微波辐射固定及其在免疫金标记技术中的应用

应用微波辐射快速固定大鼠胰腺组织和白血病病人骨髓细胞悬液,再按常规制作电镜超薄切片。包埋后超薄切片免疫金标记β细胞中的胰岛素分泌颗粒显示组织细胞结构清晰,标记率高,(图1)。骨髓细胞悬液包埋前免疫金标记和酶反应定位血小板表面糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa)和胞浆内过氧化物酶均呈现阳性结果(图2)。电镜观察结果表明,经微波辐射固定的生物样品能较好地保存细胞的超微结构,抗原性及其酶活性。根据多次反复试验,我们取得的经验是,在进行微波辐射固定生物样品时,电镜样品固定温度和时间以26～28℃,15秒为宜。由于微波辐射加热温度升高很快,我们采用在炉室内四角放置四个盛有     

人类腹泻粪便中小圆形病毒的电子显微镜研究

我们在研究婴幼儿急性胃肠炎和腹泻及成人流行性腹泻的病原学时,用直接电镜和免疫电镜技术,从患者粪便标本中检出了4种小圆形病毒颗粒。粪便标本用生理盐水制成20～50％的悬液(水样便可不稀释),经超声波粉碎处理(振幅4μ,每次30秒钟,共3～5次),3000rpm离心30分钟,上清为被检样品。被检样品制备直接电镜或免疫电镜标本,用3％磷钨酸(pH6.4)做负染色。     

肾组织的低温快速冷冻固定及冷冻置换研究

超低温快速冷冻固定以极高的冷冻速率对生物样品进行固定,可使生物组织结构、组织内可溶性离子及游离性物质得到保存,使被固定后的生物组织仍旧保持于最接近原自然状态。作者对肾组织的超低温快速冷冻固定及冷冻损伤进行了探讨。取雄性大鼠肾皮质用振动切片机切成150～200/μm厚的薄片,采用Reichert-Jung KF-80弹射式快速冷冻仪将切片快速插入经液氮冷冻至-175℃的冷冻剂F22中,再迅速转移到置换液丙酮中,并保持温度在-80℃(34小时);-60℃(48小时);-20℃(12小时)和-4℃(1小时),缓慢升至室温。常规包埋切片并观察。电镜下,从肾皮质表层到30μm深的范围内,组织超微结构保存良好,细胞核、核仁和微绒毛等结构清晰显     

适配器-超速离心法提高电镜检测病毒的灵敏度

通过专用超速离心机将病毒直接离心至载网是重要的提高诊断电镜灵敏度的方法,作者尝试建立适配器-超速离心法实现相同目的。设计制造了外形类似离心管的载网适配器,其内部有一平底的凹槽,可以放置电镜载网,添加病毒悬液后,经过超速离心,能够将病毒粒子直接离心到载网上。利用重组腺病毒和重组腺相关病毒为模式病毒,适配器-超速离心法较悬滴法的病毒检测灵敏度提高了50～200倍;对人腺病毒41型（Ad41）细胞培养物进行电镜检测,灵敏度提高了50倍。如果将免疫凝集法（immune clumping）与适配器-超速离心法相联合进行电镜制样,检测灵敏度较常规免疫凝集法提高1～2个数量级。这些结果说明适配器-超速离心法能够高效地富集病毒,可以应用于病毒的电镜检测工作。     

Ni顺—1,4—聚丁二烯结晶的形态结构

以镍为催化剂,定向聚合得到的顺—1,4—聚丁二烯(Ni—PB)具有较好的分子结构规整性。在适当的低温下,极易结晶。本文详细讨论了Ni—PB的溶胶及凝胶对低温结晶成核及生长的影响。采用燕山石化总公司,胜利化工厂生产的Ni—PB为样品。各样品的顺式含量均在92—96%之间。将0.5%Ni—PB甲苯溶液,在甘油表面上成膜、蒸馏水清洗后,捞在电镜载网上。经-30℃下不同时间结晶后,用OsO_4固定。在H—500型电镜下观察。 Ni—PB在-30℃下结晶的TEM照片给出可以得到尺寸为几+μm的球晶。其生长速率为1μm/min。对于凝胶含量较小的试样,结晶诱导期较长,晶核为单个片层或片层束(图a)。在片层的生长过程中,首先形成宽约为1000—2000A的界面不十分清晰的白色区,为预结晶区。进一步结晶,排列为规整的,有清晰界面的片层。如     

