一株紫杉醇产生菌发酵条件的初步研究

研究了一株内生真菌Fusarium mairei UH23发酵产紫杉醇的工艺条件。实验结果表明最佳培养条件为:温度26℃,发酵起始pH值7.0,接种量5%,装液量250 mL三角瓶装液60 mL,发酵周期12天。筛选出最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为硝酸铵。在上述条件下发酵,紫杉醇产量达(286.4±20.3)μg/L,较优化前提高10.2%。     

一株藏红花内生真菌CSL-13次级代谢产物的研究

研究一株藏红花内生真菌CSL-13固体发酵产物的化学成分。利用硅胶柱层析、凝胶Sephadex LH-20柱层析、重结晶等方法从CSL-13发酵产物中分离得到3个化合物,通过核磁、质谱等波谱分析技术以及文献数据对照,鉴定其结构分别为:Beauvericin(1),Prolipyrone C(2),过氧化麦角固醇(3)。三个化合物均首次从藏红花内生真菌中分离得到。     

雷公藤内生真菌Pestalotiopsis disseminata次级代谢产物研究

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及PHPLC等手段对雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)内生真菌广布拟盘多毛孢(Pestalotiopsis disseminata)的发酵次级代谢产物进行分离纯化,通过理化性质及波谱学数据分析对化合物结构进行鉴定。结果表明,从内生真菌Pestalotiopsis disseminata的次级代谢产物中共分离并鉴定了7个单体化合物,分别为7-羟基-5-甲氧基-4,6-二甲基苯酞(Ⅰ)、腺苷(Ⅱ)、尿苷(Ⅲ)、邻苯二甲酸二正丁酯(Ⅳ)、邻苯二甲酸二异丁酯(Ⅴ)、1,1′-二(1,1′-羧基乙基)醚(Ⅵ)、赤藓醇(Ⅶ),其中化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ为首次从该属真菌中分离得到,化合物Ⅰ、Ⅴ为首次从该种真菌中分离得到。     

红景天内生微生物代谢产物化感作用研究

研究红景天内生菌Fusarium sp.HJT-P-5代谢产物.采用薄层层析色谱(TLC)、正/反相柱色谱、凝胶柱色谱、以及高效液相色谱(HPLC)等多种现代分离技术对HJT-P-5代谢产物进行分离纯化,结合理化性质和核磁共振波谱数据进行结构鉴定.从HJT-P-5乙酸乙酯萃取物中分离得到4个单体化合物,选取模式植物拟南...     

罗汉果内生真菌SG一69次级代谢产物的研究

罗汉果内生真菌SG-69的发酵培养液和菌体通过硅胶柱色谱、SephadexLH-20凝胶柱色谱和重结晶等方法分离,得到6个化合物,运用IR、。HNMR．13CNMR等波谱技术,结合化合物的理化性质、波谱数据与文献数据对照鉴定了其结构分别为麦角甾-5,7,22-三烯-3β一醇（1）、对羟基苯甲酸（2）、白僵菌酮（3）、苯乙酸（4）、尿囊素（5）和甘露醇（6）,其中尿囊素（5）首次从罗汉果内生真菌中发现。研究结果表明,罗汉果内生真菌的次级代谢产物与宿主罗汉果化学成分有很大差异,有待进一步研究。     

西南手参内生真菌的分离鉴定及其代谢产物抗肿瘤活性筛选

对西南手参内生真菌进行了分离纯化及形态学和分子学鉴定,并以CDC25A/CDC25B磷酸酶和PD-1/PD-L1作为抗肿瘤活性筛选靶点,对内生真菌代谢产物的抗肿瘤活性进行了筛选。结果表明,从西南手参根部分离得到20株内生真菌,分别属于镰刀菌属(Fusarium)、壳隔孢属(Camarosporium)、青霉菌属(Penicillium)、土赤壳属(Ilyonectria)、柔膜菌属(Hyalodendriella)、曲霉属(Aspergillus)、栓菌属(Trametes)、胶膜属(Tulasnellaceae)、油瓶霉属(Lecythophora)、红菇属(Russulaceae)、丝膜菌属(Cortinarius)等11个属;菌株G.orc-10的代谢产物对CDC25A/CDC25B酶活具有明显的抑制活性,菌株G.orc-05、G.orc-06的代谢产物对PD-1/PD-L1结合作用具有明显的抑制活性。揭示西南手参内生真菌代谢产物可能具有抗肿瘤药物筛选潜力,为从西南手参内生真菌代谢产物中发现抗肿瘤药物提供了科学依据。     

侧柏内生真菌的分离鉴定及抗菌活性筛选

采用组织分离法从侧柏的根、茎、叶中分离获得内生真菌110株,经形态观察将其中103株鉴定分类为4个目、6个科、15个属,未产孢7株;内生真菌以链格孢属为优势属,茎叶中内生真菌的株数、种类多于根中.通过与苹果腐烂病菌、葡萄黑痘病菌等4种植物病原真菌平板对峙培养,从分离的内生真菌中筛选出21株(占总分离株数的19.1%)有拮抗活性的菌株,其至少对1种植物病原真菌有生长抑制作用,活性菌株主要分布在链格孢属,其抗菌活性成分值得进一步研究.     

