神经生长因子对新生大鼠脑细胞内游离钙浓度的影响

目的 观察神经生长因子(NGF)对分离的新生大鼠脑细胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i)的影响。方法 以 Fura-2/AM 为细胞内钙离子的荧光指示剂, 测定谷氨酸(Glu)及过氧化氢(H₂O₂)诱导的新生大鼠脑细胞内[Ca²⁺]_i, 观察 NGF 对此影响。 结果 新生大鼠脑细胞内静息 [Ca²⁺]_i 208±22nmol/L, NGF对神经细胞静息 [Ca²⁺] i 无明显影响, NGF 1～ 100μg/L 能剂量依赖地抑制 Glu 和 H₂O₂ 引起的 [Ca²⁺]_i 升高, 其 IC₅₀ 分别为 42.5 和 27.3 μg/L。结论 NGF 通过降低 [Ca²⁺]_i 的水平来保护大脑皮质神经元抗谷氨酸毒性及过氧化氢损伤。     

三七总皂甙对缺血再灌注鼠脑组织 Ca2+ 和兴奋性氨基酸的影响

目的: 探讨 Ca²⁺、 兴奋性氨基酸在缺血再灌注鼠脑损伤中的作用及三七总皂甙对其影响。 方法: 对缺血再灌注鼠脑组织 Ca²⁺、 氨基酸及血清氨基酸分别进行测定, 并观察三七总皂甙对其影响。 结果: 模型组脑组织 Ca²⁺、 脑和血清谷氨酸(Glu)、 天门冬氨酸(Asp)、 甘氨酸(Gly)、 γ-氨基丁酸(GABA)高于正常动物组, 三七总皂甙组低于模型组。结论: Ca²⁺、 氨基酸参予再灌注脑损伤的病理过程, 而三七总皂甙可能通过降低脑内 Ca²⁺、 降低兴奋性氨基酸(EAA) 来保护脑组织。     

利多卡因、异丙酚对缺血再灌注心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶、肌浆网Ca2+-ATP酶活性的影响1

目的 观察利多卡因、异丙酚对缺血再灌注心肌细胞膜Na⁺-K⁺-ATP 酶、肌浆网Ca²⁺-ATP 酶活性的影响。方法 SD 大鼠48 只, 随机均分为6 组。假手术组;生理盐水组;利多卡因5 mg·kg^-1 组;利多卡因10 mg·kg^-1 组;异丙酚300 μg·kg^-1·min^-1组;异丙酚1000 μg·kg^-1·min^-1组。于缺血前5 min, 生理盐水及利多卡因经股静脉注射给药(30 s内注射完);异丙酚持续输注至缺血开始时为止。结扎冠脉左前降支, 造成左室前壁相应心肌组织缺血15 min, 然后松开结扎线再灌注10 min, 应用分光光度法测定心肌细胞膜Na⁺-K⁺-ATP酶、肌浆网Ca²⁺-ATP酶活性。结果 利多卡因可明显地促进肌浆网Ca²⁺-A TP酶活性的恢复(P<0.05), 大剂量时还促进心肌细胞膜Na⁺-K⁺-ATP酶活性的恢复(P<0.05)。异丙酚可显著地促进心肌细胞膜Na⁺-K⁺-ATP 酶活性的恢复(P<0.05, P<0.001), 大剂量时促进肌浆网Ca²⁺-ATP酶活性的恢复(P<0.05)。结论 利多卡因、异丙酚可促进再灌注期间心肌细胞膜Na⁺-K⁺-ATP 和肌浆网Ca²⁺-ATP酶活性的恢复, 从而抑制钙超载而减轻心肌缺血再灌注损伤。     

