Bay117802 抑制羟基喜树碱诱导的人乳腺癌Bcap37 细胞凋亡

目的: 探讨IκB-α磷酸化抑制剂Bay117082 特异性阻断NFκB 信号转导途径对羟基喜树碱(HCPT)诱导Bcap37 细胞凋亡的影响。方法: 采用MTT 法测定细胞的增殖活力;琼脂糖凝胶电泳观察细胞调亡;Western blot 研究细胞调亡所涉及的蛋白表达;DIGEMSA研究NFκB /DNA 结合状况。结果: 5 μmol·L^-1 Bay117082 可以抑制HCPT 对IκB-α的磷酸化, 阻断NFκB 信号转导途径, 阻滞HCPT 诱导的细胞凋亡,同时也抑制HCPT 诱导pro-Caspase3 和Bcl-2 的降解。结论: Bay117082 对HCPT 诱导的乳腺癌细胞凋亡有明显的抑制作用, 其作用机制与NFκB 信号转导途径有关, NFκB 起促进凋亡的作用。     

异嗪皮啶对人乳腺癌干细胞凋亡相关基因Bcl-2与Caspase家族表达的影响

目的: 研究草珊瑚中异嗪皮啶成分对乳腺癌干细胞中凋亡相关基因通路Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8基因表达影响,进而明确其抑制增殖、迁移和促凋亡的机制。方法: 无血清培养法诱导MDA-MB-231细胞株富集乳腺癌干细胞,流式细胞仪分选CD44⁺ /CD24 ^-/low干细胞群。各组分别给予0、17、50、150、450 μmol/L异嗪皮啶,CCK-8法观察给药后24、48、72 h的细胞活力;细胞划痕实验法检测给药后细胞痕道宽度变化值并判断其对细胞迁移能力的影响;Annexin V-FITC/PI染色法检测给药后细胞总凋亡率变化;实时荧光定量PCR测定各组Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8基因的mRNA水平;Western blot检测上述基因的蛋白水平。结果: 与对照组比较,50、150和450 μmol/L异嗪皮啶组24、48、72 h的细胞活力降低,细胞迁移能力下降。与对照组比较,50、150和450 μmol/L异嗪皮啶组细胞总凋亡率高于对照组,Bcl-2基因mRNA和蛋白表达水平降低,Caspase-3和Caspase-8基因mRNA和蛋白表达水平升高。以上结果均呈明显剂量效应关系。结论: 异嗪皮啶能通过下调Bcl-2基因表达与激活Caspase基因家族诱导乳腺癌干细胞的凋亡,同时能抑制其增殖与迁移。     

TO901317促进人乳腺癌细胞凋亡的研究

目的: 研究肝X受体激动剂TO901317对人乳腺癌细胞凋亡的影响。方法: 不同浓度（0, 10, 20, 40 μmol/L）TO901317处理MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞不同时间（0, 12, 24, 48 h）,用MTT法检测细胞活力,Hoechst 33342染色及流式Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot进一步检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase 3和cleaved-Caspase 3等的表达。 结果: 随着TO901317处理浓度的增加和时间的延长,对细胞活力的抑制作用逐渐增强,凋亡现象逐渐明显。进一步通过Western blot检测发现,TO901317可下调Bcl-2蛋白表达,促使凋亡蛋白Bax和cleaved-Caspase 3表达增多,进一步证实TO901317促进两种乳腺癌细胞凋亡。 结论: TO901317能促进MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞凋亡。     

槐米中槲皮素提纯、鉴定以及诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用

目的 研究从槐米中槲皮素(Quercetin,Que)提取、鉴定和对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制以及诱导凋亡作用。方法 采用碱溶解酸沉淀法提纯槐米中槲皮素,并进行红外光谱分析;采用体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,用不同浓度槲皮素处理;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长抑制率;采用细胞凋亡DNA Ladder和FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞仪检测,槲皮素作用后MCF-7细胞凋亡情况。结果 不同浓度槲皮素对人乳腺癌MCF-7细胞有生长抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(P<0.05);10.0 mmol/L 槲皮素作用MCF-7细胞 2 d,DNA电泳出现特征性的凋亡条带;10.0 mmol/L 槲皮素处理MCF-7细胞 1 d、2 d 和 3 d,细胞凋亡率分别为(9.2±1.5)%、(30.0±11.8)%和(60.8±10.6)%。结论 用碱溶解酸沉淀法可从槐米中提纯槲皮素,提取的槲皮素对人乳腺癌MCF-7细胞有生长抑制和诱导凋亡作用。     

