AEC柱前衍生化法测定复印纸中葡萄糖的含量

建立3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)柱前衍生高效液相色谱法测定复印纸水解液中葡萄糖含量的方法。以3-氨基-9-乙基咔唑为柱前衍生化试剂,Thermo C18色谱柱为分离柱,乙腈和乙酸铵水溶液为流动相,在波长245nm处,用高效液相色谱分析复印纸中的葡萄糖含量。该方法具有操作简单、灵敏度和准确度高等优点,为复印纸中葡萄糖含量的测定提供了一种实用的方法。     

柱前衍生化RP-HPLC测定中药野马追中的氨基酸

采用柱前衍生反相高效液相色谱法(RP HPLC)测定了江苏地产药材野马追茎叶及其花蕾中的总氨基酸和游离氨基酸。用邻苯二甲醛(OPA)与一氯甲酸芴甲酯(FMOC)联用全自动柱前衍生化反相高效液相色谱仪,liozosphezeC18柱,pH=7.2的醋酸钠缓冲溶液和甲醇为流动相,流速为1.0mL/min,荧光检测器,波长为Ex=340nm、Em=450nm,样品中的氨基酸在30min内得到分离和检测。结果表明:野马追茎叶及其花蕾中含17种氨基酸,游离氨基酸17种,总氨基酸含量分别为2.40%和6.51%,游离氨基酸含量分别0.185%和0.508%,半胱氨酸(cys)和谷氨酸(glu)含量较高,其中7种为人体必需氨基酸。     

磺酰异氰酸酯柱前衍生化法测定水分含量的方法

该发明属分析化学领域,涉及磺酰异氰酸酯柱前衍生化法测定水分含量。以磺酰异氰酸酯类化合物为衍生化试剂,对水进行柱前衍生化之后,加羟基或巯基化合物终止反应。所提供的衍生化方法测定快速、准确、简便、易于推广、成本低,还具有反应条件温和、副反应少、过量衍生化试剂不干扰水分的测定等优点,     

柱前衍生化HPLC法测定DHA软胶囊中牛磺酸的含量

用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生高效液相色谱法,运用C18色谱柱为固定相,以0.05mol/L乙酸钠溶液+甲醇+乙腈=45+45+10为流动相,检测波长330nm,测定某DHA软胶囊的牛磺酸。结果衍生化反应迅速,分离效果好,53.6～268 ng范围内与色谱峰面积与进样量呈良好的线性关系。回归方程:C=-0.1368+4.663*10-6×A,r=0.9993,加标回收率为98.7%～107.4%,RSD为3.3%。     

柱前衍生—RP-HPLC法测定吸附精制百白破疫苗中的醛类

吸附精制百白破疫苗 (APPDT)暂行规程所载的戊二醛测定法为希夫氏试剂 (Schiff's reagent)法 ,该试剂不能将戊二醛与甲醛区分开来。采用柱前衍生 - RPHPL C法测定 APPDT中的醛类 ,能将 APPDT中的甲醛、戊二醛完全分离并加以测定 ,其结果准确可靠 ,该法亦可用于其它制品中醛类的测定。     

人肝细胞培养液中卡维地洛对映体柱前衍生化RP-HPLC法测定

本文建立柱前衍生化高效液相色谱法测定卡维地洛浓度。采用GITC为柱前衍生化试剂,反相高效液相色谱法检测卡维地洛衍生物浓度,选用Hypersil BDS C_(18)柱(4. 6 mm×150 mm,5μm),以乙腈-0.02 mol/L磷酸氢二钠(25∶75),以分析纯磷酸调pH值至4.3为流动相,流速:1.0 mL/min,进样量:5μL。荧光检测激发波长:285 nm,发射波长:340 nm。结果右旋体和左旋体的保留时间分别为3.63 min和4.77 min,分离度为3.1,标准曲线线性范围4.2～20 mg/L,人肝细胞培养液中最低检测限为0.066 mg/L。该法操作简单,可用于卡维地洛对映体的分离和含量测定。     

HPLC柱前衍生化测定泡腾片中牛磺酸含量

建立测定泡腾片中牛磺酸含量的方法。牛磺酸经邻苯二甲醛衍生,采用Diamondsil C18（5μm×250mm×4．6mm）色谱柱分离;流动相为乙腈-甲醇-水（1：1：8）;流速1．0mL·min^-1;波长330nm．外标法定量。牛磺酸在40μg·mL^-1～200μg·mL^-1峰面积与进样量的线性关系良好（R^2=0．9991）,回收率在98．85％～101．15％,RSD=0．749％。本法精密度高,重现性好,定量准确,可用于测定泡腾片中牛磺酸的含量。     

柱前衍生化HPLC法测定CHO细胞培养上清中氨基酸浓度

以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰-亚氨基甲酸酯为柱前衍生化试剂,结合HPLC技术,首次建立了定量分析CHO细胞培养上清中氨基酸浓度的方法.选用Agilent 1260型高效液相色谱仪,AccQ-TagTM柱,以流动相A和流动相B[乙腈-水（60∶40,体积比）]进行梯度洗脱,荧光激发波长为250 nm,发射波长为395 nm,柱温为42.5℃,进样量为5uL.结果表明：21种氨基酸的线性回归系数均大于0.99,连续6次测定培养上清中氨基酸组分峰面积RSD均小于5％;21种氨基酸9次测定的平均加标回收率为96.8％,RSD为4.93％.该方法快速、简便、重复性好、结果准确,符合动物细胞培养上清中氨基酸分析的要求.     

