缬沙坦对自发性高血压大鼠肾脏核因子-κB 蛋白表达的影响

目的:探讨自发性高血压大鼠(SHR) 肾组织NF-κB 原位表达变化以及AT₁ 受体阻断剂缬沙坦对其的影响。方法:16 只SHR 随机分成SHR组和SHR 加缬沙坦药物干预组(1 mg°kg^-1°d^-1),另8 只WKY 大鼠为正常对照组。分别在实验第2、4、6、8 周末测定大鼠尾动脉收缩压(SBP);实验结束取各组大鼠血浆测定血浆中肾素、血管紧张素II(AngII) 水平;取出各组大鼠两侧肾脏组织, 分别运用免疫组化原位测定肾组织中NF-κB 蛋白表达, 并进行半定量分析。结果:SHR 组SBP 和血浆中肾素活性以及AngII 水平与WKY 大鼠相比显著增高, 缬沙坦治疗组SBP 显著降低, 但血浆中肾素活性以及AngII 水平明显高于SHR 组和WKY 组。在蛋白水平,WKY 组大鼠肾组织中NF-κB 表达较低, SHR 组肾小球和肾小管中NF-κB 高度表达;使用缬沙坦干预后, NF-κB 表达显著降低。结论:在蛋白水平对NF-κB 表达的调控可能参与缬沙坦的降血压效应和肾保护作用。     

班布特罗对哮喘豚鼠淋巴细胞核因子-κB 表达的影响

目的:探讨β2-受体激动剂班布特罗(bambuterol)对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF) 淋巴细胞核因子-κB (NF-κB) 表达的影响。方法:用卵白蛋白(ovalbumin, OA) 建立豚鼠哮喘模型, BALF 分离淋巴细胞, 采用免疫组化染色方法观察淋巴细胞NF-κB 表达, 酶联免疫吸附(ELISA) 法测定淋巴细胞胞浆IκB 含量及BALF 中白细胞介素-10(IL-10) 水平。结果:与模型组相比, 班布特罗可显著增加BALF 中IL-10 水平及淋巴细胞胞浆IκB 含量(P <0.05), 降低NF-κB 胞核阳性细胞百分比(P <0.05), 而且这一作用可被β2-受体阻断剂普奈洛尔拮抗;但IκB 含量及IL-10 水平仍低于正常对照组(P <0.05), NF-κB 胞核阳性细胞百分比仍高于正常对照组(P <0.05) 。Pearson 相关分析显示NF-κB 与IL-10 之间呈明显负相关关系(r =-0.570, P <0.01) 。结论:班布特罗通过抑制IκB 降解和增加IL-10 水平, 从而抑制淋巴细胞NF-κB 表达, 这可能是其抑制哮喘气道慢性炎症的机制之一。     

胎盘组织核因子-κB与妊娠并发症关系研究进展

核因子-κB（NF-κB）是一种细胞内重要的转录因子,调控包括炎症、凋亡在内多种基因的表达,在胎盘中分布广泛。本文对胎盘组织中NF-κB与先兆子痫、HELLP综合征和胎膜早破等妊娠并发症的关系研究进行综述,概括了胎盘NF-κB在这些妊娠并发症发生过程中的作用以及依赖NF-κB途径治疗相关疾病的研究进展,为胎盘相关疾病的深入研究奠定基础,为妊娠并发症疾病的诊治提供新思路。     

