血管紧张素-(1-7) 对血管紧张素II致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究

目的:观察血管紧张素-(1-7) [Ang-(1-7)] 对血管紧张素II(Ang II) 致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养的HUVECs随机分为4 组:对照组, AngII 组, Ang-(1-7) 组, AngII+Ang-(1-7) 组。采用分光光度计测定培养的HUVECs乳酸脱氢酶(LDH) 漏出;流式细胞仪检测细胞凋亡;硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定HUVECs 上清液中一氧化氮(NO) 和内皮素-1(ET-1)的含量。结果:与对照组比较,Ang II(0.1 μmol°L^-1)显著增加HUVECs LDH 漏出(P<0.01)、ET-1 分泌(P<0.01) 和HUVECs 凋亡率(P<0.01), 显著减少NO 的含量(P<0.05);Ang-(1-7) 呈剂量依赖性抑制了Ang II 的促LDH 漏出、ET-1 分泌、增加细胞凋亡等作用, 同时明显促进HUVECs 的NO 释放;单用Ang-(1-7) 对HUVECs 无明显影响。结论:Ang-(1-7)可抑制Ang II 所致的体外培养HUVECs 损伤, 对内皮细胞具有保护作用。     

生存素反义寡核苷酸诱导HL-60 细胞凋亡的实验研究

目的: 探讨特异性靶向生存素的反义寡核苷酸(ASODN) 对急性早幼粒细胞系HL-60 细胞凋亡的影响。方法: 应用四唑盐(MTT) 比色法分析细胞增殖;倒置显微镜观察细胞形态学变化;原位末端标记(TUNEL) 法检测细胞凋亡指数(AI);流式细胞术(FCM) 定量检测细胞凋亡;RT-PCR 半定量检测生存素mRNA 的表达。结果: 5～20 μmol·L^-1生存素ASODN 对HL-60 细胞增殖均有抑制作用, 且呈时间和剂量依赖性。ASODN 组凋亡率和生存素基因表达抑制率明显高于对照组。结论: 生存素ASODN 能有效抑制HL-60 细胞生存素mRNA 的表达并诱导细胞凋亡, 表明生存素对维持肿瘤细胞的增殖具有非常重要的作用。     

白英提取物诱导人肝癌BEL-7404 细胞凋亡作用

目的 探讨中药白英提取物对肝癌BEL-7404 细胞系的凋亡作用。方法 用不同浓度的白英提取物处理肝癌BEL-7404 细胞, 通过观察细胞形态、DNA凝胶电泳法研究白英提取物诱导肝癌BEL-7404 细胞产生凋亡现象。结果 光学显微镜下可见细胞呈凋亡特征性变化, 凝胶电泳可见细胞DNA 有规律断裂形成梯形图谱。结论 白英可诱导肝癌BEL-7404 细胞产生凋亡。     

地塞米松对顺铂诱导的HepG2细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响

目的: 探讨地塞米松对顺铂诱导HepG2细胞凋亡的影响,并观察Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。方法: HepG2细胞与顺铂及不同浓度的地塞米松共培养,RT-PCR检测Bcl-2、Caspase-3的mRNA表达,Western blot检测Bcl-2、Caspase-3蛋白表达,流式细胞术(FACS)检测各组HepG2细胞的凋亡情况。结果: 随着地塞米松浓度的增加,HepG2细胞中Bcl-2蛋白表达量升高,Caspase-3蛋白表达量下降。同时细胞凋亡率降低。结论: 地塞米松部分通过Bcl-2途径抑制肝癌细胞的凋亡,而Caspase-3又在调控细胞凋亡中起重要作用。     

一氧化氮诱导 PC12 细胞凋亡及芍药苷的保护作用

目的: 探讨一氧化氮诱导PC12细胞凋亡及芍药苷保护作用的可能机制。方法: MTT和乳酸脱氢酶活性测定细胞存活率,DNA凝胶电泳观察DNA的断裂情况,流式细胞仪测定细胞凋亡率、检测线粒体跨膜电位。结果: 500μmol·L^-1硝普钠(SNP)可诱导PC12细胞凋亡,细胞线粒体跨膜电位明显下降。预先经过0.1、1和10μmol·L^-1等浓度芍药苷处理后,SNP诱导的PC12细胞凋亡明显减少,同时明显减弱一氧化氮对线粒体跨膜电位的影响。结论: 芍药苷可抑制一氧化氮诱导PC12细胞凋亡,其作用机制可能与其稳定细胞线粒体跨膜电位有关。     