猪苓多糖对膀胱癌细胞钙离子浓度的影响

目的 观察猪苓多糖对人T24 膀胱癌细胞内钙离子(Ca²⁺) 浓度的影响, 探讨猪苓多糖抗癌机理。方法 体外培养人T24 细胞经钙荧光指示剂(calciumcrimson-AM) 负载后, 用激光扫描共聚焦显微镜测定猪苓多糖作用前后细胞内Ca²⁺随时间的变化。结果 猪苓多糖低剂量(0.2 mg·L^-1) 使T24 细胞内Ca²⁺降低, 高剂量(>1 mg·L^-1) 使T24 细胞内Ca²⁺升高, 最后维持在高钙水平上。猪苓多糖主要促进细胞核内Ca²⁺升高, 细胞浆Ca²⁺无明显改变。结论 猪苓多糖可引起T24 细胞内Ca²⁺水平的显著变化, 而且这种变化主要表现在细胞核内, 提示猪苓多糖可能有诱导细胞凋亡的作用。     

葡萄糖酸镁对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的: 观察葡萄糖酸镁对心肌缺血再灌注损伤的影响, 探讨葡萄糖酸镁心肌保护作用及其机理。方法: 采用改进了的整体大鼠急性心肌缺血再灌注损伤模型, 检测组织内 Na⁺-K⁺ -ATPase 活力及丙二醛(MDA) 和 Ca²⁺ 含量, 并测定由ADP 诱导的血小板5 min 最大聚集率 AGG(M)。结果: 与假手术组相比, 缺血再灌注组心肌组织内 Na⁺ -K⁺ -ATPase 活力显著下降(P<0.01), MDA 和Ca²⁺ 含量明显升高(P<0.01), AGG(M) 升高(P<0.05)。与缺血再灌注组比较, 葡萄糖酸镁 3 个不同剂量保护组心肌组织内Na⁺ -K⁺-ATPase 活力明显升高(P<0.01), MDA和Ca²⁺ 含量明显降低(P<0.05 或 P <0.01), AGG(M) 也明显降低(P<0.01), 且各作用均随用药剂量的增加而更加显著。结论: 葡萄糖酸镁对心肌缺血再灌注损伤有保护作用, 其保护作用机制与增加Na⁺ -K⁺-ATPase 活性 、减轻钙超载和抑制脂质过氧化反应以及血小板聚集有关。     

川芎嗪对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的 观察川芎嗪对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机理。方法 采用大鼠冠脉结扎30 min后再通20 min 造成心肌缺血再灌模型。大鼠随机分对照组、缺血组、模型组(缺血再灌组)和川芎嗪保护组。观测心肌细胞膜和线粒体中过氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH·PX)、Ca²⁺-ATP酶和K⁺, Na⁺-ATP 酶活力, MDA及心肌钙含量。结果 川芎嗪保护组心肌细胞膜SOD、GSH·PX、Ca²⁺-ATP 酶和Na⁺, K⁺-ATP酶活性较缺血再灌组均有显著性升高(P＜0.05 或P ＜0.01), 丙二醛(MDA)和心肌钙含量却呈显著性降低。线粒体中SOD和GSH·PX 活力也呈显著性升高(P ＜0.05), MDA 却为显著性降低。结论 川芎嗪对大鼠缺血再灌注损伤心肌有确切保护作用, 其机理是通过提高对氧自由基的清除及抑制脂质过氧化。     

醋柳黄酮对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的:探讨醋柳总黄酮(TFH) 对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i) 的影响。方法:采用新一代钙荧光探针Fluo-3/AM 检测在高钾、去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素II(Ang Ⅱ) 刺激下单层兔主动脉平滑肌细胞内游离钙水平的改变, 并与传统的钙拮抗剂Verapamil (Ver) 进行对照研究。结果:TFH(100 mg·L^-1) 对静息状态的血管平滑肌细胞[Ca²⁺]_i 无明显影响;TFH(60 ～ 100 mg·L^-1) 呈剂量依赖性抑制高K⁺ 去极化引起的[Ca²⁺]_i 升高, 与Ver 作用相似, 但弱于Ver;TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE、Ang Ⅱ通过受体介导引起[Ca²⁺]_i 升高均具有明显的抑制作用;在无细胞外Ca²⁺存在下, TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE 引起的[Ca²⁺]_i 升高也具有一定程度的抑制效应。结论:醋柳总黄酮通过对电压依赖性钙通道和受体操纵型钙通道双重抑制降低血管平滑肌细胞内游离钙水平, 这可能是醋柳黄酮产生舒血管降压作用机制之一。     