核因子-κB在凝血酶促自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 研究凝血酶诱导培养的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)的增殖作用,探讨其引起VSMCs增殖与NF-κB途径的关系及可能机制。方法: 以0.01、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 Um/L的凝血酶与培养的VSMCs共孵育24h和用0.5 Um/L凝血酶与VSMCs分别孵育1、2、6、12、24、48h;采用WST-1代谢活性和3H-TdR掺入率测定VSMCs细胞增殖率;免疫荧光法和蛋白质印迹技术检测基础状态下和0.5 Um/L凝血酶干预的VSMCs中NF-κB的细胞内定位及其核中NF-κB的蛋白含量;以已知的AngⅡ和PDGF对VSMCs的增殖作用为阳性对照,研究NF-κB途径与凝血酶诱导的VSMCs增殖关系,100 μmol/L PDTC(NF-κB特异性阻断剂)预处理后检测凝血酶引起VSMCs的增殖率。结果: 浓度为0.2～2.0 Um/L的凝血酶对VSMCs分别有明显的促增殖作用(P<0.05和P<0.01);但浓度为0.5～2.0 Um/L的凝血酶作用24h对VSMCs的促增殖作用差异无统计学意义(P>0.05)。0.5 Um/L凝血酶促VSMCs的增殖呈双峰样改变,1h和24h分别达峰值。基础状态下VSMCs的NF-κB主要分布于细胞浆,凝血酶干预后VSMCs的NF-κB主要分布于细胞核。PDTC预处理明显抑制凝血酶促VSMCs增殖的作用(P<0.01)。结论: 浓度0.2～0.5 Um/L范围内的凝血酶呈浓度依赖性方式促进培养SHR的VSMCs增殖;而且在时间上呈双峰样改变,提示凝血酶的促增殖作用存在延迟现象。凝血酶能够激活VSMCs的NF-κB,使其从细胞浆转位至细胞核。凝血酶引起VSMCs增殖与NF-κB途径有关联,NF-κB可能是VSMC增殖的细胞内信号转导的共同通路。     

染料木黄酮对哮喘患者核因子-κB 表达和肿瘤坏死因子-α分泌的影响

目的: 探讨染料木黄酮对支气管哮喘患者外周血单个核细胞(PBMCs) 核因子-κB(NF-κB) 表达及肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 分泌的作用。方法: 32 例支气管哮喘急性发作期患者及31 例健康对照者的PBMCs, 均分空白对照、地塞米松和染料木黄酮3 组进行研究。NF-κB 表达由免疫组化染色检测, TNF-α含量由放射免疫法测定。结果: 哮喘患者PBMCsNF-κB 胞核染色阳性率及培养上清TNF-α含量明显高于健康对照者(P<0. 01), 且二者呈显著正相关(P<0. 01) 。染料木黄酮抑制哮喘组NF-κB 高表达及TNF-α高分泌, 与哮喘空白对照组比较二者均有统计学意义(P<0. 01), 但其抑制作用弱于地塞米松, 且哮喘染料木黄酮组PBMCs NF-κB 胞核染色阳性率与TNF-α含量呈显著正相关(P<0. 01) 。结论: 哮喘患者NF-κB 表达增高, TNF-α分泌增多。染料木黄酮可抑制哮喘患者PBMCs NF-κB 的高表达及TNF-α的高分泌, 对哮喘可能有潜在的治疗作用。     

参附注射液对大鼠急性缺血/再灌注损伤心肌核转录因子-κB 的影响

目的:探讨参附注射液保护大鼠心肌缺血/再灌注损伤作用与机理。方法:采用大鼠心脏左冠状动脉前降支缺血/再灌注模型, 缺血30 min, 再灌注60 min。24 只SD 大鼠随机分为3 组:假手术组;缺血/再灌注组;参附注射液组。酶联免疫吸附实验法检测血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6) 浓度, 免疫印记法测心肌核转录因子-κB(NF-κB) 活性水平, 电镜观察心肌超微结构。结果:缺血再灌注组心肌NF-κB 的活性, 血浆TNF-a、IL-6 浓度较假手术组明显上升(P<0.01)。参附注射液组中上述指标与缺血/再灌注组比较均显著下降(P<0.01), 电镜下参附注射液组中心肌超微结构较缺血再灌注组明显减轻并接近正常。结论:参附注射液通过抑制缺血心肌中NF-κB 的活性, 降低促炎因子水平, 对心肌起保护作用。     