丁酸钠诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的信号通路及对AQP3基因表达影响的研究

目的:探讨丁酸钠诱导结肠癌HT-29细胞凋亡过程的分子机理及其对水通道蛋白AQP3基因表达的影响。方法:MTT 法检测不同浓度的丁酸钠对结肠癌HT-29细胞生长的影响;RT-PCR 检测不同浓度的丁酸钠对细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK4、p16和AQP3的基因表达水平, 同时使用流式细胞仪检测细胞周期。结果:加入浓度超过2.5 mmol/L 的丁酸钠后, 结肠癌HT-29细胞生长受到抑制,Cyclin D1、CDK4和AQP3的表达水平下降, p16的表达水平上调, 细胞阻滞于G₁/S 期。结论:浓度超过2.5 mmol/L 的丁酸钠可以诱导结肠癌HT-29细胞凋亡, 使其细胞周期阻滞于G₁/S期, 且这种诱导作用是剂量依赖型的, 其分子通路可能是通过p16-Cyclin D1/CDK4这条信号途径,在此过程中, 伴随着AQP3的基因表达水平降低。     

聚酯型儿茶素对小鼠淋巴细胞增殖和凋亡的影响1

目的: 研究聚酯型儿茶素(theasinesin, TS) 对小鼠淋巴细胞增殖和凋亡的影响。 方法: 采用 MTT法研究TS 对小鼠脾细胞增殖的影响, 采用形态学检测、DNA 琼脂糖凝胶电泳及 FACS 分析方法研究 TS对小鼠胸腺细胞自发凋亡及地塞米松诱导脾细胞凋亡的影响。结果: 50、150、500 mg·L^-1 TS 对小鼠脾淋巴细胞增殖有明显促进作用。 小鼠胸腺细胞体外培养 20后, 琼脂糖凝胶电泳出现典型的 DNA lad-der, FACS 图上出现典型的亚二倍体凋亡峰。50、150、500 mg·L^-1 TS 作用后, 随药物剂量增加 DNAladder减弱, 凋亡峰减小, 细胞凋亡率从 19.87%分别减为 12.14%、9.49%、6.71%。但不同浓度 TS 对地塞米松诱导的小鼠脾细胞凋亡无明显影响。 结论: 聚酯型儿茶素可明显促进小鼠脾淋巴细胞增殖, 同时可抑制小鼠胸腺细胞自发凋亡, 两者总的效应是一致的。     

内洋地黄素通过影响细胞凋亡和炎症相关基因表达介导心肌缺血再灌注损伤

目的:利用信号转导基因芯片观察心肌缺血再灌注(myocardial ischemia reperfusion, MIR)时心肌凋亡和炎症相关基因表达变化, 以及内洋地黄素特异性拮抗剂地高辛抗体对它们的影响, 证明内洋地黄素通过影响细胞凋亡和炎症相关基因表达介导MIR 损伤, 完善内洋地黄素介导MIR 损伤的作用机制。方法:采用结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min, 复灌60 min 制作在体大鼠MIR 模型。SD 大鼠随机分成3组, 每组3只, 分别为假手术组、MIR 组、地高辛抗血清组, 各组于再灌注60 min 后立即取左室心尖部缺血区心肌, 应用基因芯片技术检测心肌凋亡和炎症相关基因表达。结果:与假手术组比较, MIR 组Bax 、Bcl-2、Bcl-2L1和Birc1b 等凋亡相关基因表达下调, 但Bcl-2/Bax比率下降;IL 、TNF 、ICAM-1等介导炎症相关基因表达有上调或是上调趋势。与MIR 组比较, 地高辛抗血清组Bax 、Bcl-2和Birc3等相关凋亡基因表达均上调, 但Bcl-2/Bax 比率上升;IL 、TNF 、ICAM-1等介导炎症相关基因表达下调或是下调趋势。结论:内洋地黄素具有下调抑制凋亡基因表达和上调炎症基因表达作用, 内洋地黄素拮抗剂地高辛抗血清通过拮抗内源性洋地黄素, 阻断后者的下调抑制心肌凋亡相关基因和上调炎症相关基因表达的作用而发挥心肌保护作用。     

