4种蛋白质分析方法在液态乳中的适用性研究

分别利用凯氏定氮法、三氯乙酸-双缩脲比色法、考马斯亮蓝法和福林-酚法等4种方法,对液态乳中添加尿素、甘氨酸、硝酸铵、亚硝酸钠、水解蛋白、三聚氰胺等非蛋白含氮物后的蛋白质量浓度进行了测定,并与其理论值进行了比较.结果表明:凯氏定氮法和福林-酚法测定的液态乳蛋白质量浓度与其理论值存在显著差异,而考马斯亮蓝法和三氯乙酸-双缩脲比色法则能较好地反映其真实的蛋白含量.考马斯亮蓝法灵敏度高,适合测定蛋白含量较低的样品;而三氯乙酸-双缩脲比色法的测定结果与液态乳中真实蛋白质量浓度更加接近.     

采用蛋白质定量方法检测掺假牛乳比较研究

研究非蛋白质掺假牛乳样品中的乳蛋白质检测方法。样品用15%三氯乙酸溶液处理牛乳样品,沉淀分离乳蛋白质,通过凯氏定氮法和四种分光光度法对液态乳中添加尿素和三聚氰胺常见掺假物进行检测比较研究。结果表明,凯氏定氮法、双缩脲比色法、Folin-酚试剂法、BCA法检测牛乳中掺入不同比例尿素溶液蛋白质含量,结果不受尿素溶液的影响,准确度高。对于牛乳中掺入三聚氰胺溶液,三氯乙酸结合凯氏定氮法检测相对误差较大,而三氯乙酸结合双缩脲比色法、Folin-酚试剂法、BCA法检测结果不受三聚氰胺溶液影响,准确度高。考马斯亮蓝法测定牛乳中掺入尿素溶液和三聚氰胺溶液相对误差均很大。     

人为添加非蛋白质氮乳与乳制品中蛋白质含量测定方法的研究

本研究分别用GB/T5009.5《食品中蛋白质的测定》和NY/T1678《乳与乳制品中蛋白质的测定——双缩脲比色法》,测定了添加非蛋白氮物质的乳及乳制品中的蛋白质含量。结果表明GB/T5009.5方法不能区分样品中的蛋白氮与非蛋白氮;采用NY/T1678-2008方法可以较好的实现蛋白氮和非蛋白氮物质的分离,有效地排除三聚氰胺、尿素、甘氨酸和水解蛋白等多种非蛋白氮对乳及乳制品中蛋白质含量检测的影响,该方法前处理方法快速、简单,检测结果准确。 更多还原     

考马斯亮蓝法测定奶粉真蛋白的研究

比较凯氏定氮法、考马斯亮蓝法和福林酚法测定奶粉蛋白含量的差异,研究了不同种类的非蛋白含氮物(尿素、三聚氰胺、甘氨酸和水解蛋白)、不同添加量(0%、0.5%、1%、2%和10%)对考马斯亮蓝法测定奶粉蛋白含量的影响。实验结果为,考马斯亮法所测蛋白含量与凯氏定氮法相近,福林酚法测定的结果显著高于凯氏定氮法;添加不同比例的4种非蛋白含氮物均对考马斯亮蓝法测定蛋白含量的结果没有影响,随着添加比例的增加,奶粉氮含量的理论值逐渐增大,而测定值没有显著变化。实验结果表明,考马斯亮法可排除添加非蛋白含氮物对奶粉真蛋白含量测定的影响,可以快速、准确的测定奶粉真蛋白含量。     