白藜芦醇对去卵巢大鼠股骨骨保护素及核因子κB 受体活化子配体表达的影响

目的 观察白藜芦醇对去卵巢大鼠股骨骨保护素(OPG) 及核因子κB 受体活化子配体(RANKL) 表达的影响。 方法 健康3 月龄雌性SD大鼠48 只, 按体重随机分为6 组:假手术组(SHAM) 、单纯卵巢切除组(OVX) 、17β-雌二醇组(ERT, 0.1 mg·kg^-1 d^-1) 。低、中、高剂量白藜芦醇组(RL 、RM、RH, 每天分别给予10 、20 、40 mg kg白藜芦醇) 。除假手术组外其余各组均切除双侧卵巢。术后1周开始给药, 给药8 周后处死所有大鼠, 测定股骨骨密度(BMD) 及骨生物力学性能:弹性模量(ELASTIC) 、刚度(STIFFNESS) 、最大应力(M-STRESS) 及最大承载力(M-LORD) 。用免疫组织化学染色方法观察股骨OPG 、RANKL 的表达。 结果 与OVX 组比较, 20 、40 mg·kg^-1 d^-1白藜芦醇均能上调股骨OPG 表达(P <0.05) 。与OVX组比较, 20 、40 mg·kg-1·d-1 白藜芦醇均下调RANKL 的表达, 改善股骨骨密度及生物力学性能(P <0.05) 。 结论 白藜芦醇在体内可上调骨组织中OPG 的表达, 下调RANKL 的表达, 这可能是其改善股骨骨密度及生物力学性能的作用机制。     

参附对大鼠肾缺血再灌注损伤NF-κB、细胞黏附分子-1、TNF-α表达的影响

目的:观察参附注射液(shenfu injection, SF)对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞黏附分子-1(ICAM-1)、NF-κB、TNF-α表达的影响。方法:采用切除右肾, 无创动脉夹夹闭左肾动脉45 min, 再灌注2 h制作在体肾缺血再灌注损伤模型。36 只SD 大鼠随机分为缺血再灌注组、假手术对照组、参附预处理组(10 mL/kg), 每组12 只。免疫组化法检测肾组织中NF-κB、ICAM-1 蛋白含量, 酶联免疫吸附实验(ELISA) 检测血清、肾组织中TNF-α的表达。结果:缺血再灌注组NF-κB、ICAM-1 表达和TNF-α含量明显高于假手术对照组(P<0.01) 。与缺血再灌注组相比, 参附预处理组NF-κB、ICAM-1 表达和TNF-α含量明显降低(P<0.01) 。结论:参附通过抑制NF-κB 的表达, 从而下调其下游的TNF-α、ICAM-1 的表达, 发挥其肾脏保护作用。     

槲寄生通过抑制NF-κB活性来诱导人大肠癌HCT116细胞凋亡

目的:探讨槲寄生诱导人大肠癌HCT116细胞凋亡所涉及的信号转导途径。方法:采用MTT法测定细胞的增殖活力,琼脂糖凝胶电泳观察细胞调亡,流式细胞仪进行细胞周期分析,Westernblotting和DIG-EMSA研究细胞调亡途径。结果:槲寄生对HCT116细胞有明显的生长抑制作用,琼脂糖凝胶电泳检测到典型的DNA梯状条带;槲寄生可通过抑制IκBα蛋白磷酸化进而抑制NF-κB;槲寄生可增强羟基喜树碱对HCT116细胞诱导的凋亡作用。结论:槲寄生对HCT116细胞有明显的生长抑制和诱导调亡作用,并且通过抑制NF-κB活性来诱导人大肠癌HCT116细胞凋亡。     

帕罗西汀对心理应激大鼠下丘脑室旁核c-fos 表达的影响

目的:观察帕罗西汀对心理应激大鼠下丘脑c-fos 表达的影响, 以揭示帕罗西汀治疗心理应激引起焦虑的分子作用机制。方法:建立大鼠心理应激模型, 观察抗焦虑药物帕罗西汀用药组大鼠血浆皮质醇和下丘脑c-fos 的表达。结果:与正常对照组比较, 各应激组大鼠血浆皮质醇含量明显升高, 下丘脑室旁核c-fos 表达显著增加, 而帕罗西汀单次、连续给药能减少应激大鼠血浆皮质醇含量和下丘脑室旁核c-fos 表达。结论:帕罗西汀通过抑制c-fos 基因表达, 下调下丘脑垂体肾上腺轴(HPA 轴) 水平, 从而发挥中枢应激调节作用。     