氯胺酮的神经保护作用及其对p38 蛋白磷酸化激活的影响

目的: 研究NMDA 受体拮抗剂氯胺酮对大鼠海马脑片缺糖缺氧(OGD) 损伤的神经保护作用及其对p38 蛋白磷酸化激活的影响。方法: 采用大鼠海马脑片体外OGD 损伤模型, TTC 染色抽提法观察氯胺酮对海马脑片OGD 损伤时的神经保护作用, 免疫印迹法研究“缺血再灌注”不同时间大鼠海马脑片中p38 磷酸化激活变化情况, 以及氯胺酮对p38 磷酸化激活的影响。结果: 氯胺酮显著抑制海马脑片OGD 损伤所致的A 值降低, p38 蛋白在缺血再灌注后磷酸化激活增加, 再灌注15 min 后开始上升, 2 h仍可见持续表达。氯胺酮剂量为5、10 μmol·L^-1时,能显著抑制p38 蛋白磷酸化激活(P <0.05) 。结论: 氯胺酮具有一定的神经保护作用, 其保护作用可能与抑制海马神经元p38 蛋白的磷酸化激活有关。     

化学性缺氧致大鼠脑细胞[Ca2+]i和脑红蛋白表达变化及阿司匹林干预研究

目的: 观察化学性缺氧状况下大鼠脑细胞[Ca²⁺]_i和脑红蛋白(NGB)表达的变化及阿司匹林(ASA)对其变化的干预,并初步探讨其作用机制。方法: 连二亚硫酸钠致原代培养大鼠脑细胞缺氧,用荧光探针Flou-3负载和NGB荧光免疫组化技术双标,激光共聚焦显微镜动态观察。结果: [Ca²⁺]_i和NGB表达与缺氧持续时间有关,随缺氧时间的延长,荧光强度随之增高;经ASA预防性干预,两种荧光强度增高缓慢,其增高程度明显低于单纯缺氧组;治疗性干预,用药早期两种荧光强度增高明显,其增高程度与单纯缺氧组变化相近,后期则增高缓慢,其增高程度明显低于单纯缺氧组。[Ca²⁺]_i浓度和NGB表达呈正相关。结论: ASA对原代培养大鼠脑细胞化学性缺氧损伤具有保护作用,其作用可能与ASA抑制细胞内Ca²⁺超载有关;NGB的表达可能是受到Ca²⁺-CaM复合物的调节;ASA预防性用药的早期保护作用明显优于治疗性用药。     

萘哌地尔衍生物(BWYJ)对血管平滑肌细胞游离钙浓度的影响

目的: 观察萘哌地尔衍生物(BWYJ) 对家兔血管平滑肌细胞游离钙浓度的影响, 对其血管活性进行机理探讨, 进一步明确其作用机制。方法: 采用钙荧光指示剂Fura-2 /AM 负载的培养家兔胸主动脉平滑肌细胞, 观察该药对NA 、5-HT 和高钾所致的[Ca²⁺] _i 的升高的影响。结果: Fura-2 /AM 负载血管平滑肌细胞的实验中, 静息时各浓度的BWYJ 对[Ca²⁺]_i 无明显影响, 但其对NA 和5-HT 所引起的血管平滑肌[Ca²⁺] _i 增加均有明显的抑制作用, 而不影响高钾所致血管平滑肌[Ca²⁺] _i 的增加。结论: BWYJ 通过阻断细胞膜上的α₁ 受体或5-HT₂A 受体,抑制这些受体中介的钙内流, 从而抑制细胞内Ca²⁺的释放, 使血管平滑肌[Ca²⁺] _i 降低。     

