3,4,5,6-四羟基口山酮对高糖所致血管内皮依赖性舒张功能减退的保护作用

目的:观察3, 4, 5, 6-四羟基_口山酮对高糖所致血管内皮依赖性舒张功能减退的保护作用。方法:在大鼠离体胸主动脉环, 用高浓度葡萄糖(25mmol°L^-1) 孵育24 h, 检测乙酰胆碱诱导的血管内皮依赖性舒张反应;人脐静脉内皮细胞株(ECV304)用高浓度葡萄糖(30 mmol°L^-1) 培养48 h, 测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 活性、一氧化氮(NO) 及细胞脂质过氧化物丙二醛(MDA) 含量。结果:3, 4, 5, 6-四羟基_口山酮(1、3 和10 μmol°L^-1) 能显著抑制高糖所致的舒血管效应减退, 并且呈剂量依赖性。3, 4, 5,6-四羟基_口山酮(1、3 和10 μmol°L^-1) 能显著抑制高糖所致的内皮细胞LDH 泄漏、NO 释放和MDA 生成的增加。结论:3, 4, 5, 6-四羟基_口山酮对高糖所致的血管内皮依赖性舒张功能减退有保护作用, 其保护作用与抑制脂质过氧化减少血管内皮细胞损伤有关。     

大豆异黄酮活性组分对 H2O2 诱导的 PC12 细胞损伤的影响

目的: 探讨大豆异黄酮活性组分对 H₂O₂ 诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法: 以 H₂O₂ 损伤PC12细胞为氧化应激损伤的模型, 采用光学显微镜观察细胞形态, MTT 法判断细胞的存活率, LDH 法检测细胞的损伤程度。结果: 不同浓度大豆异黄酮能明显改善 H₂O₂ 导致的细胞甲瓒减少, 大豆异黄酮处理组细胞存活率明显高于 H₂O₂ 处理组(P<0.01);而 LDH 漏出率则明显低于H₂O₂ 处理组(P<0.05)。结论: 大豆异黄酮活性组分对 H₂O₂ 诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

姜黄素对过氧化氢诱导的血管内皮细胞损伤的双重作用

目的: 研究姜黄素(Cur) 对过氧化氢(H₂O₂) 诱导的血管内皮细胞ECV304 的作用及可能机制;方法:胎盘兰计数法分组观察在不同的时间点加入姜黄素后对H₂O₂ 诱导的ECV304 细胞氧化损伤的作用。流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率的变化,试剂盒检测一氧化氮(NO) 、丙二醛(MDA) 含量及超歧化物氧化酶(SOD) 、谷胱甘肽还原酶(GR) 活性的变化。结果: 姜黄素0 ~ 100μmol·L^-1 与H₂O₂500μmol·L^-1同时作用5 h,随姜黄素浓度升高细胞存活率升高;25 ~ 100μmol·L^-1姜黄素预先作用1 h,再换为H₂O₂ 500μmol·L^-1作用4 h,细胞存活率明显下降;H₂O₂500μmol·L^-1 作用4 h,再加入25 ~ 100μmol·L^-1姜黄素作用1 h,细胞存活率也升高。姜黄素对H₂O₂ 诱导的细胞凋亡没有明显的影响,但同时作用组、H₂O₂ 先作用组S 期细胞所占比例升高,姜黄素先作用组S 期细胞所占比例下降。同时作用组、H₂O₂ 先作用组的SOD 、NO 、Gr水平相对升高,MDA 水平下降,姜黄素先作用组的SOD 、NO 、Gr水平相对下降,MDA 水平升高。结论: 姜黄素对H₂O₂诱导的血管内皮细胞ECV304 有双重效应,即有保护效应也有细胞毒效应,与其作用时间点有关。     

盐酸埃他卡林对血管内皮细胞分泌功能的影响

目的:研究新型抗高血压药物盐酸埃他卡林(I_pt) 对血管内皮细胞分泌功能的影响。方法:采用灌流消化法分离小牛主动脉内皮细胞(BAEC), 观察I_pt 对BAEC 分泌内皮素-1(ET-1)、前列环素(PGI₂)和一氧化氮(NO) 的影响, 同时观察I_pt 对培养的BAEC 胞浆游离Ca²⁺浓度的影响。结果:在I_pt 浓度为10^-6 mol·L^-1及以上时, 能够剂量依赖性地抑制培养的BAEC 合成分泌ET-1, 并在I_pt 10^-5 mol·L^-1及以上时促进NO 的合成分泌, 同时在I_pt 浓度为10^-4 mol·L^-1及以上时, 显著地增高BAEC 胞浆游离Ca²⁺浓度。结论:I_pt 通过抑制内皮细胞合成分泌ET-1 和促进NO 的合成分泌, 从而使ET 和NO 的平衡状态得到改善;尚能增加内皮细胞[ Ca²⁺] _i, 有利于内皮细胞合成NO 增加, 从而增强内皮介导的舒血管效应。     