核因子-κB在气道上皮细胞的激活及N-乙酰半胱氨酸的影响

目的 探讨在人气道上皮细胞核因子-κB(NF-κB)的激活情况及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对NF-κB的作用机理。方法 应用炎前性细胞因子TNF-α刺激正常人气道上皮细胞株(16HBE)和肿瘤病人气道上皮细胞株(H292),利用Western-Blot免疫印迹电泳和ELISA实验检测NF-κB 的表达和IL-8的分泌水平。结果 TNF-α在体外能刺激激活人气道上皮细胞16HBE和H292的NF-κB表达,刺激后2~4h最高,6h后有所下降。随着TNF-α刺激量的增加,NF-κB活性也随之升高。TNF-α刺激气道上皮细胞后IL-8的分泌水平增加。加入NAC后可抑制NF-κB激活,IL-8分泌水平随之降低;同时发现NAC能以一种剂量依赖方式发挥作用。结论 NAC可通过阻断NF-κB激活的信号转导,参与细胞因子和炎症介质表达的转录调控,在呼吸系气道炎症控制中起着一定的作用。     

N-乙酰半胱氨酸对急慢性吸烟大鼠肺组织和肺泡灌洗液中核因子-κB表达的影响

目的 探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC) 对急慢性吸烟大鼠肺组织和肺泡灌洗液(BALF) 中核因子-κB (NF-κB) 表达的影响及机理。方法 将Wistar 大鼠随机分成:对照组6 只, 吸烟组30只, 干预(吸烟+NAC) 组30 只。其中吸烟组和干预组中动物均动态观察1、2、7、14、60 d (各时间点6 只) 的肺组织和BALF 细胞中NF-κB 的激活水平。运用Western-Blot 免疫印迹电泳法, 以抗NF-κB 抗体P50、P65 作探针检测NF-κB 蛋白的表达量。结果 急慢性吸烟大鼠肺组织和BALF 细胞中NF-κB 的表达以急性吸烟早期d 1、2 达最高,肺组织在d 1、2 的NF-κB 活性分别为36.9 ±8.1和36.9 ±8.0, 与对照组7.3 ±2.8比较, 均有显著性的差异(P <0.01); 在d 1、2, BALF 细胞的NF-κB 活性分别为24.0 ±6.1和21.2 ±5.8, 与对照组5.7 ±2.6比较, 也均有显著性的差异(P <0.01)。但吸烟7 d,NF-κB 的表达已有下降, 并发现从急性吸烟7、14 d至慢性吸烟60 d, NF-κB 维持在比较稳定的低水平表达, 与对照组相比均无显著差异(P >0.05)。NAC 对被激活的NF-κB 有明显的抑制作用, 与各自吸烟组相比P <0.01, 而对低水平NF-κB 表达的抑制作用不明显。结论 NAC 通过抑制急性吸烟早期被激活的NF-κB, 阻断炎前性细胞因子的启动, 可能在气道炎症防治中起着一定的作用。     

黄芩苷对动脉粥样硬化家兔的保护作用及其机制

目的:探讨黄芩苷对动脉粥样硬化(AS) 家兔的保护作用及可能机制。方法:新西兰白兔30只, 随机分为正常组、模型组、黄芩苷治疗组(300 mg/kg) 、黄芩苷预防组(100 mg/kg) 、阳性药(辛伐他汀) 对照组, 每组6 只。酶法测定各组血清及肝脏中TC 、TG 、低密度脂蛋白(LDL) 、高密度脂蛋白含量, 主动脉苏丹Ⅳ染色测AS 斑块面积/总面积, HE 染色观察主动脉及肝脏形态学改变。ELASA 方法测血清中肿瘤坏死因子(TNF-α) 、白细胞介素-1β(IL-1β) 、脂联素(Adiponectin) 的水平。免疫组化法检测主动脉弓处的NF-κB 的表达。结果:黄芩苷治疗组、黄芩苷预防组、阳性药对照组主动脉粥样硬化斑块面积小于模型组(P <0.01), 黄芩苷治疗组、黄芩苷预防组、阳性药对照组血清及肝脏中TC 、LDL 水平较模型组明显降低(P <0.01), 黄芩苷治疗组、黄芩苷预防组血清中TNF-α、IL-1β 和脂联素水平较模型组明显降低(P<0.01, P <0.05), 黄芩苷治疗组、黄芩苷预防组主动脉壁上NF-κB 的表达低于模型组(P <0.01) 。结论:黄芩苷通过升高脂联素、下调NF-κB 抑制炎症反应及调节血脂两个方面对AS 起保护作用, 这可能是其抑制AS 的形成及发展的重要机制之一。     