白英提取物诱导人肝癌BEL-7404 细胞凋亡作用

目的 探讨中药白英提取物对肝癌BEL-7404 细胞系的凋亡作用。方法 用不同浓度的白英提取物处理肝癌BEL-7404 细胞, 通过观察细胞形态、DNA凝胶电泳法研究白英提取物诱导肝癌BEL-7404 细胞产生凋亡现象。结果 光学显微镜下可见细胞呈凋亡特征性变化, 凝胶电泳可见细胞DNA 有规律断裂形成梯形图谱。结论 白英可诱导肝癌BEL-7404 细胞产生凋亡。     

As2O3 诱导K562细胞凋亡过程中细胞表面电荷变化的研究

目的:研究三氧化二砷(As₂O₃) 诱导K₅₆₂ 细胞凋亡时细胞表面电荷的变化, 阐明As₂O₃ 诱导K₅₆₂细胞凋亡的可能机制, 为As₂O₃ 在临床上的应用提供理论依据。方法:应用细胞电泳仪检测As₂O₃ 诱导K₅₆₂细胞凋亡中细胞电泳率的变化。通过细胞增殖、活力检测, 形态学观察, 亚G1 期细胞含量和DNA 凝胶电泳等鉴定细胞凋亡。结果:1.0 ～ 20 μmol·L^-1As₂O₃ 作用于K₅₆₂细胞, 在细胞形态、DNA 凝胶电泳、FCM 显示出典型的细胞凋亡特征之前, 试验组细胞表面电荷已在1.6 h 左右开始下降, 6 h 内降低最明显, 6 h 后虽有下降, 但幅度明显减弱。与对照组比较, 低于1.0 μmol·L^-1 的As₂O₃ 对细胞表面电荷影响不大。结论:细胞表面电荷的下降是K₅₆₂ 细胞凋亡的早期事件。细胞表面电荷的下降有一定的时间范围, 超过此范围, 细胞表面电荷下降趋向无限大。     

青蒿琥酯诱导人早幼粒白血病细胞HL60 凋亡的线粒体机制

目的:探讨青蒿琥酯(artesunate, Art) 诱导人急性早幼粒白血病细胞HL60 凋亡的线粒体机制。方法:用Art 处理HL60 细胞, 通过MTT 比色法检测细胞增殖抑制的效果;透射电镜、DNA 凝胶电泳技术观察细胞的凋亡;流式细胞术(flow cytometry,FCM) 进行细胞周期分析和线粒体膜电位(mitochondrialmembrane potential, MMP) 水平的检测;比色法检测半胱-天冬氨酸蛋白酶3(cysteine containing aspartate,Caspase 3) 活性。结果:Art 呈浓度和时间依赖性的抑制HL60 细胞的增殖(P<0.05) 。Art 诱导后HL60 细胞出现典型的凋亡形态学变化和生化改变, G²⁺M 期细胞比例增高, S 期减少, 凋亡率上升(P<0.05), 线粒体膜电位降低(P<0.05),Caspase 3 活性增强(P<0.05) 。结论:Art 可能通过线粒体/半胱-天冬氨酸蛋白酶3 特定途径诱导HL60细胞凋亡。     

小檗碱对人肺癌GLC-82 细胞凋亡的影响

目的: 探讨生物碱类中药成分小檗碱(berberine)诱导人肺癌GLC-82 细胞的凋亡作用。方法: 采用细胞培养技术,用不同浓度的小檗碱处理GLC-82细胞48 h,用Hoechst33258 染细胞核,在荧光显微镜下观察凋亡细胞核的形态变化,用QWin 图象分析软件测量细胞核面积,计算凋亡率。采用MTT 法测定细胞的增殖能力。小檗碱作用GLC-82 细胞36 h后,采用荧光免疫细胞化学SABC-Cy3 法测定Caspase-3 和PARP蛋白表达,在荧光显微镜下拍照,用QWin 图象分析软件测定Caspase-3 和PARP荧光强度值。结果: 小檗碱剂量依赖性的抑制GLC-82 细胞增殖,半数生长抑制剂量IC50 为19.9 mg·L^-1,上调凋亡促进因子Caspase-3,PARP蛋白表达增加,使GLC-82 细胞呈现典型的凋亡形态学特征,胞核缩小,核质浓集,呈斑块状,有凋亡小体。结论: 小檗碱通过上调Caspase-3 诱导人肺癌GLC-82 细胞凋亡。     