双（4-甲苯基）苯基硫化膦定量分析研究

以自制双(4-甲苯基)苯基硫化膦(BMPPS)粗品为原料.经多次重结晶提纯后,用薄层色谱(TLC)、高效液相色谱(HPLC)进行分析,纯品BMPPS的纯度为99.2%,可用作定量分析对照品.对纯品UV扫描发现,BMPPS的吡啶溶液在303nm处有稳定吸收,在浓度为8×10-4～4×10-3mol/L范围内吸光度与浓度呈良好的线性关系,回归方程为:y=190.6x 0.377,r=0.997 8.加标回收率为98.5%～103.8%,方法重现性良好,可用作合成BMPPS粗品的定量分析.     

白花前胡内生菌的筛选及抑菌活性研究

目的:筛选白花前胡的根中具有抑菌效果的内生菌,利用LC-MS技术鉴定其代谢产物。方法:以微量稀释法评价不同的内生菌株对金黄色葡萄球菌以及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌效果,采用HPLC技术分析菌株以及白花前胡代谢产物的差异,以LC-MS分析技术分析菌株与白花前胡的相同代谢产物。结果:内生真菌MG-1对金黄色葡萄球菌以及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度达到0.059 mg/mL,利用LC-MS鉴定其共有代谢产物,分别为紫花前胡素、珊瑚菜内酯、白花前胡丁素。结论:本实验从富含香豆素类化合物的白花前胡中筛选具有抑菌作用的内生菌,为扩大药用微生物资源,筛选具有抗菌活性的新颖化合物提供了借鉴。     

照山白内生真菌的分离及化学成分高分辨质谱鉴定

从泰山产的照山白叶组织中分离到内生真菌,探究内生真菌的化学成分。采用微生物形态学观察鉴定分离到的内生真菌,并结合高效液相-高分辨飞行时间质谱技术鉴别照山白内生真菌的化学成分。从泰山野生照山白新鲜叶片中分离得到2株内生真菌,其中YF3-1初步鉴定为镰刀菌属(Fusarium sp.)。内生真菌YF3-1乙酸乙酯提取物中共鉴别出化学成分34种,正离子模式碎片电压175 V鉴别出24个化合物;负离子模式碎片电压175 V鉴别出10个化合物。高效液相-高分辨飞行时间质谱分析方法可快速、高效地对照山白内生真菌乙酸乙酯提取物进行成分分析,为筛选药物成分、产品质量控制提供可靠的科学依据。     

红豆杉内生真菌产油脂的初步研究

利用苏丹Ⅳ染色法对42株红豆杉内生真菌进行产油脂的研究,用光学显微镜观察发现18株内生真菌中含有油脂粒,占总数的42.9%;对含有油脂粒的内生真菌,进一步采用Folch法提取并测定菌株油脂产率,发现有6株内生真菌的油脂产率达到15.0%以上,其中最高的油脂产率为25.2%。该研究为红豆杉内生真菌产油脂的进一步研究筛选出了目标菌株,并为红豆杉内生真菌油脂的提纯分离奠定了基础。     

半边旗抗肿瘤活性成分5F对照品的制备和鉴定

制备并鉴定了半边旗抗肿瘤活性成分11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19-酸(5F)的对照品.采用二氧化碳超临界萃取、有机溶剂萃取、柱层析、重结晶方法进行分离、纯化以制备半边旗5F化合物单体;采用TLC、HPLC-MS检测杂质;采用HPLC峰面积归一化法测定纯度;采用理化性质、波谱特征鉴定其化学结构.结果表明,从半边旗地上部分的二氧化碳超临界萃取物中分离得到纯度为99.2%的5F对照品.该对照品可以作为半边旗药材以及主要成分为5F的药物制剂含量测定的对照物.     

叶底珠抑菌活性内生真菌的筛选及鉴定

内生真菌存在于植物中,代谢产物十分丰富,具有多种生物活性,是新化合物、新药源的潜在资源。叶底珠通常根部入药,用于治疗风湿腰痛、四肢麻木和小儿疳积等疾病,对神经衰弱、急性肝损伤等也有一定的疗效。本文主要从叶底珠中分离筛选具有抑菌活性的内生真菌,并对其进行鉴定。采用平板培养法从叶底珠中分离内生真菌,通过滤纸片扩散法考察这些内生真菌的抑菌活性。对具有良好抑菌效果的内生真菌进行培养观察和ITS序列测定,鉴定其归属。从健康植株中分离到41株内生真菌,其中2个菌株的提取液对白色念珠菌的抑制效果最好,并发现其对另外7种病原菌具有不同程度的抑制作用。通过鉴定,确定菌株G11为球毛壳菌(Chaetomium globosum),菌株D11为枝细枝孢菌(Cladosporium ramotenellum)。从叶底珠中分离到2株具有较好抑菌作用的内生真菌,这些具有抑菌作用的内生真菌可用于生物制药和农业产业,值得进一步研究。     