醋柳黄酮对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的:探讨醋柳总黄酮(TFH) 对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i) 的影响。方法:采用新一代钙荧光探针Fluo-3/AM 检测在高钾、去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素II(Ang Ⅱ) 刺激下单层兔主动脉平滑肌细胞内游离钙水平的改变, 并与传统的钙拮抗剂Verapamil (Ver) 进行对照研究。结果:TFH(100 mg·L^-1) 对静息状态的血管平滑肌细胞[Ca²⁺]_i 无明显影响;TFH(60 ～ 100 mg·L^-1) 呈剂量依赖性抑制高K⁺ 去极化引起的[Ca²⁺]_i 升高, 与Ver 作用相似, 但弱于Ver;TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE、Ang Ⅱ通过受体介导引起[Ca²⁺]_i 升高均具有明显的抑制作用;在无细胞外Ca²⁺存在下, TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE 引起的[Ca²⁺]_i 升高也具有一定程度的抑制效应。结论:醋柳总黄酮通过对电压依赖性钙通道和受体操纵型钙通道双重抑制降低血管平滑肌细胞内游离钙水平, 这可能是醋柳黄酮产生舒血管降压作用机制之一。     

多西紫杉醇体外诱导骨肉瘤细胞系 pl-1 的凋亡1

目的: 研究多西紫杉醇对骨肉瘤细胞生长抑制及诱导凋亡作用。方法: 应用细胞计数、 形态学观察、 蛋白含量测定、 流式细胞术和电镜等方法对多西紫杉醇诱导的骨肉瘤进行检测和观察。结果: 多西杉醇在浓度为 4 mg·L^-1时, 对骨肉瘤细胞有明显的生长抑制作用, 并且存在着时间依赖关系和一定范围内的剂量依赖关系。多西紫杉醇可将骨肉瘤细胞阻断于G1期, 并诱导凋亡, 其凋亡细胞具有典型凋亡细胞特征。用流式细胞仪测定细胞周期, 可见明显的凋亡峰。电镜观察染色质沿皱缩的核膜下凝聚, 细胞表面出现凋亡小体, 基质呈絮状致密化, 紫杉醇作用短时间去除后再培养比持续作用更易促使细胞凋亡。 结论: 多西紫杉醇对骨肉瘤细胞的细胞毒作用是诱导其凋亡的结果, 这种诱导凋亡的能力是紫杉醇疗效的基础, 在对骨肉瘤的治疗中, 紫杉醇有着巨大的潜力。     

硒酸酯多糖诱导白血病多药耐药细胞凋亡的作用机制

目的: 观察硒酸酯多糖(Kappa-selenocarrag-eenan, KSC) 对 K562/ADM 耐药细胞的诱导凋亡效应, 并探讨其作用机制。方法: 应用噻唑蓝(MTT) 比色法、Wright-Giemsa 染色、DNA 琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(Flow cytometry, FCM) 观察K562/ADM 细胞凋亡;FCM 测定 K562/ADM 细胞 Fas、P53 和 Bcl-2 蛋白表达水平;RT-PCR 检测 Caspase-3 mRNA 的表达。结果: 50 ~ 500 mg°L^-1KSC 抑制 K562/ADM 细胞增殖, 并诱导 K562/ADM 细胞凋亡, 细胞出现呈典型凋亡形态改变, DNA 电泳可见 DNA 梯状条带(DNAladder);FCM 分析出现亚 G 1 期细胞群, S 期细胞比例增高。Fas 蛋白表达上调, Bcl-2 蛋白表达下调,Caspase-3 mRNA 表达显著增强, 但 P53 蛋白表达无明显改变。结论: KSC 通过 Fas 依赖性 Caspase-3 激活途径诱导K562/ADM 细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导K562/ADM细胞凋亡的作用机制研究

