多非替利衍生物CPU228(V03) 对大鼠心室肌细胞钙瞬变的调节

目的:在β-受体激动情况下, 研究多非替利衍生物CPU 228 对电刺激触发心肌细胞的胞浆Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i) 变化及钙瞬变动力学参数的影响。方法:游离单个大鼠心室肌细胞, Fluo-3/AM 负载, 电刺激诱发心室肌细胞钙瞬变, 定量测定心室肌细胞内Ca²⁺浓度变化, 异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO) 100 nmol°L^-1激动β-受体, 观察CPU 228 1 μmol°L^-1对钙瞬变动力学参数、[Ca²⁺]_i 及钙负荷水平的影响。结果:CPU228 1 μmol°L^-1对大鼠心室肌细胞[Ca²⁺]_i 的影响不明显(P>0.05);ISO 100 nmol°L^-1显著升高大鼠心室肌细胞[Ca²⁺]_i 和细胞内钙负荷水平, 缩短钙瞬变时程, 并且增加钙瞬变的消除速率。CPU 2281 μmol°L^-1显著抑制ISO 的上述作用。结论:在β-受体激动情况下, CPU 228 可以降低心肌细胞[Ca²⁺]_i,使ISO 改变的钙瞬变动力学参数恢复到正常水平。     

脂蛋白对培养巨噬细胞表达噬巨细胞移动抑制因子的实验研究

目的:探讨不同脂蛋白对培养的人巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子基因和蛋白水平的影响。方法:28SC 人巨噬细胞株用含有1×10⁵U°L^-1青霉素、100 mg°L^-1 链霉素和10% FBS 的RPMI-1640培养基于37 ℃, 5% 的CO₂ 中培养。以每孔1×10⁴个细胞接种于6 孔板中, 每孔2 ml 培养液, 加入终浓度为150 mg°L^-1的不同脂蛋白, 于37 ℃ 共同孵育24 h 收集细胞和培养介质。采用RT-PCR 和ELISA 分别测定MIF mRNA 和蛋白表达水平。结果:巨噬细胞有MIF 表达, 低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、胆固醇和甘油三脂组诱导巨噬细胞MIF mRNA 和蛋白表达水平, 试验组较正常对照组升高(P<0.05);而高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白组诱导巨噬细胞MIF mRNA 和蛋白表达水平, 试验组与正常对照组变化相近(P>0.05)。结论:不同脂质对巨噬细胞MIF mRNA 和蛋白表达作用不同。MIF 可能参与了低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、胆固醇和甘油三脂所致的动脉粥样硬化进程。     

猪苓多糖对膀胱癌细胞钙离子浓度的影响

目的 观察猪苓多糖对人T24 膀胱癌细胞内钙离子(Ca²⁺) 浓度的影响, 探讨猪苓多糖抗癌机理。方法 体外培养人T24 细胞经钙荧光指示剂(calciumcrimson-AM) 负载后, 用激光扫描共聚焦显微镜测定猪苓多糖作用前后细胞内Ca²⁺随时间的变化。结果 猪苓多糖低剂量(0.2 mg·L^-1) 使T24 细胞内Ca²⁺降低, 高剂量(>1 mg·L^-1) 使T24 细胞内Ca²⁺升高, 最后维持在高钙水平上。猪苓多糖主要促进细胞核内Ca²⁺升高, 细胞浆Ca²⁺无明显改变。结论 猪苓多糖可引起T24 细胞内Ca²⁺水平的显著变化, 而且这种变化主要表现在细胞核内, 提示猪苓多糖可能有诱导细胞凋亡的作用。     

Ca2+/CaM-CaN 途径参与神经肽Y 诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的: 探讨Ca²⁺ CaM 依赖的钙调神经磷酸酶(CaN) 途径在神经肽Y(NPY) 诱导心肌细胞肥大中的作用。方法: 用NPY (10、100 nmol·L^-1) 刺激WISTAR 乳鼠心肌细胞, 并用CaN 特异性抑制剂环胞霉素A 加以干预。应用3H-Leu 掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率, 用免疫印迹(Western-blot) 和组织化学法分别测定心肌细胞内CaN-α蛋白表达和CaN 酶的活性。结果: 较高浓度NPY(100 nmol·L^-1) 可明显增加心肌细胞3H-Leu 掺入量(P < 0.05), 加入CsA 可阻断上述效应;NPY(100 nmol·L^-1) 还可明显增加心肌细胞内CaN 酶比活性(P <0.05), 并刺激心肌细胞CaN-α蛋白表达(P <0.05) 。结论: NPY 可活化大鼠心肌细胞Ca²⁺CaM-CaN 途径, 而CaN 特异性抑制剂环胞霉素A 可抑制NPY 诱导的心肌肥大, 说明Ca²⁺ CaM 依赖的钙调神经磷酸酶(CaN) 途径参与神经肽Y 诱导的心肌细胞肥大效应。     