关于GB/T 21704-2008方法改进和适用范围的研究

目的 对GB/T 21704-2008《乳与乳制品中非蛋白氮含量的测定》中前处理部分提出方法改进,明确方法的适用范围。方法 用不同剂量的三氯乙酸溶液沉淀样品中蛋白质,过滤后测定滤液中非蛋白氮含量；加水完全溶解三组不同质量的三聚氰胺,加入不同体积的三氯乙酸溶液,观察三聚氰胺在不同浓度三氯乙酸溶液中的析出情况；加标不同量的三聚氰胺,测定计算回收率确定仪器的检测限。结果 样品中蛋白质含量低于20 g/ 100 g 时,20 mL 15%三氯乙酸溶液可完全沉淀样品中蛋白质；三氯乙酸浓度越高,三聚氰胺溶解度越小,越容易析出；本实验用的全自动凯氏定氮仪最低可准确稳定检测2 mg三聚氰胺/10g样品。结论 国标方法改进后可以节约试剂,在消化环节缩短加热时间,提高实验效率；三聚氰胺在三氯乙酸溶液中的溶解度情况和仪器检测限的限制框定方法的适用范围是2 mg -20 mg三聚氰胺/10g样品。     

考马斯亮篮法测定啤酒中的高分子量蛋白质

考马斯亮蓝法是将蛋白质浓度和染料与标准蛋白如牛血清白蛋白和γ-球蛋白等产生的颜色变化相关联，但这些标准蛋白和啤酒中的蛋白质并不直接关联。考马斯亮蓝染料复合物与凝胶过滤分离出的啤酒中高分子量氮成分有着显著的相关性，对大多数啤酒来说是很好的线性相关。对于高分子氮来说，用考马斯亮蓝法测定啤酒中的蛋白质比凯氏定氮法更准确。     

4种蛋白质沉淀剂测定乳粉中非蛋白氮含量的效果

目的 通过测定乳粉中非蛋白氮含量,比较四种蛋白质沉淀剂分离蛋白质和非蛋白含氮物质的效果。方法 样品加水溶解后分别用15 % 三氯乙酸溶液、丙酮、20 %乙酸铅溶液和3 % 草酸钾-7 % 磷酸氢二钠溶液、乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液沉淀蛋白质,同时用三聚氰胺做加标回收,过滤后取滤液消化定氮。结果 三氯乙酸沉淀法计算非蛋白氮含量为0.2036%±0.0002%,相对标准偏差在四种方法中最小,为0.1023%,加标回收率为96.07±2.29%;丙酮沉淀法计算非蛋白氮含量为0.0981 %±0.0050 %,加标回收率在四种方法中最低,为50.56 %±7.90 %;乙酸铅沉淀法计算非蛋白氮含量为0.1372 %±0.0012 %,加标量为79.2mg三聚氰胺/10g样品时,乙酸铅沉淀法加标回收率比三氯乙酸沉淀法更稳定,为96.57%±1.07%;乙酸锌沉淀法计算非蛋白氮含量为0.3466 %±0.0100 %,加标回收率为86.81 %±2.87 %。结论 三氯乙酸沉淀法结果准确度和稳定性较其他三种方法更好,但受到加标量的影响。     

蛋白质定量检测方法的探讨

综述了凯氏定氮法、考马斯亮蓝法、双缩脲法、Folin-酚法、紫外吸收法、BCA法、近红外光谱技术、电泳法及数字图像法等主要的蛋白质定量检测方法,分别介绍了各方法的原理、特点及应用,说明了其优缺点和适用范围,并通过实例对各种蛋白质的检测方法进行了探讨。     

低浓度小分子多肽含量测定方法的比较研究

采用考马斯亮蓝法、双缩脲法及紫外分光光度法对还原型谷胱甘肽含量测定进行比较研究,结果表明,紫外分光光度法对还原型谷胱甘肽的测定结果较考马斯亮蓝法和双缩脲法均要好。通过紫外分光光度法进行稳定性、精密度、重现性及回收率试验,结果显示,4个验证试验的相对标准偏差均小于5%。通过乙酸、乙醇和Na Cl 3种干扰物试验分析,研究发现:乙酸对还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量测定结果影响较大,其次是乙醇,而Na Cl对还原型GSH含量无影响,表明酸和醇类物质均会影响紫外分光光度计法对低浓度小分子多肽含量测定结果。     

