(机体正常免疫)的影响,以揭示其免疫调节作用。方法:采用皮下注射Freund's 完全佐剂抗原, 形成大鼠慢性免疫萎缩性胃炎模型, 测定胃液游离酸度、总酸度及胃蛋白酶活性;大鼠足跖皮内注射Freund's 完全佐剂形成佐剂性关节炎, 测定佐剂性关节炎原发病变的足跖肿胀度、继发病变的肿胀率及炎症抑制率;小鼠碳粒廓清实验测定廓清指数(K)及吞噬指数(α)。结果:苦杏仁苷高剂量组可极显著降低大鼠胃蛋白酶活性, 抑制佐剂性关节炎原发病变的足跖肿胀度, 减轻继发病变的肿胀率, 提高小鼠的廓清指数和吞噬指数(P <0.01);苦杏仁苷中剂量组可显著降低大鼠胃蛋白酶活性, 提高小鼠廓清指数(P <0.05), 极显著降低佐剂性关节炎原发和继发病变的肿胀度、肿胀率(P <0.01);各剂量组的苦杏仁苷对大鼠胃液酸度无明显影响作用(P >0.05)。结论:苦杏仁苷能抑制佐剂性炎症, 增强巨噬细胞的吞噬功能, 具有调节免疫功能的作用。     

脱氢表雄酮对大鼠骨关节炎影响的实验研究

目的:;研究脱氢表雄酮(DHEA)对大鼠实验性骨关节炎(OA)的影响。方法: 40 只大鼠随机分4组:正常对照组、模型对照组、DHEA 大、小剂量组。除正常对照组外,其余3组右膝木瓜蛋白酶关节腔注射法建立OA 模型。然后DHEA 大、小剂量组两组右膝分别关节腔注射50 μmol· L^-1 和100μmol·L^-1 的DHEA 溶液150 μl,正常对照组、模型对照组两组右膝均注入生理盐水150 μl,每周2 次,注射5周。6周后处死大鼠,大体形态学、组织学、生化及免疫组化的方法评价关节软骨情况。结果: 手术显微镜下观察,见DHEA 大、小剂量组两组软骨损害均较模型对照组明显减轻。DHEA 大、小剂量组Mankin's评分、关节腔冲洗液一氧化氮含量、滑膜丙二醛含量及关节软骨基质金属蛋白酶,1和9的表达均较模型对照、组显著降低, DHEA 大剂量组上述指标均较DHEA 小剂量组显著降低。且两组关节腔冲洗液和血清超氧化物歧化酶活性均较模型对照组显著升高, DHEA 大剂量组上述指标升高均较DHEA小剂量组更明显。结论: DHEA 对OA 软骨有保护作用,且存在剂量依赖性,保护机制可能是抑制关节软骨基质金属蛋白酶表达、减少一氧化氮释放和增强抗氧化作用。     

清咽利喉含片镇痛作用的实验研究

目的 观察清咽利喉含片的镇痛作用。方法 采用小鼠热板法和酒石酸锑钾所致的小鼠扭体反应,观察小鼠的镇痛作用。结果 清咽利喉含片可明显提高小鼠痛阈,延长酒石酸锑钾所致扭体发生的潜伏期及减少10 min 内扭体次数。作用与西瓜霜润喉片大体相当。结论 清咽利喉含片具有较好的镇痛作用。     

精细雾化Cu-CMP抛光液抛光效果的试验研究

以磨料白炭黑、氧化剂H2O2、有机碱三乙醇胺、分散剂聚乙二醇为原料,通过正交设计的方法配制一系列抛光液,通过四甲基氢氧化铵调节抛光液的pH值为12,然后在研磨抛光机上对铜片进行超声波精细雾化化学机械抛光（CMP）。对抛光盘转速与材料去除率的关系进行了研究,并对传统抛光和雾化抛光效果进行了对比。试验结果表明,分散剂、白炭黑、有机碱、氧化剂对抛光去除率的影响依次减弱。随着抛光盘转速的增加,雾化抛光的去除率经历了先缓慢增加、再急剧增加、后缓慢增加的变化过程。在同等的试验条件下,传统抛光的去除率为223 nm/min,铜片表面粗糙度为7.93 nm,雾化抛光去除率和铜片表面粗糙度分别为125 nm/min和3.81 nm;虽然去除率略有不及前者,但抛光液用量仅为前者的十几分之一。     