烧冲复合伤血小板的变化及其发生机理的实验研究

本文研究了狗25％Ⅲ度皮肤烧伤复合重度冲击伤后血小板的数量、功能和形态学变化,以及骨髓巨核细胞的病理变化。结果显示,血小板数在伤后1—5天显著减少,第7天有所恢复;血小板粘附率在伤后3—7天明显降低。经光镜、透射电镜和扫描电镜观察,见血小板颗粒减少,胞浆溶解、空泡样变或髓鞘样结构形成。血小板膜复合体、开放管道和滑面内质网均有增生。巨核细胞退变严重,退度率达47—56％有1—5％的巨核细胞被中性粒细胞噬食。巨核细胞的超微结构出现一系列病理变     

一种简单方便的生物组织导电法

用扫描电镜观察的样品要求表面能导电,惯用的方法是在样品表面蒸涂导电层,对于表面起伏大而又容易变形的生物样品,这种方法效果不太好。近年来采用组织导电技术处理生物样品取得了比较好的效果,但一般对镜体污染大增加了仪器维护的麻烦。我们使用多种导电液处理样品在S—100电镜上面进行比较,觉得用四氯化锡导电液处理方法简单对镜体污染小。方法如下:把待观察样品按常规固定后保存在70％酒精中,把SnCl_4放入75％的酒精溶液中配制成5％的酒精四氯化锡导电液。把保存在酒精中的样品捞放入导电液中适当浸泡取出胶合即可观察。如果经过乙腈干燥后再     

微波技术在诊断电镜标本制备中的应用

电镜作为某些疾病的病理检查手段 ,已为广大医务工作者所熟知。但电镜样品的常规制备方法周期较长 ,影响及时诊断。近年来 ,我们将微波照射作为常规技术应用于电镜标本制备 ,进行了大量的工作。结果表明 ,该方法不仅大大缩短了样品制备时间 ,而且用这种方法制备的样品的超微结构完全可以满足电镜诊断要求 ,现已成为本室诊断样品的常规技术。材　　料选用 National NN- 6 80型微波炉 ,分 HI,DEF,MEDHI,MED档 ,样品包括各种肿瘤组织 ,肝 ,肾 ,肺 ,软骨 ,及游离细胞 (血细胞 ,培养细胞 )。1 .标本固定固定液用 4%多聚甲醛 ,或 3%戊二醛 …     

CdSe纳米晶的制备及性能表征

以巯基乙酸（RSH）为稳定剂，在水溶液中合成了稳定的CdSe纳米颗粒，通过选择沉淀得到尺寸为1.8-4.0nm的样品。通过紫外－可见吸收光谱、X－射线粉末衍射（XRD）、透射电镜（TEM）和高分辨透射电镜（HRTEM）对样品的结构及量子限制效应影响下的光学特性进行了表征；将长链的表面活性剂接枝在纳米颗粒表面，从而使只能在水溶液中分散的纳米颗粒在有机溶剂中也能很好地分散，并得到了单个颗粒的高分辨电镜图像。     

应用离子捕捉电镜技术对鸡粪便中病毒的快速鉴定

离子捕捉电镜技术,是用磷酸氢钙(CaHPO_4)通过静电引力将悬浮样品中的蛋白颗粒吸附下来,再用溶解剂将CaHPO_4溶解,使蛋白颗粒离析。其方法分以下几个步骤:一、试剂的制备,(一)、CaHPO_4的制备,将0.3M氯化钙(11.1g Cacl_2.H_2O溶解在200ml蒸溜水)和0.3M磷酸氢二钠(14.2g Na_2HPO_4溶解在200ml蒸溜水)以相同流速(120滴/分钟)分别以两个各自的容器中流入一个盛有100ml蒸溜水的烧杯里,同时用磁力搅拌器搅拌。将粗制的CaHPO_4(呈絮状沉淀)再反复经4次蒸溜水悬浮和沉淀,最后将沉淀的CaHPO_4用0.15M磷酸盐缓冲液(PBS pH7.2)悬浮,保存于4℃冰箱待用;(二)乙二胺四     