半佛纳米微丸中厚朴成分的分析

通过薄层色谱法(TLC)定性分析半佛纳米微丸中厚朴成分,高效液相色谱法(HPLC)测定佛手和半佛纳米微丸中厚朴酚与和厚朴酚成分的含量,并制定含量控制标准。在薄层色谱法供试品色谱中,在与对照品及对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,阴性对照液无干扰。高效液相色谱法厚朴酚:y=68830x-170805(r=0.9996),线性范围为12~240μg/m L。和厚朴酚:y=85428x-81286(r=0.9997),线性范围为5.6~112μg/m L。微丸中厚朴酚与和厚朴酚含量分别为0.1384±0.01076,0.0666±0.005218。结果表明,采用的薄层色谱法与高效液相色谱法简便、灵敏可靠,可以有效用于半佛纳米微丸的质量控制。     

微生物发酵法生产紫杉醇的研究进展

微生物发酵生产紫杉醇由于其环境友好、工艺简单、成本低廉的优势,近年来被认为是解决紫杉醇生产原料来源危机的良好方法。由于单位发酵液中紫杉醇产量太低,迄今为止尚没有一株可以进行工业化生产的产紫杉醇菌株问世。本文就微生物发酵法生产紫杉醇的研究现状进行了总结分析,主要包括紫杉醇产生菌的筛选、发酵培养基的优化、微生物体内紫杉醇合成相关酶基因的克隆及产紫杉醇菌种的改良。     

角果木内生真菌代谢产物的分离鉴定

通过多种色谱分离方法对角果木根部真菌Fusarium sp.JG13代谢产物的化学成分进行研究,从其发酵液中分离得到三个化合物,利用波谱等方法分别鉴定为麦角甾-5,7,22-三烯-3β-醇(1),3-(4-甲苯氧基)-丙酸(2),对羟基苯乙酮(3)。所有化合物均为首次从角果木真菌发酵产物中分得。     

巴戟天及其炮制品的成分比较研究

探究了巴戟天在炮制前后的化学成分变化。采用HPLC法考察巴戟肉盐炙前后化学成分的变化。用三种溶剂(蒸馏水、95%乙醇和氯仿)提取巴戟天及盐巴戟天样品,并比较炮制前后三种提取液成分的变化。巴戟肉经盐炙后,在三种提取液的HPLC图谱中,均出现了新的色谱峰,说明有新的成分产生;同时,盐炙品中多个色谱峰面积明显降低,说明主要成分含量发生了变化。     

鬼针草茎、叶微生物发酵前后总黄酮HPLC色谱图的比较研究

对鬼针草茎、叶经微生物发酵前后总黄酮HPLC色谱图进行了分析比较。采用Welch materials-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.2%甲酸水溶液进行梯度洗脱,检测波长360 nm,得HPLC色谱图,再对各色谱图的各色谱峰的相对率进行分析比较。结果鬼针草茎、叶发酵前后HPLC指纹图谱有较明显的改变,各吸收峰相对率也有较显著的改变。微生物发酵使鬼针草总黄酮中某些化学成分发生了生物转化,其化学成分的组成有较显著的变化。     

内生真菌代谢产物球毛壳菌素A的液相色谱分析

[目的]内生真菌代谢产物球毛壳菌素A具有优异、广谱的抑菌活性,具备良好的新型杀菌剂的开发前景。为了更好的分析发酵过程母液中球毛壳菌素A的含量,采用反相高效液相色谱法,建立了内生真菌代谢产物球毛壳菌素A定量分析方法。[结果]经梯度洗脱优化出的色谱条件:使用DuPont ZORBAX ODS C18色谱柱,以乙腈为流动相A、水为流动相B,梯度条件:(A)0~10 min,20%~25%;10~20 min,25%~40%;20~55 min,40%~55%;55~75 min,55%~75%;75~85 min,75%~90%。流速为1.0 mL/min,柱温:25℃,波长为254 nm。[结论]该方法精密度为1.49%,重现性为5.41%,可以作为球毛壳菌发酵优化过程中代谢产物球毛菌素A的检测技术。     

青岛海域鲍鱼内生真菌代谢产物活性筛选探究

以开放实验的形式探究海洋内生真菌的分离纯化实验操作,锻炼学生微生物实验技术中的无菌操作、菌种的分离纯化过程,进而通过发酵条件的优化培养对海洋真菌的次级代谢产物进行初步的研究,使学生进一步了解环境微生物中真菌发酵条件的调控和次级代谢产物的应用。通过微生物开放实验分离纯化出4株来源于鲍鱼的海洋内生真菌A1、A2、A3和A4,选择菌株A1通过优化培养发现其RICE培养基的次级代谢产物量较大,且有较好的抑菌活性。开放实验既提高了学生科技创新意识,又使学生接受了初步的科研训练。