考马斯亮蓝法检测不同乳中乳清蛋白含量

目的建立考马斯亮蓝法(coomassie brilliant blue method, CCB)检测乳品中蛋白质的方法,并对几种常见乳中总蛋白质含量及乳清蛋白含量进行检测比较。方法用考马斯亮蓝G-250显色,以牛血清蛋白为对照品,采用可见分光光度法在检测波长595nm处测定各种乳中蛋白质的含量。结果该方法在0.005～0.1 mg/mL范围内与吸光度呈现良好的线性关系(r=0.9995),回收率为99.45%、相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.03%;不同种类乳中蛋白质含量存在差别,乳清蛋白占比也有很大的不同。结论考马斯亮蓝法检测蛋白,显色灵敏,具有简便,快捷,成本低等特点。各种乳蛋白检测比较中,马乳的乳清蛋白占比最接近母乳,这为马乳的进一步开发提供了新的理论基础。     

浅谈蛋白质含量的定量检测方法

综述了凯氏定氮法、紫外吸收法、双缩脲比色法、Folin-酚法、考马斯亮蓝法、BCA法、磺基水杨酸沉淀法、滴定法及电泳法等主要的蛋白质的定量检测方法。同时,分别介绍了各方法的原理和特点,以及评价了各种方法的特点和适用条件。它为对实际测定中如何适宜的检测方法提供指导方向。     

凝胶柱层析——考马斯亮蓝染色法测定牛奶中的真蛋白质

采用凝胶柱层析和考马斯亮蓝染色相结合的方法,对多个品种的牛奶进行检测,详细考察牛奶中蛋白质的分子量分布特征,对牛奶不经过预处理而直接进行检测.结果表明,牛奶中蛋白质分子量绝大部分集中分布在1×104～7×104u以上和1×104u以下分子量的蛋白质所占的比列很小.综合应用牛奶中蛋白质的分子量分布特征和考马斯亮蓝染色法的特性研发出牛奶蛋白质快速检测仪,该仪器体积小、操作简便、检测速度快、灵敏度高,且能有效消除添加的三聚氛胺、尿素、硫酸铵等无机氮,及水解植物和动物蛋白等小分子多肤氮对牛奶中蛋白质检测的干扰,从而能从根本上杜绝牛奶中掺假蛋白检测问题,可用于现场牛奶真蛋白质快速检测.     

超声辅助提取豆粕水溶性蛋白质工艺优化

在单因素试验的基础上，利用响应面法优化低温豆粕中水溶性蛋白质的超声辅助提取工艺，并比较凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定水溶性蛋白质含量。结果表明：超声辅助提取低温豆粕水溶性蛋白的最佳工艺条件为超声功率500 W、超声时间15 min、料液比1∶30 (g/mL),在此条件下提取的水溶性蛋白质含量为40.96%;凯氏定氮法检测结果高于考马斯亮蓝法。     

乳品真蛋白率的提出及测定

利用三氯乙酸-双缩脲比色法对添加乳清蛋白乳粉的蛋白质量分数进行测定.结果表明,乳清蛋白的加标回收率在89.2%～09%之间,重现性在0.26%～0.98%之间,表明三氯乙酸-双缩脲比色法可以较好地检测出乳中的真蛋白.提出了真蛋白率的概念,并测定出乳粉的真蛋白率范围在78.06%～89.90%之间;液态乳的真蛋白率范围在90.03%～96.25%之间.     