目的 观察三氧化二砷(As2O3) 对K562/ADM细胞的诱导凋亡效应, 探讨其作用机制。 方法 应用噻唑蓝(MTT) 比色法、Wright-Giemsa 染色、DNA 琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(FCM) 观察K562/ADM 细胞凋亡;FCM 测定K562/ADM 细胞Fas、Bcl-2、P53 蛋白水平的变化;比色法检测Caspase3 活性变化。 结果 As2O3 可抑制K562/ADM 细胞增殖;K562/ADM 呈典型凋亡形态改变;DNA 电泳可见梯状条带出现;FCM 分析示亚G1 期细胞比例增高, G2 M 期阻滞;Fas、P53 蛋白表达明显上调;Caspase3 活性明显增强。 结论 A_s2O₃ 可通过Fas 依赖性Caspase3 激活而诱导K562/ADM 细胞凋亡。     

NS-398 诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的: 研究选择性环氧化酶-2(COX-2) 抑制剂NS-398 对人肝癌细胞HepG₂ 凋亡的影响, 及其相关蛋白Bcl-2 在细胞凋亡中的作用。方法: 通过体外细胞培养, 应用荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪观察NS-398 对HepG₂ 的凋亡诱导作用, 应用免疫细胞化学法观察Bcl-2 在人肝癌细胞HepG₂ 凋亡中的表达。结果: NS-398 处理HepG₂ 细胞后, 电镜下可见到细胞核固缩、染色质凝集成新月型紧靠核膜周边,核碎裂、染色质片断化等典型的细胞凋亡形态变化。荧光显微镜及流式细胞检测则未见凋亡征象。免疫细胞化学分析显示, NS-398 处理后的HepG₂ 细胞,其Bcl-2 表达较对照组明显下降。结论: COX-2 选择性抑制剂NS-398 对人肝癌HepG₂ 细胞有显著的凋亡诱导作用;抗凋亡基因Bcl-2 在NS-398 诱导的HepG₂ 细胞凋亡中有重要的调控作用。     

川芎嗪对儿茶酚胺诱导大鼠心肌损伤时Bcl-2和Fas 蛋白表达的影响

目的: 观察川芎嗪对儿茶酚胺诱导大鼠心肌损伤时心肌细胞Bcl-2 和Fas 蛋白表达的影响。方法: 采用皮下多点注射异丙肾上腺素(ISO,5 mg·kg^-1) 每天1 次, 连续3 d, 诱导大鼠心肌损伤,采用免疫组化方法检测Bcl-2 和Fas 蛋白的水平, 并利用图像分析系统分析蛋白阳性表达区域平均光密度值。结果: 损伤组和川芎嗪保护组心肌细胞Bcl-2蛋白表达较对照组均显著升高(P<0.01), 损伤组Fas 蛋白水平较对照组也显著升高(P<0.01), 川芎嗪保护组的Fas 蛋白水平较损伤组显著下降(P<0.01), 且Bcl-2 Fas 比值也较损伤组和对照组明显增加。川芎嗪保护组的病理损伤程度明显低于损伤组。结论: 川芎嗪可抑制儿茶酚胺诱导的心肌损伤时心肌细胞中促凋亡基因Fas 的表达, 提高心肌细胞中Bcl-2 Fas 比值。     

珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

目的: 观察珠子参总皂苷对H₂O₂诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制。方法: Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H₂O₂建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100, 200 μg/mL)孵育 24 h后,MTT法检测珠子参总皂苷对细胞活力的影响,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测珠子参总皂苷对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内ROS含量的影响,比色法测定心肌细胞Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定心肌细胞Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果: 珠子参总皂苷(100, 200 μg/mL)能显著改善心肌细胞活性,有效保护线粒体膜电位的稳定,抑制心肌细胞凋亡和改善细胞形态,降低细胞内活性氧(ROS)含量;下调Bax mRNA表达,上调Bcl-2 mRNA表达及Bcl-2与Bax的比值;降低H₂O₂所致新生大鼠心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性。结论: 珠子参总皂苷对H₂O₂诱导心肌细胞凋亡有显著的抑制作用,其机制可能与其稳定心肌细胞膜、清除ROS及调节心肌细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3、Caspase-9表达有关。     