阿霉素诱导小鼠MCF-7 乳腺癌细胞凋亡和抑制增殖的体内实验研究

目的: 探讨阿霉素对荷瘤鼠MCF-7 乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响。方法: 建立小鼠MCF-7 乳腺癌细胞模型, 用TUNEL 法和免疫组化法检测阿霉素作用下MCF-7 乳腺癌细胞的凋亡和PCNA 表达的变化。结果: 1.25 mg·kg^-1 阿霉素的抑瘤率为43 %。MCF-7 乳腺癌细胞的凋亡指数为1.93 %, 较荷瘤对照组的1.11 %明显升高(P <0.05)。增殖指数为35.75 %, 较荷瘤对照组的56.38 %明显下降(P <0.01)。结论: 阿霉素有诱导小鼠MCF-7 乳腺癌细胞凋亡和抑制其增殖的作用。     

眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究

目的: 研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法: 采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和Annexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用Western-blot方法测定聚二磷酸腺苷核糖多聚酸-1(PARP-1)切割。结果: NA-LAAO可抑制MGC-803细胞增殖,6、12、24 h 的IC₅₀分别为(2.48±0.41) 、(1.74±0.27) 和(0.83±0.19) mg/L;NA-LAAO可使细胞DNA分布出现亚二倍体凋亡峰,并可促使细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻;NA-LAAO可激活Caspase-3并可促使其底物PARP-1降解。结论: NA-LAAO可能通过激活Caspase-3这一分子机制而诱导细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖。     

独一味乙醇提取物诱导人黏液表皮样癌MEC-1细胞凋亡的机制研究

目的:探索独一味乙醇提取物（ethanol extract of lamiophlomis rotate,EELR）促进人黏液表皮样癌MEC-1细胞凋亡的作用及其机制。方法: 采用磺酰罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）比色法测定细胞活力、细胞克隆形成实验检测细胞增殖率、Hoechst33258/PI荧光染色以及流式细胞术检测EELR对MEC-1细胞凋亡率的影响,采用蛋白质免疫印迹试验（Western blot）检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果:EELR在一定浓度范围呈时间和剂量依赖性抑制MEC-1细胞增殖,且不同剂量EELR作用于MEC-1细胞48 h后细胞凋亡率有明显差异,Western blot检测表明随EELR作用浓度增加,MEC-1细胞Bcl-2蛋白表达下调,Bax、Casepase-3蛋白表达量升高。 结论:EELR可能通过调节人黏液表皮样癌MEC-1细胞的Bcl-2、Bax、Casepase-3蛋白表达水平进而诱导细胞凋亡。     

丁酸钠诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的信号通路及对AQP3基因表达影响的研究

目的:探讨丁酸钠诱导结肠癌HT-29细胞凋亡过程的分子机理及其对水通道蛋白AQP3基因表达的影响。方法:MTT 法检测不同浓度的丁酸钠对结肠癌HT-29细胞生长的影响;RT-PCR 检测不同浓度的丁酸钠对细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK4、p16和AQP3的基因表达水平, 同时使用流式细胞仪检测细胞周期。结果:加入浓度超过2.5 mmol/L 的丁酸钠后, 结肠癌HT-29细胞生长受到抑制,Cyclin D1、CDK4和AQP3的表达水平下降, p16的表达水平上调, 细胞阻滞于G₁/S 期。结论:浓度超过2.5 mmol/L 的丁酸钠可以诱导结肠癌HT-29细胞凋亡, 使其细胞周期阻滞于G₁/S期, 且这种诱导作用是剂量依赖型的, 其分子通路可能是通过p16-Cyclin D1/CDK4这条信号途径,在此过程中, 伴随着AQP3的基因表达水平降低。     