As2O3 诱导K562细胞凋亡过程中细胞表面电荷变化的研究

目的:研究三氧化二砷(As₂O₃) 诱导K₅₆₂ 细胞凋亡时细胞表面电荷的变化, 阐明As₂O₃ 诱导K₅₆₂细胞凋亡的可能机制, 为As₂O₃ 在临床上的应用提供理论依据。方法:应用细胞电泳仪检测As₂O₃ 诱导K₅₆₂细胞凋亡中细胞电泳率的变化。通过细胞增殖、活力检测, 形态学观察, 亚G1 期细胞含量和DNA 凝胶电泳等鉴定细胞凋亡。结果:1.0 ～ 20 μmol·L^-1As₂O₃ 作用于K₅₆₂细胞, 在细胞形态、DNA 凝胶电泳、FCM 显示出典型的细胞凋亡特征之前, 试验组细胞表面电荷已在1.6 h 左右开始下降, 6 h 内降低最明显, 6 h 后虽有下降, 但幅度明显减弱。与对照组比较, 低于1.0 μmol·L^-1 的As₂O₃ 对细胞表面电荷影响不大。结论:细胞表面电荷的下降是K₅₆₂ 细胞凋亡的早期事件。细胞表面电荷的下降有一定的时间范围, 超过此范围, 细胞表面电荷下降趋向无限大。     

依那普利对大鼠离体胸主动脉的舒张作用及其机制

目的:观察依那普利对血管的直接作用, 并探讨其机制。方法:采用Powerlab 生物信号采集系统记录依那普利对去甲肾上腺素(NE) 和KCl预收缩的离体大鼠胸主动脉环舒张作用, 观察左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME, 10^-4 mol/L) 和吲哚美辛(10^-8 mol/L) 对其作用的影响。结果:在内皮完整的大鼠离体胸主动脉环, 依那普利(10^-9~10^-4 mol/L) 对NE(10^-5 mol/L) 或KCl (20 mmol/L)引起的收缩具有浓度依赖性的舒张作用。去内皮后, 依那普利的舒血管作用显著减弱。在内皮完整的血管环, L-NAME (10^-4 mol/L) 和吲哚美辛(10^-8 mol/L) 对依那普利的舒血管作用具有明显的抑制作用。结论:依那普利对大鼠离体胸主动脉环具有浓度依赖性的舒张作用, 此作用具有内皮依赖性, 与内皮产生的NO 和前列环素(PGI₂)有关。     

盐酸埃他卡林对H2O2所致PC12细胞损伤的保护

目的: 研究 K_ATP 通道开放剂盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride, Ipt) 对 H₂O₂ 所致 PC12 细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法: 采用培养的PC12细胞, MTT 法测定细胞存活率, HPLC 法测定细胞培养液中谷氨酸(Glu) 的含量, 荧光法测定胞内钙离子([Ca²⁺]_i) 浓度。结果: Ipt 可浓度依赖性的拮抗H₂O₂ 介导的细胞毒性, 提高细胞生存率, 降低胞外Glu的释放以及胞内 Ca²⁺ 浓度。该保护作用可被200 μmol°L^-1 5-HD(线粒体K ATP 通道阻断剂) 部分拮抗。结论: Ipt 可拮抗 H₂O₂ 介导的细胞损伤作用, 该保护作用可能与线粒体ATP 敏感性钾通道相关。     