抗氧化作用可能是人参皂甙Rg1 抗细胞凋亡的机制1

目的 探讨人参皂甙Rg1 对MPP⁺诱导SHSY5Y 细胞凋亡的保护作用及其可能的机制。 方法 用吖啶橙溴化乙锭染色观察SHSY5Y 细胞凋亡率, 流式细胞仪检测线粒体跨膜电位及细胞内活性氧(ROS) 水平, Western Blot 法检测bcl-2、bax 蛋白表达水平。 结果 经10 μmol·L^-1 Rg1 预处理后,MPP⁺诱导的SHSY5Y 细胞凋亡受到明显的抑制, 虽然线粒体跨膜电位无明显改变, 但细胞内ROS 下降, 而bcl-2 蛋白表达水平增加, bax 蛋白表达水平减少。 结论 Rg1 可抑制MPP⁺诱导的SHSY5Y 细胞凋亡,其作用机制可能是通过清除ROS、调节bcl-2、bax 蛋白表达水平起作用。     

急性脑卒中后继发顽固性呃逆与低血钙、低镁血症关系

目的: 探讨急性脑卒中后的继发顽固性呃逆与低血钙、低镁血症的关系。方法: 选择我院1996～ 2000 年急性脑卒中患者1843 例中伴发呃逆66例, 年龄病情相仿的无呃逆急性脑卒中患者为对照组。结果: 呃逆组血清钙1. 06 ～ 2. 25 mmol·L^-1( 1. 8±0. 4) mmol·L^-1, 并发低钙血症46 例( 69. 7 %), 血清镁0. 34 ～ 0. 97 mmol·L^-1( 平均0. 63 ±0. 20 mmol·L^-1), 其中并发低镁血症42 例( 64. 64 %) 。与对照组经统计学处理均有显著性差异。结论: 急性脑卒中后继发顽固性呃逆与低血钙、低镁血症与应用脱水剂有关, 因此治疗时应注意维持水和电解质平衡。     

3,4,5,6-四羟基口山酮对高糖所致血管内皮依赖性舒张功能减退的保护作用

目的:观察3, 4, 5, 6-四羟基_口山酮对高糖所致血管内皮依赖性舒张功能减退的保护作用。方法:在大鼠离体胸主动脉环, 用高浓度葡萄糖(25mmol°L^-1) 孵育24 h, 检测乙酰胆碱诱导的血管内皮依赖性舒张反应;人脐静脉内皮细胞株(ECV304)用高浓度葡萄糖(30 mmol°L^-1) 培养48 h, 测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 活性、一氧化氮(NO) 及细胞脂质过氧化物丙二醛(MDA) 含量。结果:3, 4, 5, 6-四羟基_口山酮(1、3 和10 μmol°L^-1) 能显著抑制高糖所致的舒血管效应减退, 并且呈剂量依赖性。3, 4, 5,6-四羟基_口山酮(1、3 和10 μmol°L^-1) 能显著抑制高糖所致的内皮细胞LDH 泄漏、NO 释放和MDA 生成的增加。结论:3, 4, 5, 6-四羟基_口山酮对高糖所致的血管内皮依赖性舒张功能减退有保护作用, 其保护作用与抑制脂质过氧化减少血管内皮细胞损伤有关。     

中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究中华眼镜蛇毒F 组分对血管平滑肌细胞增殖的影响。 方法 用体外培养的血管平滑肌细胞, 观察F 组分对20 %小牛血清引起的细胞对氚标胸腺嘧啶核苷酸(H³-TdR) 掺入的影响, 用蛋白质免疫印迹法(Western blotting) 测定F 组分对20 %小牛血清引起的细胞内原癌基因、核增殖抗原(Proliferationcell nuclear antigen, PCNA) 表达的影响。 结果 F 组分呈浓度依赖性抑制20 %小牛血清引起的细胞对H³-TdR 掺入率和细胞内C-myc、PCNA 的表达, 其中30、100 mg·L^-1给药组与对照组比较有显著差异(P <0.05)。 结论 中华眼镜蛇毒F 组分通过影响细胞内原癌基因C-myc、PCNA 的表达, 抑制血管平滑肌细胞的增殖。     