柱前衍生化HPLC法测定香椿子多糖的单糖组成

建立PMP(1-苯基3-甲基-5吡唑啉酮)柱前衍生化HPLC法测定香椿子多糖的单糖组成。先用三氟乙酸水解香椿子多糖,再用PMP柱前衍生,KH2PO4-Na OH缓冲液(p H值6.8)-乙腈(81∶19)等度洗脱,HPLC法测定香椿子多糖中单糖组成以及物质的量比。香椿子多糖主要由D-甘露糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸、D(+)无水葡萄糖、D-(+)-木糖、L-阿拉伯糖等组成,它们的物质的量比约为0.18∶0.15∶0.08∶0.09∶1.03∶0.83∶1.59。本实验摸索的方法条件适用于研究香椿子多糖中单糖组成。     

柱前衍生HPLC法测定人凝血因子Ⅷ中氨基酸的含量

目的建立人凝血因子Ⅷ中氨基酸含量的柱前衍生HPLC检测方法。方法采用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(6-aminoquinoline-N-hydroxysuccinimide carbamate,AQC)在一定条件下与氨基酸形成稳定的衍生产物(柱前衍生),再通过高效液相色谱仪,采用氨基酸分析柱(150 mm×3. 9 mm,4μm)检测,以不同流动相进行梯度洗脱[在《中国药典》三部(2015版)的基础上进行调整],柱温为37℃,流速为1. 0 mL/min,检测波长为248 nm。同时验证方法的系统适应性、专属性、线性范围、精密性及准确度。结果甘氨酸及盐酸赖氨酸均可在25 min内获得较好分离,与相应相邻色谱峰之间的分离度均 1. 5,拖尾因子在0. 95～1. 40之间;各样品的氨基酸种类均能正确检出,混合样品与单纯样品出峰时间保持一致,且供试品溶液与对照品溶液主峰保留时间相对偏差均2%;当甘氨酸浓度在12. 5～62. 5μg/mL,盐酸赖氨酸浓度在4. 0～20. 0μg/mL时,与相应氨基酸与内标峰面积比呈良好的线性关系,相关系数(r)分别为0. 999 9和0. 999 8;甘氨酸及盐酸赖氨酸重复性的相对标准偏差(RSD)分别为0. 4%和0. 5%,中间精密度RSD分别为1. 3%和1. 0%;两种氨基酸的回收率均在95%～105%范围内,RSD均≤2%。结论建立的方法具有良好的专属性、精密性及准确度,可用于测定人凝血因子Ⅷ中的氨基酸含量。     

柱前衍生化高效液相色谱法测定百合中的氨基酸含量

建立了反相高效液相色谱法测定百合中氨基酸含量的方法。采用HypersilODS2C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相A乙酸钠+四氢呋喃+三乙胺;流动相B:乙酸钠+甲醇+乙腈,柱温35℃,检测波长330nm。梯度洗脱程序为(t(梯度洗脱时间),B(流动相B)%)为(22,40);(23,60);(23.6,60);(26,65);(26.1,70);(26.6,80);(31.9,90);(32,95);(39,100);(40,0)。测定结果表明,在此实验条件下能使百合中13种氨基酸在40min内得到较好的分离,特别是脯氨酸能得到很好的分离。除trp、gly外,其他氨基酸具有较好的线性(相关系数为0.8985～0.9997)和重复性(相对标准偏差≤5.0%)。该方法简便实用,实际样品分析结果令人满意。     

RP-HPLC法测定注射用盐酸头孢替安的含量

建立了反相液相色谱测定注射用盐酸头孢替安含量的方法。采用COSMOSIL柱(5μm,250 mm×4.6mm),流动相为磷酸盐缓冲液-乙腈(88∶12),流速为1.5 mL/mim,检测波长为254 nm。外标法定量,盐酸头孢替安在195.8～783.3μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系,线性回归系数r=0.999 9,平均回收率为99.27%,RSD=0.61%(n=9)。     