固相萃取HPLC检测生物样品中甲苯磺丁脲和代谢产物及其人体药代动力学研究

目的: 建立固相萃取高效液相色谱测定人血浆和尿液中的甲苯磺丁脲和代谢产物浓度的方法,并用于研究甲苯磺丁脲人体代谢过程。方法: 固相萃取净化和富集样品,建立高效液相色谱法测定人血清和尿中曱苯磺丁脲和代谢产物的浓度。色谱条件:色谱柱为 Waters Spherisorb 5 μm Phenyl 色谱柱(4.6 mm×250 mm),流动相为甲醇-0.02mmol·L^-1 pH 3.3乙酸钠缓冲液(28:72),流速1 ml·min^-1,检测波长:230 nm。用该方法测定10名健康志愿者单次口服500 mg曱苯磺丁脲后血清和尿液中药物及其代谢产物浓度,应用3p97计算其的药动学参数。结果: 血浆曱苯磺丁脲线性范围为2~lOOμmol·L^-1 (r=0.999),回收率为105.1%~103.9%。尿液羧基曱苯磺丁脲、4-羟基甲苯磺丁脲和甲苯磺丁脲的线性范围为 2~50 μmol·L^-1 (r=0.999)、1~50 μmol·L^-1 (r=0.999)和 1~50 μmol·L^-1 (r=0.999),回收率为 98.8%~100.1%、95.4%~103.5%和97.7%~106.6%。各样品的日内、日间精密度均矣15%。健康志愿者单次口服500 mg甲苯磺丁脲的 AUC_0-∞ 为 2644.6±472.8 μmol·h^-1·L^-1,T_max是 1.4±0.6 h,C_max是235.8±47.3 μmol·L^-1,t_1/2为 6.9±2.1 h,MR_0-24=277.5±125.6。结论: 甲苯磺丁脲及其代谢产物的固相萃取高效液相色谱法灵敏、准确,重复性好,可用于甲笨磺丁脲的体内过程研究。甲苯磺丁脲代谢产物主要经尿液排出。     

血液灌流抢救超大剂量地高辛中毒

目的: 观察1例血液灌流抢救超大剂量( 50mg)地高辛中毒的效果。方法: 使用HA 330 ml 灌流器和YT-160 灌流器, 血管通路为股静脉单针双腔导管。入院后共进行了4 次血液灌流( HP) 治疗。结果: 第1 次HP 前后检测地高辛血药浓度均16 μg·L^-1。第2 次HP 血药浓度9. 22 μg·L^-1。第3 次HP 前血药浓度12. 4 μg·L^-1, HP 后为10. 45 μg·L^-1。第4 次HP 前3. 22 μg·L^-1, HP 后为2. 84 μg·L^-1。结论: 采用间隔一定的时间HP, 多次进行, 可阶梯式降低药物浓度。     

4 种归肝经明目中药对晶状体上皮细胞凋亡相关基因Bcl-2 和Bax 的调控

目的:探讨4 种归肝经明目中药车前子、青葙子、菊花和熟地对实验性氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelial cell, LEC)凋亡相关基因Bcl-2和Bax 的调控。方法:将SD 大鼠双眼随机分成7组:空白对照组、过氧化氢(H₂O₂)组、吡诺克辛(PS)组、车前子组、青葙子组、菊花组和熟地组。无菌操作摘除眼球并在手术显微镜下分离晶状体, 使晶状体孵育在300 μmol·L^-1 H₂O₂ 培养液中复制LEC 凋亡模型, 同时采用4 种归肝经明目中药干预, 置二氧化碳培养箱共同孵育24 h 。取晶状体前囊膜采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2 和Bax 的蛋白表达并进行比较。结果:正常SD 大鼠LEC 中Bcl-2 和Bax 均有表达, Bcl-2 表达较Bax 表达强;H₂O₂组Bcl-2 表达显著下调, Bax 表达显著上调(P <0.01),Bcl-2/Bax 比率下降;与H₂O₂ 组比较, 4 种归肝经明目中药可明显上调Bcl-2 表达, 下调Bax 表达(P <0.01),Bcl-2/Bax 比率上升;PS 与4 种归肝经明目中药的调节作用相似, 但弱于4 种归肝经明目中药的作用(P <0.05)。结论:4 种归肝经明目中药调控凋亡相关基因Bcl-2 和Bax 的表达可能是其抑制LEC 凋亡的分子机制。     

氯苄四氢小檗碱对抗H2O2引起无血清培养的血管内皮细胞凋亡及坏死

目的: 研究氯苄四氢小檗碱对过氧化氢(H₂O₂)引起无血清培养的小牛主动脉血管内皮细胞的凋亡、增殖、坏死的影响。方法: 通过体外细胞培养, 以噻唑兰(MTT) 法测定细胞存活率;用流式细胞术检测细胞DNA 含量及凋亡细胞百分率、增殖率;DNA 琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡过程中DNA 断裂程度。结果: H₂O₂ 诱导无血清培养的内皮细胞凋亡, 氯苄四氢小檗碱可显著降低内皮肌细胞中凋亡细胞百分率, 并抑制其增殖, 也减少凋亡细胞DNA 断裂, 同时也减少其引起的平滑肌细胞坏死。结论: 氯苄四氢小檗碱可对抗H₂O₂ 引起的无血清培养的血管平滑肌细胞凋亡、增殖及坏死。     