苹果在不同贮存环境下细胞超微结构的观察

选用市场上常见的苹果品种：国光、花牛、富士作为材料，每一种苹果分成两份，一份在常温下保存，另一份放在0-4℃左右的冰箱内保存。保存前取样一次，后每隔10d取样一次，共4次取样，每次取样品为果皮和果肉各5-6个。常规透射电镜制样，JEM-1200EX电镜观察。     

二氧化钛纳米颗粒对小鼠单核巨噬细胞超微结构影响的电镜研究

目的：应用电镜观察二氧化钛纳米颗粒（nano-TiO2）对小鼠单核巨噬细胞超微结构的影响。方法：将不同浓度的nano-TiO2溶液加入小鼠单核巨噬细胞（Rawcell）中,在37℃、5%CO2的细胞培养箱中孵育4h,收集细胞,制样后在透射电镜下观察小鼠单核巨噬细胞超微结构的改变。结果：电镜下,nano-TiO2的粒径为20～35nm。致密的nano-TiO2通过内吞进入细胞,当浓度超过200μg/mL时,细胞胞质空泡内吞噬有大量成簇的致密颗粒,细胞核固缩,染色质浓缩、边集,出现早期细胞凋亡改变。     

Ⅰ型糖原储积病患者肝的超微结构改变

糖原储积病Ⅰ型,为遗传性代谢障碍疾病。本文着重报告本病肝细胞超微结构改变特点。材料为2例患儿肝活检标本。经戊二醛、O_SO_4双固定,按电镜样品制备常规脱水、色埋。I_μ薄切片经甲苯胺兰—Pyronin染色,光镜观察定位。超薄切片用铅、铀双染,国产DXB_2-12型电镜观察。光镜下肝细胞明显肿胀,其大小可为正常肝细胞体积2-3倍,排列如植物细胞样(图I)。部分深染肝细胞胞浆内充满致密物,多数肝细胞内脂滴异常增多,其余肝细胞表现程度不同混肿和颗粒性变。电镜下,光镜所见深染细胞为胞质内糖原颗粒大量堆积,其间伴有糖原自噬泡及小泡状滑面内质网(图2),有的肝细胞胞质内大片糖原高度聚集,形成糖原板块(图3),多数肝细胞胞质内脂滴显著增多,脂滴周围常伴随     

应用酪氨酸羟化酶抗体的免疫电镜技术

免疫电子显微镜技术是近二十年发展起来的一种新技术。应用免疫电镜可以进一步揭示亚细胞水平神经组织的超微结构和化学递质之间的形态学关系。免疫电子显微术与常规的电镜制样技术不同,尤其在胚胎样品制备过程中,不仅要考虑到样品应具有较好的超微结构,同时也要考虑到组织切片中抗原活性的保存,要获得比较理想的标本,需根据自己实验要求,摸索出自己最理想的步骤和参数。我们采用了4％多聚甲醛和1％戊二醛磷酸缓冲液,再用单体多聚甲醛固定液的顺序灌流方法,以及在免疫反应中未加清洁剂的措施,有效地兼顾了免疫反应产物和组织保存两方面。     

文昌鱼生殖细胞与辅助细胞关系的电镜观察

文昌鱼是无脊椎向脊椎动物进化的一个重要过渡类型,对它的研究具有理论意义和经济价值。弄清生殖细胞与辅助细胞的关系,有助于对泡生长和卵子成熟控制因子的了解,亦可进一步了解卵巢发育的神经内分泌调控,为人工养殖这种濒临灭绝的珍贵动物提供依据。实验用的文昌鱼(Branchiostoma Belcheri Gray)产于厦门琼头海域,取原始卵巢,用戊二醛和O_sO_4双固定,环氧树脂618包埋,铀、铅双染色,JEM—100CXⅡ电镜观察。在电镜下可见卵巢中有三种细胞:营养细胞、滤泡细胞和各级生殖细胞,前两者统称辅助细胞。营养细胞外形变化颇大,不规整,核较大常有分叶、核仁多个,胞质中含丰富内质网,高尔基复合体     