用柱前衍生CE-ECL法测定茶叶样品中茶氨酸的含量

利用自制的交联壳聚糖修饰毛细管为分离毛细管,采用毛细管电泳-电致化学发光法(CE-ECL)对六种常见商品茶叶中茶氨酸含量进行测定。在最优实验条件下,茶氨酸衍生物在5 min之内达到基线分离。在5.0~200μM浓度范围内,茶氨酸衍生物的浓度与其电泳峰强度呈良好的线性关系(R~2=0.9952),检测限为2.8μM。在75μM浓度水平上,用茶氨酸纯品进行衍生反应并平行测定6次,其电泳峰高和迁移时间的相对标准偏差分别为2.49%和1.14%。此外,采用标准加入法对几种茶叶中的茶氨酸含量进行了实样测定,结果表明白茶、红茶、龙井茶、绿茶、铁观音茶和普洱茶中茶氨酸的测得值分别为1.53%、0.91%、0.61%、0.37%、0.28%和0.14%(以干茶样的质量比计算)。同时,采用白茶样品进行了加标回收实验,加标回收率为105.3%。该方法快速、简便,可适用于不同种类商品茶叶中茶氨酸含量的测定。     

水苏碱的柱前衍生化HPLC测定

选择含水苏碱的中药复方制剂前列泰片为对象 ,研究水苏碱的柱前衍生化HPLC测定方法。以对溴基溴化苯乙酮为衍生化试剂 ,18 冠醚 6为相转移催化剂 ,流动相为V(甲醇 )∶V(水 )=75∶2 5 ,检测波长 2 5 4nm ,用外标法定量。线性范围 0 5～ 5 μg(n =5 ) ,相关系数r =0 9992 ,平均回收率 10 0 1% (n =3) ,相对标准偏差 (RSD)为 0 6 4 %。重现性好 ,灵敏度高 ,为中成药中水苏碱的含量测定提供了参考方法。     

柱前衍生化液相色谱法测定牛血清中游离氨基酸含量

目的建立牛血清中18种游离氨基酸含量的柱前衍生化液相色谱测定方法,并进行验证。方法采用乙腈沉淀方法去除血清样品中的蛋白,以异硫氰酸苯酯(phenylisothiocyanate,PITC)在三乙胺碱性条件下衍生游离氨基酸,采用氨基酸分析柱(Sepax AAA,250 mm×4.6 mm ID)及乙腈-醋酸钠缓冲体系梯度洗脱分离18种目标组分,紫外检测器波长为254 nm。对建立的方法进行重现性、准确性和精密性验证,并确定方法的线性范围及检测限。结果18种游离氨基酸在60 min内完成分离,各目标组分在0.5~2.5μmol/L浓度范围内呈良好的线性关系,方法检测限在0.019~0.163μmol/L之间,相对标准偏差(RSD)在0.42%~2.28%之间。准确性和精密性试验中检测各组分的平均回收率在93.10%~101.61%之间,RSD在0.19%~3.82%之间。结论采用PITC柱前衍生化液相色谱法可实现牛血清中18种游离氨基酸的含量测定,该方法简便易行,重现性、准确性及精密性良好,可为动物营养及生理研究提供检测手段。     

柱前衍生化-毛细管气相色谱法分析井冈霉素A含量

建立了以N,O-双（三甲基硅烷基）乙酰胺（BSA）作衍生化试剂,对井冈霉素A进行气相色谱-FID分析的方法,采用HP-5 MS毛细管色谱柱,进样口温度240℃,检测器温度280℃,采用外标法对井冈霉素原药定量分析,衍生物在4．4-71mg／L范围内呈良好的线性关系（r^2为0．9983）。仪器最低检出质量浓度为4．4mg／L,该方法变异系数为0．29％,回收率为98．46％-101．32％。     

2,4-二硝基氟苯柱前衍生化法测定普瑞巴林

利用2,4-二硝基氟苯为柱前衍生剂,建立了用高效液相色谱法测定普瑞巴林的方法。考察了光、反应温度、摩尔比和反应时间对衍生化反应的影响,确定了最佳衍生反应条件:在65℃水浴中避光反应75min。色谱柱为C18,流动相为50mmol·L-1KH2PO4(pH=3.0)/乙腈(30/70,v/v),检测波长为360nm,流速为1.0mL·min-1,柱温为35℃。实验结果:在8～48μg·mL-1范围内呈较好的线性关系(r=0.9998),回收率(100.03±1.10)%(n=9),不同浓度下日内精密度0.82%、0.77%和1.87%,8h内稳定性良好(RSD=1.92%),检测限低至0.8ng·mL-1。实验表明该方法简便、快速、准确、灵敏。通过对该方法的实际应用,三批样品测定值的RSD分别为0.59%、0.68%和1.04%,表明该方法能够用于测定普瑞巴林的含量。     

DNPH柱前衍生RP-HPLC测定含氟乳液聚合物中微量甲醛

通过加盐破乳从含氟乳液聚合物中提取水解的游离甲醛,以DNPH为衍生试剂,反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定其中甲醛含量,找出最优的衍生化条件,该方法对聚丙烯酸(酯)等含氟乳液聚合物中游离甲醛含量测试具有较好的适用性,在8～200 mg.kg-1的浓度范围内呈良好线性,相关系数为0.99976,其相对标准偏差(RSD)为1.20%,方法检出限(3 S/N)为1.0 mg/kg,回收率在80%～106%之间。