DDPH对多种介质所致豚鼠离体肠道平滑肌收缩的影响

目的 研究1-(2, 6-二甲基苯氧基)-2-(3, 4-二甲氧基苯乙氨基)丙烷盐酸盐(DDPH)对多种介质引起的豚鼠离体肠道平滑肌收缩的影响。方法 肠道平滑肌实验法。结果 不同剂量的DDPH 可非竞争性抑制磷酸组胺、氯化乙酰胆碱及Ca²⁺的作用, 使量效曲线非平行右移, 最大反应压低, 其pD₂'值分别为4.0、3.8、3.9。DDPH 还可抑制K⁺所致肠道平滑肌收缩, 但作用较维拉帕米弱, IC₅₀ 值分别为2.7μmol·L^-1 和0.7 μmol·L^-1。结论 DDPH通过非竞争性Ca²⁺拮抗作用使豚鼠回肠平滑肌松弛。     

过氧化氢对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的: 研究过氧化氢(H₂O₂)对单个大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流(Ica,L)的影响。方法: 用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞;用标准的全细胞膜片钳技术记录钙通道电流,观察5mmol·L^-1H₂O₂引起单个大鼠心室肌细胞Ica,L改变。结果: 在5mmol·L^-1H₂O₂作用下,大鼠心室肌细胞Ica,L峰值电流密度从4.89±0.52pApF增加至9.80±0.65pApF(P<0.05,n=10),电流-电压曲线下移,但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变;H₂O₂对Ica,L激活时间常数-电压曲线无明显影响,但可使其灭活时间常数-电压曲线明显向上移;H₂O₂对Ica,L稳态激活曲线无明显改变,但可使其稳态失活曲线明显左移,V0.5从(-26.85±5.3)mV左移至(-37.20±4.5)mV(P<0.05,n=5)。结论: H₂O₂可以增加大鼠心肌细胞Ica,L,且使其失活明显减慢。     

刺五加叶皂苷对心肌ATP 敏感性钾通道的作用

目的: 研究刺五加叶皂苷(ASS) 对心肌线粒体ATP 敏感性钾通道(mito K_ATP) 和细胞膜ATP 敏感性钾通道(sarcol K_ATP) 的作用, 探讨ASS 对缺血心肌保护作用的机制。方法: 用酶解法获取兔心室肌细胞, 激光扫描共聚焦显微镜观察ASS 对mito K_ATP 的作用, 全细胞膜片钳技术观察ASS 对sarcol K_ATP的作用。结果: 对照组观察10 min 线粒体荧光强度无明显变化。ASS 30、100 和300 mg·L^-1组均可见用药后线粒体荧光强度明显增加, 分别增加(14.8±3.6) %、(30.4±4.3) % 和(38.4±5.7) %。3 μmol·L^-1格列本脲不影响线粒体荧光强度, 但可以阻断ASS 对线粒体荧光强度的作用。而对照组、ASS 10、100 和300 μmol·L^-1组的I_K-ATP 峰值无明显差异。结论: ASS 对mito K_ATP 有开放作用, 而对sarcolK_ATP没有作用。ASS 通过开放mito K_ATP 产生心肌保护作用。     

阿魏酸乙酯对过氧化氢损伤人血管内皮细胞的保护作用

目的: 观察阿魏酸乙酯对人血管内皮细胞的保护作用。方法: 实验分对照组、模型组、阿魏酸4个剂量组、阿魏酸乙酯4个剂量组。过氧化氢诱导血管内皮细胞损伤,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞存活数量,用比色法测细胞培养液中过氧化物丙二醛含量及乳酸脱氢酶的活性。结果: 阿魏酸乙酯及阿魏酸不同剂量(2,4,8,16 nmol·L^-1 )对过氧化氢损伤的人血管内皮细胞具有保护作用,可抑制过氧化氢损伤的血管内皮细胞释放乳酸脱氢酶和丙二醛。相同剂量组的阿魏酸乙酯的作用强于阿魏酸。结论: 阿魏酸乙酯具有减轻过氧化氢损伤,保护血管内皮细胞的作用,并且其作用强于阿魏酸。