电镜技术中植物材料的野外取样方法

在使用电镜技术解决农、林生产实践问题的工作中,经常需要野外取样。对于野外取植物样品的方法,多数使用挖取植株或割取器官,保持湿润,运输到实验室后按常规技术操作。这种方法的缺点是运输不方便,而且在运输中改变了植物的生理条件,对于病理学的研究是不适宜的。南京大学1980年提出用戊二醛作为电镜标本保存液的报告。目前这一方法得到较广泛的采用。实验表明,这一方法是可行的。但是过长的保存也会出现髓磷脂像和类脂块等现象。在使用戊二醛作电镜标本保存液这一方法的基础上,我们总结了一套野外取样方法。应用这一方法取得了很好的试验效果。本文仅以泡桐丛枝病研究为例叙述这一方法。     

大鼠肺巨噬细胞iNOS电镜细胞化学定位显示法

目的;对大鼠肺泡巨噬细胞NOS进行细胞内定位显示。方法：由大鼠支气管肺泡灌洗液中获取肺泡巨噬细胞,富集制备成单层细胞爬片。在37℃,5％CO2的二氧化碳培养箱中,用LPS（1g/L）刺激24h以诱导肺泡巨噬细胞NOS表达。采用NADPH－d电镜细胞化学术对肺泡巨噬细胞NOS进行定位显示。结果：活化的AM胞浆内可见大量颗粒状电子密度沉淀。结论：NADPH－d电镜细胞化学方法所显示的AM诱导型NOS是胞浆酶。     

TEM研究微钛0.1%C钢TiN析出和长大

实验用钢采用50Kg非真空中频感应炉冶炼用Si-ea粉和Al为脱氧剂,生钢前加钛。为控制凝固过程冷却速度,浇铸时采用特制的砂模,铁模和水冷铜模。钢的成份为0.10％C,0.012％Ti,0.018％N。电镜观察采用Speed法萃取复型试样。 TEM对不同凝固条件的铸态样品观察表明凝固和随后冷却过程中钛的析出不充分,有相当部分钛固溶在基体中,凝固冷速越快,钛的固溶度越高,随后的热处理过程中既包含着钛以TiN析出,又包含着TiN的进一步长大。照片(1)为铁模样品经1000℃,1100℃,1200℃保温2小时淬火,TiN沉淀相的电镜照片,可见温     

温度对制备超薄切片的影响

保存生物样品的生活状态和制备出完整而清晰的超微结构，是保证电镜观察效果的前提，而近几年的样品制备中，同批样品常伴有结构模糊、反差弱的现象发生，究其原因，只有前固定不是本实验室所为，是否与固定温度有关，香港大学徐是雄博士认为：过低温度会造成细胞内微管的消失。但传统的固定温度是0℃～4℃，有关动、植物样品的常规固定最佳温度及如何利用冰箱固定保存样品，-18℃冷藏样品怎样处理才能得到接近生活状态的超微结构，到目前为止，研究报道的甚少。本文仅就作者多年来，常规制样中发现的值得同仁注意的现象设计了不同的实验方案，探讨温度在样品制备中的作用，以增加优质超薄切片高重复率。     

激动剂对肾上腺髓质细胞分泌的作用

肾上腺髓质细胞在刺激分泌耦联过程中 ,胞质内游离 Ca2 + 浓度升高是引起肾上腺素和去甲肾上腺素释放的原因之一。胞内 Ca2 + 浓度升高的原因 ,可以是质膜上钙离子通道开放 ,导致细胞外 Ca2 + 内流 ,也可以是细胞内钙库向胞内释放 Ca2 + [1] 。本实验通过激动剂作用于分离的肾上腺髓质细胞 ,以引起离体细胞的刺激分泌耦联过程 ,运用电镜 X射线显微分析技术测量用药过程中颗粒内钙含量的变化 ,并对嗜铬颗粒数进行形态计量 ,结合测量细胞悬液中的肾上腺素含量以反映细胞的分泌水平 ,进而从肾上腺素分泌和颗粒钙含量二者变化关系来探讨激动剂…