核转录因子κB 活化途径干预对肝细胞癌变的影响

肝癌发生是一多中心、多病因、多阶段的发展过程。本文对NF-κB 活化途径干预与肝细胞癌变关系的研究进展进行简单的综述。NF-κB 的过度表达参与了肝癌的发生、发展。NF-κB 表达的进行性增加, 可反映肝细胞的早期癌变。而抑制NF-κB 的活性可干预肝细胞恶性转化过程, 可能成为肝癌治疗的新方向。     

大鼠急性肠炎早期核因子-κB 活化以及吡咯烷二硫氨基甲酸的抗炎作用

目的: 探讨NF-κB 在三硝基苯磺酸(TNBS) 乙醇所致的大鼠结肠炎的早期活化情况;吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC) 在该模型中的抗炎作用。方法: TNBS 乙醇灌肠建立大鼠急性结肠炎的模型, 造模前30 min 经腹腔分别注射不同剂量的PDTC(10, 25,50, 100 mg·kg^-1), 设立空白对照, 模型对照组。造模后4 h 处死大鼠, 观察结肠大体形态、湿干比及组织学改变, EMSA 法测定NF-κB 的DNA 结合活性, 并检测组织中MPO 、SOD 、MDA 变化。结果: TNBS 乙醇造模后大鼠结肠组织中NF-κB 早期活化, PDTC 能减轻TNBS 乙醇所致炎症, 湿干比下降, 组织学评分减少, MPO, MDA 值下降, 与所用剂量正相关, 但上述作用不通过阻断NF-κB 途径。结论: NF-κB 在TNBS乙醇结肠炎早期迅速活化, 可能是机体一种早期抗损伤的自我防御事件, PDTC 能够在早期减轻TNBS乙醇性结肠炎。     

灵菌红素抗癌细胞浸润转移作用及对MMPs 活性的影响

目的: 研究灵菌红素在体外对癌细胞浸润、转移的抑制作用, 并探讨其分子机理。方法: 用创伤试验测定高转移性人肺腺癌细胞95-D 的运动能力, 用浸润杯试验法研究细胞的浸润能力, 用明胶酶谱分析法观察细胞分泌基质金属蛋白酶2 和9(MMP-2,-9) 的能力, 通过Western-blot 印迹法, 定量分析细胞质内NF-κB 的蛋白量, 用高效液相色谱(HPLC) 检测细胞内的药物浓度。结果: 在非细胞毒作用的浓度范围, 2. 5 μmol·L^-1 灵菌红素作用于肿瘤细胞12 h后, 抑制癌细胞的运动能力达42 %, 同时, 显著抑制癌细胞的浸润转移(EC₅₀=5 μmol·L^-1) 。灵菌红素可明显抑制肿瘤细胞MMP-2, 9 的分泌, 增加肿瘤细胞质内NF-κB 蛋白量, 抑制胞内NF-κB 蛋白的活化。灵菌红素能有效通过细胞膜, 其药效学作用与细胞内药物浓度相关。结论: 灵菌红素能有效地进入细胞内, 通过调节肿瘤细胞内NF-κB 蛋白活性来抑制MMP-2,-9 的表达, 从而抑制癌细胞的浸润转移。     