新的核苷类似物β-L-D4A 的细胞内代谢与生物转化

目的: 研究β-L-D4A 在2.2.15 细胞内的代谢情况, 以便为进一步明确其抗HBV 作用机制和动物体内实验及人体内试验研究其抗HBV 作用与药代动力学奠定基础。方法: 以2 μmol·L^-1 [³H] β-LD4A或[³H] β-D-D4A 处理2.2.15 细胞2 、4 、8 、12 、24 h, 再以0.4 mol·L^-1预冷的高氯酸(含0.08 mol·L^-1磷酸三乙胺) 抽提, 离心后, 溶解于酸的上清液,直接进行HPLC 分离、相连的紫外检测器检测, 然后分析各个峰值。结果: 两化合物均出现4 峰, 且出现时间一致, 保留时间依次在6 、10 、19 、28 min, 24 h 处理后, β-L-D4A 细胞内代谢峰明显高于β-D-D4A 的代谢峰;β-L-D4A 于2.2.15 细胞内代谢进行了动态的检测, 发现细胞内代谢物的含量于加药后迅速增加, 以三磷酸形式增加最快, 至8 h 时, 达到最大值,以后开始缓慢降低;β-L-D4A 处理2.2.15 细胞24 h后, 换用不含药培养基继续培养, 停药后3 种磷酸化代谢物含量于前8 h 迅速减少, 继后16 h 降低缓慢, 于24 h 时, 仍有8 h 时35.6 %(0.32 0.9) 的三磷酸化合物存在。结论: β-L-D4A 较之β-D-D4A 更易被磷酸化代谢;一磷酸化过程可能为限速步骤;β-LD4A三磷酸化物在2.2.15 细胞内降解缓慢。     

高效液相-质谱联用法(HPLC-MS) 测定灯盏乙素血药浓度及其临床药代动力学研究

目的:研究灯盏花素片在中国人体内的药代动力学。方法:20 名健康志愿者单剂量口服120 mg灯盏花素片, 用高效液相-质谱联用法测定血浆中灯盏乙素总苷元。结果:本实验建立的血药浓度测定方法, 血浆中杂质不干扰样品的测定, 线性范围为0.0126～3.24 mg°L^-1;日内和日间精密度均小于12.0%。20 名健康受试者单剂量口服灯盏花素片(120 mg) 后, 主要药代动力学参数:T_max=7.0±2.3 h、C_max=0.9±0.5 mg°L^-1、AUC_0-tn=5.6±1.6mg°h°L^-1、AUC_0-∞=5.8±1.6 mg°h°L^-1、MRT_0-tn=8.0±1.1 h、MRT_0-∞=8.6±1.4 h。结论:建立的LC-MS 法适用于灯盏乙素人体药代动力学研究。灯盏花素片口服药代动力学特点是达峰时间较长, 约占受试者总人数45% 的药时曲线有双峰现象。     

灯盏花素在小鼠体内药物动力学研究

目的:研究灯盏花素在小鼠体内的药物动力学和绝对生物利用度。方法:采用固相萃取-高效液相色谱(SPE-HPLC)法, 测定小鼠静脉注射灯盏花素50 mg°kg^-1和灌胃150 mg°kg^-1后血浆灯盏乙素浓度, 3p97 程序处理数据。结果:小鼠静注灯盏花素后灯盏乙素的血浓-时间变化符合三房室模型,AUC、C₀ 和T_1/2β 分别为12.97±3.55 mg°L^-1 °h、132.23±39.90 mg°L^-1 和4.04±1.29 h。灌胃后药物吸收很快, 但血浓低。采用非房室模型法计算AUC 为1.97±0.53 mg°L^-1°h, T_1/2Ke 为3.41±1.23 h。绝对生物利用度为5.05%。结论:灯盏花素经静注在小鼠体内的药代动力学符合三室模型。灌胃给药吸收快, 但吸收差, 绝对生物利用度低, 且药时曲线变化不规则。     

长春西汀注射液对实验性短暂脑缺血样发作磷脂水平的影响

目的:研究长春西汀注射液对实验性短暂性脑缺血发作(TIA) 磷脂水平的影响。方法:尾静脉注射过氧化物建立小鼠TIA 模型, 腹腔注射不同剂量的长春西汀, 诱发2 次TIA 后隔日断头取血测定血浆中溶血磷脂酸(LPA) 和酸性磷脂(PA) 的含量。结果:实验对照组的评分为7.090±0.696, 给予0.7 mg°kg^-1°d^-1 长春西汀后, 评分为3.576±0.569(P<0.05) 。TIA 组小鼠血浆中LPA 比对照组明显升高, 两组分别为6.305±0.190 和2.170±0.123 μmol°L^-1 。长春西汀可逆转这一变化, 为4.523±0.406 μmol°L^-1 。TIA 组小鼠血中PA 比对照组明显升高, 两组分别为9.100±0.185 和3.801±0.257 U, 而长春西汀组中PA 可降至6.972±0.247 U 。结论:实验性TIA 样小鼠出现血浆LPA 和PA 水平的异常。长春西汀有逆转作用, 可用于缺血性脑血管病的治疗。     