内皮素受体拮抗剂CPU0213对异丙肾上腺素心肌病SERCA2a表达的改善作用

目的 研究异丙肾上腺素心肌病模型心肌细胞肌浆网钙ATP 酶(sarco-endoplasmic reticulumATPase 2a, SERCA2a) 表达的改变, 以及新型内皮素受体拮抗剂CPU0213的治疗作用。方法 雄性SD大鼠皮下给予异丙肾上腺素(2 mg·kg^-1·d^-1)10 d, 治疗组动物在第6 到第10 天皮下给予CPU0213 (30 mg·kg^-1·d^-1)。各组动物颈动脉插管记录心功能指标:左心室收缩压(LVSP), 左心室舒张末期压(LVEDP), 和左心室压力变化最大速率(±dp dtmax)。左心室心肌组织SERCA2a 的mRNA 及蛋白表达分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 和蛋白免疫印迹法(Western blotting) 测定。结果 异丙肾上腺素引起左心室收缩和舒张功能明显下降, 同时SERCA2a 的mRNA 及蛋白表达均显著下调(P<0.05)。CPU0213 显著提高SERCA2a 表达(P<0.05), 明显改善心功能(P<0.05)。结论 CPU0213 可通过逆转肌浆网钙调控蛋白SERCA2a 的表达下调, 使异丙肾上腺素引起的心功能下降得以恢复。本实验证明SERCA2a是β 受体过度激活引发心衰过程中的重要靶点。内皮素受体介导了β 受体过度激活状态下SERCA2a的表达下调, 是内皮素受体拮抗剂治疗心衰的重要依据之一。     

复方心康口服液心肌保护作用的实验研究

目的: 探讨心康口服液对急性心肌损伤的保护作用。方法: (1) 将小鼠分为对照组、运动衰竭组(运衰组)、牛磺酸+运衰组(牛磺酸组)、丹参 +运衰组(丹参组), 采用不同比例配伍的心康口服液用于小鼠, 观察其游泳至衰竭时间。(2) 用 Wistar 大鼠建立离体心脏模型及心脏损伤模型, 分为对照组、缺血损伤(A R) 组、心康组, 分别观察各组大鼠心功能指标、CPK 活性、心肌组织 MDA 及 GSH-PX, SOD 活性、心肌细胞超微结构。(3) 以 1 ~ 3 d 的 SD 大鼠的心室肌细胞为基质, 建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型, 分为对照组(复氧组)、A R(缺氧/复氧) 组、心康组, 观察 3 组的心肌细胞存活率、培养液中 LDH 活性、心肌细胞超微结构。结果: (1) 牛磺酸组、丹参组较衰竭组小鼠的游泳时间显著延长(P<0.05), 血清中 CPK 活力低于运衰组(P<0.05)。心康口服液中牛磺酸对小鼠的游泳能力影响较大, 且高浓度好;丹参的影响次之, 中浓度较好。(2) 对照组整个灌流期间 LVSP、dp/dt_max、HR均无明显变化, 心肌细胞超微结构正常。A/R 组在复灌 5、10、20、30 min 时LVSP、dp/dt max、HR 下降(P<0.01), 心肌酶活力降低,MDA 含量及 CPK 活性升高(P<0.01), 心肌细胞超微结构破坏, 成不可逆损伤, 心康组在复灌 5、10、20、30 min 时 LVSP、dp/dt_max、HR 与 A/R 组相比均升高(P<0.01);心肌酶活力均升高, MDA 含量及CPK 活性降低(P<0.01);细胞超微结构大有改善。(3)A R 组与对照组相比其细胞存活率降低(P<0.01), LDH 活力升高(P<0.01), 心康组与 A R 组相比细胞存活率升高(P<0.01);LDH 活力降低(P<0.01);对照组心肌细胞超微结构正常, A/R 组心肌细胞超微结构破坏, 成不可逆损伤, 心康组细胞超微结构大有改善。结论: 牛磺酸和丹参配物而成的心康口服液, 对心肌缺血/再灌注损伤具有显著的保护作用, 心康口服液作为心肌缺血/再灌注损伤治疗的辅助性用药将具有较好的临床应用前景。