阿霉素对人乳腺癌细胞凋亡及去磷酸化RB 蛋白表达的影响

目的 探讨阿霉素(ADR) 体外诱导人乳腺癌化疗敏感细胞(MCF-7 S) 凋亡与去磷酸化RB 蛋白表达之间的关系。 方法 应用MTT 比色法检测ADR对体外培养的MCF-7 S 细胞增殖抑制作用, 同时应用末端标记(TUNEL) 法观测ADR 对MCF-7 S 细胞凋亡程度的影响。采用免疫细胞化学法检测去磷酸化RB 蛋白的表达水平。 结果 ADR 抑制MCF-7 S细胞增殖呈剂量依赖性, 半数抑制浓度(IC₅₀) 为0.128 mg·L^-1;ADR 作用组MCF-7 S 细胞的凋亡率(apoptotic rate, AR) 为0.261, 较对照组(0.045) 明显增高(P <0.01);ADR 作用组MCF-7 S 细胞的去磷酸化RB 蛋白表达量MOD(阳性细胞平均光密度) ×area(阳性面积相对比) 均数是987 ±207, 较对照组132 ±32 显著增高(P <0.01);ADR 能促进MCF-7 S细胞内去磷酸化RB 蛋白的表达。在ADR 作用组,MCF-7 S 细胞的凋亡率与去磷酸化RB 蛋白表达量呈正相关(P <0.05)。 结论 ADR 抑制MCF-7 S 细胞增殖和诱导MCF-7 S 细胞凋亡可能与细胞内去磷酸化RB 蛋白表达水平有关。     

黄芪甲苷通过SDF-1/CXCR4信号通路诱导人肾腺癌细胞的凋亡

目的:观察黄芪甲苷对人肾腺癌细胞ACHN增殖、凋亡的作用及其对SDF-1/CXCR4信号通路活化的影响。方法:采用20、60、120 μmol/L黄芪甲苷干预ACHN细胞后,CCK-8分析黄芪甲苷对细胞增殖抑制率的影响,流式细胞仪检测黄芪甲苷对细胞凋亡率的影响,Western Blot方法分析黄芪甲苷对细胞中凋亡相关蛋白Csapase-8、Bax、Bcl-2及SDF-1/CXCR4信号通路相关蛋白表达的影响。结果:黄芪甲苷干预ACHN细胞后,细胞增殖抑制率明显升高,表现出时间和剂量依赖性（P<0.05）;黄芪甲苷干预组ACHN细胞凋亡率也显著升高（P<0.05）;药物处理组中促凋亡蛋白Csapase-8、Bax表达显著升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2及SDF-1、CXCR4蛋白表达水平显著降低,表现出剂量依赖性（P<0.05）。结论:黄芪甲苷抑制人肾腺癌细胞株ACHN增殖、诱导其凋亡的作用机制可能与降低SDF-1/CXCR4信号通路活化相关。     

烟酸姜黄素酯对低剪切应力诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及相关机制

目的: 探讨烟酸姜黄素酯（curcumin nicotinate,CN）对低剪切应力（low shear stress, LSS）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）凋亡的影响及机制研究。方法: 运用平行平板流动腔建立LSS诱导的HUVECs凋亡模型。采用Hoechst33258荧光染色,流式细胞术检测CN对LSS诱导的HUVECs凋亡的影响。Western blot检测CN对LSS诱导的HUVECs中前蛋白转化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9）蛋白表达的影响。结果:Hoechst33258荧光染色结果显示,与静态培养组比较,LSS组（3 dyne/cm2,12 h）内呈现凋亡状态的HUVECs明显增多。与LSS组比较,各CN+LSS组内呈现凋亡状态的HUVECs明显减少,并且呈现浓度依赖性。其中以20 μmol/L CN+LSS组凋亡细胞数最少;流式细胞术结果显示,与静态培养组比较,LSS组HUVECs凋亡率明显增加,差异有显著统计学意义（P<0.01）;与LSS组比较,各CN+LSS组HUVECs凋亡率明显减少,并且呈现浓度依赖性,其中以20 μmol/L CN+LSS组HUVECs凋亡率减少最为明显,差异具有显著统计学意义（P<0.01）。Western blot结果显示与静态培养组比较,LSS组内PCSK9蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01);与LSS组比较,CN+LSS组内PCSK9蛋白表达下降,并且呈现浓度依赖性,差异具有统计学意义（P<0.05）。其中以20 μmol/L CN+LSS组PCSK9蛋白表达下降最为明显(P<0.01)。结论: CN能够抑制LSS诱导的HUVECs凋亡,其作用机制与CN下调LSS处理的HUVECs中PCSK9蛋白表达相关。