不同浓度丹参酮对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的: 探讨不同浓度丹参酮对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制。方法: 建立大鼠脑片缺氧缺糖损伤模型, 设立对照组、缺氧缺糖损伤组、丹参酮20 mg·L^-1组和丹参酮200 mg·L^-1组。利用2, 3, 5-三苯基氯化四氮唑(TTC) 染色定量比色、乳酸脱氢酶(LDH) 、免疫组化、电镜评价不同浓度丹参酮对脑损伤的保护作用。同时激光共聚焦显微镜测定脑片胞内钙变化。结果: 不同浓度丹参酮(20 、200 mg·L^-1) 抑制脑片OGD 损伤所致的TTC 染色降低, 减少LDH 释放, 减轻神经元凋亡, 改善神经元超微结构的病理损伤。OGD 损伤增加bax 和bcl-2 蛋白表达和胞内钙离子浓度。不同浓度丹参酮(20 、200 mg·L^-1) 进一步上调bcl-2 蛋白表达, 降低bax 蛋白表达, 同时抑制胞内钙离子浓度。与丹参酮20mg·L^-1相比, 丹参酮200 mg·L^-1作用较强。结论: 不同浓度丹参酮具有脑保护作用, 能够抑制缺氧缺糖损伤导致的大鼠脑片神经元损伤及其凋亡过程, 且丹参酮对于胞内钙离子的调控可能是其发挥保护作用的重要机制之一。     

盐酸埃他卡林对缺氧诱导神经细胞凋亡的影响

目的: 探讨盐酸埃他卡林(Ipt) 对缺氧诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡的影响。方法: 用电镜和流式细胞分析技术, 检测原代培养的大鼠皮质神经细胞凋亡;应用免疫组化法, 观察凋亡相关蛋白Bcl-2 、Bax 表达的改变。结果: Ipt 10 μmol·L^-1可减轻缺氧诱导的细胞染色质浓缩现象, 逆转缺氧诱导的Bcl-2表达的下调, 对Bax 表达无显著影响;Ipt (0.1~10 μmol·L^-1) 能剂量依赖性地降低凋亡细胞百分率, 以10 μmol·L^-1 浓度组效果最好, 其作用可被ATP 敏感性钾通道特异性阻断剂格列本脲(Gli) 所拮抗。结论: Ipt 对缺氧诱导的神经细胞凋亡有明显的抑制作用, 其作用机制与ATP 敏感性钾通道、Bcl-2 表达相关。     

灯盏花素对非小细胞肺癌A549细胞的促凋亡作用

目的: 分析灯盏花素对非小细胞肺癌细胞的促凋亡作用以及对移植瘤生长的影响及初步机制探讨。方法: 检测25、50、100 μmol/L灯盏花素处理后A549细胞凋亡、Caspase-3活性及促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2表达的改变,用A549细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型,每日腹腔注射10 mg/kg和20 mg/kg灯盏花素,每周观察肿瘤的大小、裸鼠体质量,第21天时处死小鼠,获取瘤体,Western blot检测Bax和Bcl-2的表达,分析Bax/Bcl-2比值变化;免疫组化法检测组织内Caspase-3表达变化,TUNEL染色检测肿瘤组织内细胞凋亡情况。结果: 灯盏花素增加A549细胞凋亡率;酶标仪检测结果显示灯盏花素处理后,Caspase-3活性较对照组显著增加;Western blot结果显示灯盏花素能够显著抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,增加促凋亡蛋白Bax表达,致Bax/Bcl-2比值显著增加。体内实验中,第14和21天时,肿瘤大小较对照组明显减小;而裸鼠的体质量无明显降低。Western blot检测结果显示灯盏花素能够上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达,而Caspase-3的表达明显增加。TUNEL染色结果显示灯盏花素处理后,细胞凋亡比例较对照组明显增加。 结论: 灯盏花素能够在体内外诱导A549细胞凋亡,其机制可能是灯盏花素通过上调Bax的表达和抑制Bcl-2的表达,增加Bax/Bcl-2的比值,激活Caspase-3,达到促凋亡作用。     

乙醇诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对ICAM-1蛋白表达影响的研究

目的: 研究乙醇体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡,及对细胞间黏附分子(ICAM-1)蛋白表达的影响。方法: 以不同浓度乙醇(50、100和 200 mmol/L)作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞 24 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法检测ICAM-1蛋白表达。结果: 乙醇能抑制内皮细胞活力,促进细胞凋亡,增加ICAM-1表达,并呈浓度依赖性。结论: 乙醇能诱导内皮细胞损伤,其机制可能与促进细胞凋亡、影响ICAM-1蛋白表达有关。