胶原多肽浓度测试方法的比较与分析

通过考查茚三酮法、双缩脲法、福林酚法、BCA法、考马斯亮蓝法、凯氏定氮法和TON法测试胶原多肽质量浓度的准确性、稳定性和易操作性,进而评价这些方法用于多肽浓度测试的适用性。实验结果表明,茚三酮法、双缩脲法、福林酚法、BCA法和TON法可以较准确地测定胶原多肽的质量浓度,其中茚三酮法、BCA法和TON法的检测限值低,分别为0.004、0.02、0.02 mg/mL;双缩脲和福林酚法的检测限值较高,为0.3 mg/mL和0.2 mg/mL。茚三酮法、双缩脲法、福林酚法和BCA法的相对标准偏差较低(6%),表现出较凯氏定氮法和TON法更优的稳定性。此外,茚三酮法和双缩脲法在测试成本和耗时方面具有更强的可操作性。     

乳制品中蛋白质含量测定方法的研究进展

乳制品中含有丰富的营养物质,是人体蛋白质主要食物来源之一。随着经济发展和人民生活水平提高,乳制品消费逐年上升。蛋白质含量是乳制品的重要评价指标,但是目前市场上乳制品种类多样,如何准确测定乳制品中蛋白质含量对于评价乳制品的价值以及规范市场具有重要意义。常见的乳制品中蛋白质含量的测定方法主要包括凯氏定氮法、杜马斯燃烧法、考马斯亮蓝法（Bradford法）、双缩脲法（Biuret法）、福林酚法（Lowry法）和近红外法等。文章通过综述不同蛋白质含量检测方法的影响因素进行方法优化,根据不同方法在实践中的应用,对比分析不同检测方法的优缺点和适用范围,为合理选择乳制品中蛋白质含量的测定方法提供参考依据。     

考马斯亮蓝G250染色法测定啤酒中蛋白质含量

以啤酒为原料,利用蛋白质与考马斯亮蓝显色原理,测定啤酒中蛋白质含量,并对测定条件进行优化研究,实验结果表明：波长在595nm处蛋白质有最大吸收峰,反应时间3～5min为最适宜,SDS对马斯亮蓝测定蛋白质含量有干扰。测定所用的标准曲线方程为：v=0．1296x＋0．0907。考马斯亮蓝G-250法测量蛋白质含量与凯氏定氮法相比较误差范围3％～8％。     

奶粉中蛋白质含量的快速测定

从奶粉中蛋白质的快速检测方法入手,选取了分光光度法中的考马斯亮蓝G-250来进行研究。结果表明,在酸性介质中,蛋白质与考马斯亮蓝G-250溶液反应生成蓝色络合物。该络合物最大吸收波长为594 nm,摩尔吸光系数为3.75×10~(-5)L/(mol·cm),精密度(RSD)为0.55%,相关系数为0.999 3,加标回收率为97.8%。     

干酪乳杆菌蛋白质双向电泳条件优化及图谱建立

采用超声波法和液氮研磨法提取了干酪乳杆菌菌体蛋白质,通过固相pH梯度等电聚焦双向电泳对蛋白质进行分离,并分别利用硝酸银和考马斯亮蓝方法进行染色.对上述不同方法比较结果显示,超声-三氯乙酸/丙酮提取蛋白质方法简便易行,适用于快速制备蛋白质样品,液氮研磨-三氯乙酸/丙酮沉淀法更适合干酪乳杆菌大规模蛋白质提取及组学检测,并且在制备的过程中不发生明显的蛋白质降解的现象.利用液氮研磨-三氯乙酸/丙酮沉淀法制备的干酪乳杆菌蛋白质样品分离效果良好,可获得重复性好和高分辨率的双向电泳图谱,便于后续的质谱及差异蛋白质组的分析,值得同行及相关研究者参考和借鉴.     

考马斯亮蓝法测定核桃水溶性蛋白含量的研究

采用考马斯亮蓝G-250染色法对核桃粗蛋白中可溶性蛋白质含量进行了测定,结果表明,蛋白质浓度为10mg/mL~80mg/mL时与吸光度值有良好的线性关系,考马斯亮蓝G-250染色法简单、快速、灵敏,且相对较为准确,是测定低浓度蛋白质含量的有效方法。通过此方法,测得的核桃水溶性蛋白平均含量为8.37%。