焊接热输入对核级B508-Ⅲ低合金钢焊丝熔敷金属低温韧性的影响

采用自动脉冲热丝TIG焊接技术,对自主研发的B508-Ⅲ低合金钢焊材进行性能验证,选定4种热输入进行熔敷金属试验,使用光学显微镜(OM)、扫描电子显微镜(SEM)、透射电镜(TEM)以及电子背散射衍射技术(EBSD)等分析手段研究熔敷金属显微组织以及力学性能在不同热输入下的变化规律。结果发现,焊缝组织为均匀细小的针状铁素体和板条贝氏体,组织晶粒细小且分布均匀;随着热输入增大,大尺寸夹杂物增多,夹杂物面积比有所升高。熔敷金属强度随热输入增大呈下降趋势,塑性随之升高,低温冲击吸收能量最高为310 J,低温冲击断口微观形貌主要是韧窝+准解理。焊缝金属中AF的含量以及大角度晶界的比例随热输入的增大均呈先升高后降低的趋势,与熔敷金属低温韧性随热输入的变化规律基本吻合。     

大鼠核因子-κB 反义 RNA 腺病毒载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的: 构建表达大鼠核因子 κB(NF-κB, p65)反义 RNA 的重组腺病毒, 并测定受染血管平滑肌细胞(VSMCs) 中 NF-κB 基因的表达变化。方法: 从自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat, SHR)的VSMCs 中提取总 RNA, 经 RT-PCR 方法获得含全部编码序列的NF-κB (p65) cDNA 片段(1 653 bp), 用TA 克隆技术插入 pMD18-T 载体, 构建 pMD18-T/1653 重组质粒, 并经酶切和 DNA 测序鉴定。以该质粒为模板, 经 PCR 获得 NF-κB(p65) 3' 端 269 bp 片段, 逆向插入 pcDNA3.1(+) 真核表达载体并置于CMV 启动子下。由此构建的 pcDNA3.1(+)/269 质粒含有NF-κB(p65) 的269 bp反义RNA 完整表达框。随后将该表达框克隆到入门载体 pENTR4, 构建重组质粒 pENTR4/CMV/269。使用同源重组方式在体外将该表达框重组到腺病毒载体 pAd/PL-DEST, 最终得到重组腺病毒质粒 pAd/CMV/269。线性化的重组腺病毒质粒转染 293细胞后产生的重组腺病毒颗粒用于VSMCs 的感染。Western Blot 测定感染前后VSMCs 中NF-κB(p65) 表达的变化情况。结果: 构建的pMD18-T/1653 重组质粒经过序列测定, 证实其包含大鼠NF-κB(p65) 基因的 1653 bp 片断;pcDNA3.1(+) /269、pENTR4/CMV/269、pAd/CMV/269 等重组质粒经内切酶消化或 PCR等方法鉴定无误;线性化的 pAd/CMV/269 转染 293 细胞后, 可产生完整 、具有感染性的重组腺病毒颗粒, 病毒在感染上清中的滴度 为 9.23 ×10⁹ pfu°ml^-1 (plaque form units permilliliter);Western Blot 检测证实, 感染重组腺病毒的VSMCs中的NF-κB(p65) 蛋白水平明显减少。结论: 构建了可表达大鼠 NF-κB (p65) 反义 RNA 的重组腺病毒 Ad/CMV/269, 该病毒在受染的 VSMCs 内具有下调 NF-κB (p65) 基因表达的生物学功能, 为后续的基因治疗研究奠定基础。     

NF-κB/mTOR双信号通路的交联及其对肿瘤生物学特性的影响

肿瘤的发生发展涉及多个细胞信号传导通路,其中核因子-κB(Nuclear factor-kappaB,NF-κB)通路和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)通路尤为重要,已成为研究肿瘤药物治疗的新靶点。进一步探讨两信号通路间存在的交联(Cross-talk)及其对肿瘤生物学特性的影响,有助于更好地调控肿瘤细胞的恶性行为。     

抗焦虑药物对束缚应激大鼠作用的分子机制探索

目的: 为了探讨抗焦虑药物治疗焦虑症状的分子作用机制。方法: 建立大鼠束缚应激模型, 观察抗焦虑药物帕罗西汀用药组大鼠的旷场行为和下丘脑c-fos 的表达。结果: 与正常对照组比较, 应激大鼠在旷场中的穿行格数和直立次数明显增加, 下丘脑室旁核c-fos 表达显著增加, 而帕罗西汀用药组能减少大鼠在旷场中的活动和下丘脑室旁核c-fos 表达。结论: 帕罗西汀对束缚应激大鼠脑保护作用可能与下调c-fos 基因表达有关。