三七总皂甙对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的 研究三七总皂甙(PNS)对大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法 阻断大鼠大 脑中脉造成可逆性脑缺血模型,观察PNS对缺血脑组织的保护作用。结果 PNS 20、40 mg·kg^-1·d^-1x10d能显著改善大鼠MCAO后的神经功能障碍,缩小脑梗塞面积,减轻脑水肿,并能降低缺血脑组织的总钙含量,明显提高SOD活力,降低MDA含量。结论 PNS对局灶性缺血脑组织具有保护作用,其机理推测与降低脑组织钙含量及抗氧自由基损伤有关。     

果糖二磷酸钠镁对缺血突触体乳酸含量及ATP酶活性的影响

目的 研究果糖二磷酸钠镁(FDPM)对缺血突触体乳酸含量及ATP 酶活性的影响,以探讨其脑保护作用机制。方法 制备正常大鼠脑突触体,氧糖剥夺培养建立缺血突触体模型,分别加1.3 mmol·L^-1硫酸镁,4.0 mmol·L^-11,6-二磷酸果糖(FDP)及1.3mmol·L^-1 果糖二磷酸钠镁共培养60 min,测定突触体乳酸含量及Na⁺-K⁺ATP 酶和Ca²⁺-Mg²⁺ATP 酶活性。结果 FDPM 可明显降低缺血突触体乳酸含量,升高Na⁺-K⁺ATP 酶和Ca²⁺-Mg²⁺ATP 酶活性(P <0.05),其作用强于FDP 的作用。结论 FDPM保护脑缺血的作用机制可能与其改善脑缺血后能量代谢,减轻脑组织酸中毒状态有关。     

小檗碱对局灶性脑缺血大鼠原癌基因c-fos 表达的影响

目的 研究大鼠局灶性脑缺血过程中c-fos mRNA 表达的动态变化, 并观察小檗碱(Ber)对其作用。方法 运用斑点杂交技术, 观察Ber 对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质及海马组织c-fos mRNA 表达的影响。结果 大鼠局灶性脑缺血2 h 再灌注0.5～4 h, 脑皮质及海马组织c-fos mRNA 出现一过性高表达, 2 h 达高峰, 分别为对照组的4.5 和4.7 倍。Ber 20 mg/(kg·d)ip 显著抑制大鼠脑缺血诱导的c-fos 高表达, 降低病灶侧海马和皮层组织水、钙含量。结论 脑缺血过程中c-fos 原癌基因呈现一过性高表达, Ber 可降低c-fos mRNA 水平, 该作用可能是其抗脑缺血机理之一。     

黄体酮防治大鼠缺血再灌注脑损伤中神经功能缺失及细胞凋亡

目的: 探讨黄体酮(progesterone, PROG) 对脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法: 采用SD 大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(transient middle cerebral artery occlusion,MCAO) 。将大鼠随机分为6 组:假手术组、ischmia/reperfusion (I/R) 组、溶剂(二甲基亚砜dimethyl sulfoxide, DMSO) 对照组、PROG 预防组、PROG 治疗组、PROG 预防并治疗组, 对各组动物脑缺血/再灌注后神经功能缺陷进行计分, 并应用细胞死亡原位末端标记(insitu end labeling, ISEL) 法研究脑组织细胞凋亡情况。结果: (1) 缺血2 h 再灌注24 h 后神经功能缺陷计分:假手术组为0 分, I R 组为1. 38±0. 92, DMSO 组为1. 0±0. 53, 预防组为0. 35±0. 51, 治疗组为0. 62±0. 52, 防治组为0. 25±0. 46 。(2) 高倍视野下凋亡细胞数:假手术组为1. 88±0. 25, I R 组为41. 38±3. 85, DMSO 组为38. 13±5. 69, 预防组为22. 88±2. 70, 治疗组为25. 63±2. 93, 防治组为20. 88±2. 30 。以上指标各药物处理组(预防组、治疗组及防治组) 与I R 组、DMSO 对照组之间差异具有统计学意义(P<0. 05) 。结论: PROG 可减少局灶性缺血再灌注脑损伤动物模型神经功能缺失的发生, 减轻局灶性缺血再灌流脑损伤, 减少大鼠缺血再灌注后脑细胞凋亡。