乙醇诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对ICAM-1蛋白表达影响的研究

目的: 研究乙醇体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡,及对细胞间黏附分子(ICAM-1)蛋白表达的影响。方法: 以不同浓度乙醇(50、100和 200 mmol/L)作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞 24 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法检测ICAM-1蛋白表达。结果: 乙醇能抑制内皮细胞活力,促进细胞凋亡,增加ICAM-1表达,并呈浓度依赖性。结论: 乙醇能诱导内皮细胞损伤,其机制可能与促进细胞凋亡、影响ICAM-1蛋白表达有关。     

RP-HPLC法测定Beagle 犬血浆中烟酸浓度及烟酸药代动力学研究

目的:建立RP-HPLC 法测定血浆中烟酸的药物浓度, 并将建立的方法应用于Beagle 犬测定烟酸缓释片的血药浓度, 计算其药代动力学参数和相对生物利用度。方法:0.1 ml 血浆样品经乙腈沉淀蛋白后直接进样;流动相为乙腈-水相(8∶92), 水相含10 mmol°L^-1 磷酸二氢钾, 用磷酸调pH 值至4.0, 流速为1.0 ml°min-1;色谱柱为汉邦科技LichrospherC18 (5 μm, 250 mm×4.6 mm I.D.), 检测波长为263 nm。6 只Beagle 犬随机交叉口服500 mg 复方洛伐烟酸缓释片和500 mg 标准参比烟酸普通片后, 用RP-HPLC 法测定血浆中烟酸的药物浓度。结果:分析方法符合生物样品分析要求。Beagle 犬单剂量口服复方洛伐烟酸缓释片500 mg 后, 估算的末端相t1 2为1.3±1.2 h, T_max 为2.3±0.8 h, C_max 为35.3±4.9 mg°L^-1, MRT 为3.5±0.6 h。复方洛伐烟酸缓释片的AUC、C_max 明显低于烟酸普通片(P<0.05)。经配对t 检验分析显示复方洛伐烟酸缓释片T_max 明显长于普通片(P<0.05)。结论:单剂量口服复方洛伐烟酸缓释片后, 测得的C_max 和AUC 与烟酸普通片均有显著性差异, 受试缓释片的T_max 长于参比普通片,C_max 低于参比普通片, 说明受试缓释片无突释现象, 有一定的缓释效果。     

9-(4-乙氧羰基苯氧基)-6, 7-二甲氧基-1, 2, 3, 4-四氢吖啶盐酸盐对PC12细胞缺氧缺血损伤的保护作用

目的 研究9-(4-乙氧羰基苯氧基)-6, 7-二甲氧基-1, 2, 3, 4-四氢吖啶盐酸盐(EDT) 对神经细胞缺血缺氧损伤的影响。方法 离体培养的PC12 细胞, 用连二亚硫酸钠造成缺氧/复氧损伤模型, 用NaCN 加缺糖造成拟缺血损伤模型, 通过MT T 微量比色、培养介质LDH 活力测定研究EDT 对两模型的保护作用。结果 在10^-8～10^-6 mol·L^-1范围内, EDT 浓度依赖地降低两种损伤所致培养介质内LDH 的释放, 增加MTT 比色值, 同时10^-6 mol·L^-1 EDT 对两模型的保护作用具有时间依赖性, 48 h 达效应平台。结论 EDT 对PC12 细胞缺血缺氧损伤具有保护作用。     

灵菌红素对人胰腺癌细胞增殖抑制的实验研究

目的 观察从生物工程技术得到的灵菌红素对人胰腺癌8898 细胞增殖抑制的药效学作用, 并探讨其作用的部分机理。 方法 用MTT 法测定8898细胞的存活率和抑制率, 用流式细胞仪分析细胞的周期变化和凋亡细胞的百分比, 用HPLC 检测人胰腺癌8898 细胞内灵菌红素的浓度, 用琼脂糖凝胶电泳对DNA 段片化进行分析。 结果 灵菌红素5 mg·L^-1的培养液中8898 细胞出现凋亡早期的形态学特征, 半数抑制浓度(IC₅₀) 为30 mg·L^-1。而3T3 细胞却未显示出该作用。研究表明灵菌红素抑制细胞的增殖, 与抑制S 期细胞的DNA 复制及调控细胞的增殖周期相关。同时, 细胞凋亡的产生与实验药物呈正相关。HPLC 结果显示, 灵菌红素的药理学作用与细胞内药物浓度相关。 结论 灵菌红素能有效的进入细胞内, 抑制细胞的增殖, 其机理与诱导细胞凋亡和调控细胞的增殖周期相关。