基于LTQ-Orbitrap检测粮食及其制品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇

文章建立了基于LTQ-Orbitrap测定粮食和粮食制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇的方法。本法检出限分别为0.150 mg/kg和0.100 mg/kg,方法的加标回收率为83.0%~105%,RSD为1.5%~6.9%,具有灵敏度高、定性准确的优点。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫分析核心试剂特异性单克隆抗体的研制与特性研究

采用1,1’-羰基二咪唑(CDI)活化法成功将脱氧雪腐镰刀菌烯醇分子上C-3和C-15位羟基与载体蛋白赖氨酸的氨基共价偶联得到免疫原DON-BSA和包被原DON-OVA,并用三硝基苯磺酸法对合成结果进行鉴定。以人工抗原免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/O鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和多次亚克隆,得到了1株能稳定分泌脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗体的单克隆细胞株1D5,并制备单克隆抗体腹水。经检测该抗体亚型为IgG1,亲和力常数Ka为8.33×107L/mol,交叉反应的试验结果显示该抗体与其他真菌毒素无交叉反应率,稳定性良好,为粮油食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫快速检测技术建立及产品研发提供了关键试剂材料。     

浙江大学揭示ATP结合蛋白在赤霉病菌致病和生长中的机制

正近年来,由禾谷镰孢菌复合种(Fusarium graminearium complex)引起的赤霉病已经成为威胁我国小麦安全生产最重要的病害,病菌产生的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON,也称呕吐毒素)也严重危害人畜健康,严重影响农产品质量安全。为此,深入理解病菌的致病机理和毒素合成机制对病害防控有重要的理论和现实意义。近日,浙江大学生物所赤霉病防控研究团队在New Phytologist上发表题为"The ATP-     

高效液相色谱法用于小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测与去除的研究

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是小麦中常见的一种真菌毒素,影响食品安全。本文选用8种市售小麦进行Na_2CO_3溶液浸泡去除DON,采用高效液相色谱对小麦粉中DON含量进行检测对比分析。结果表明在100～5000 ng/mL浓度范围内,DON浓度和其对应峰面积呈良好线性关系,线性回归方程为y=77.682x-1505.7,R~2=0.9999;8种小麦粉中有6种DON含量高于1000μg/kg,经Na_2CO_3溶液浸泡去除后,均降低至国家标准以下,原小麦粉中DON含量越低其去除效果越好,最高去除率可达76.2%,平均去除率为71.5%。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇的快速分离纯化及其抗体制备

采用高速逆流色谱法结合高效液相色谱法从禾谷镰刀菌固体发酵产物中分离纯化脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)。先用高速逆流色谱在以乙酸乙酯-水(1∶1,体积比)为两相溶剂系统、温度为25℃、主机转速为890r·min-1、流速为1.0mL·min-1、检测波长为254nm的条件下进行分离,再用高效液相色谱进一步分离纯化,最终从300g大米发酵培养物中得到了8mg DON,纯度为97.7%。将纯化的DON用于DON人工抗原制备,基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱分析表明,人工抗原制备成功;免疫动物后,研制出了高效价的多克隆抗体。本研究建立的色谱方法操作简单,分离效果较好,纯化的DON可以用于抗体的制备。     

抗黄曲霉毒素B1重链IgG2b亚型单克隆抗体的制备及应用

目的制备抗黄曲霉毒素B1(AFB1)的重链IgG2b亚型单克隆抗体,并建立黄曲霉毒素B1的间接竞争ELISA检测方法。方法采用AFB1-BSA偶联物为免疫抗原,AFB1-STI偶联物为检测抗原,利用间接竞争ELISA筛选分泌抗AFB1单抗的细胞株,并对抗体进行鉴定。结果筛选到1株能分泌特异性抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其染色体数目为(90±10)条;所分泌的单抗亚类重链为IgG2b,轻链为λ;间接ELISA检测该株杂交瘤细胞分泌上清效价在1∶12800～1∶25600,纯化腹水效价为1∶105～1∶106。传30代及液氮中保存6个月,抗体效价稳定;建立的间接竞争ELISA检测方法的最低检出限为0.001ng/ml,校正曲线的线性范围为0.005～5ng/ml,IC50为0.01ng/ml;与AFB1的结构类似物AFM1和化学结构有差异的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的交叉反应率分别为1.4%和<1%。结论所制备的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体具有高度特异性和稳定性,可应用于间接竞争ELISA检测方法。     

雪腐镰刀菌产橙皮苷酶的特性研究和条件优化

为提高雪腐镰刀菌6238产橙皮苷酶的效率,缩短生长周期,分析了其生长与产酶的生理特性,确定橙皮苷酶是次级代谢产物,生产周期是72 h;研究了诱导剂橙皮苷对雪腐镰刀菌6238产酶的影响,结果表明,在发酵初始阶段加入橙皮苷可保持较高酶活;随后,对雪腐镰刀菌6238产橙皮苷酶进行条件优化,得到最优培养条件:葡萄糖40 g?L?1、酵母提取物5 g?L?1、接种量4%、磷酸氢二钾2 g?L?1,培养温度30℃,起始p H 6.5。在上述培养条件下,单位发酵液平均酶活力达到了1305 U?m L?1,是优化前的2.2倍。     

液相色谱串联质谱法同时测定小麦粉中10种真菌毒素

建立了液相色谱串联质谱法(±ESI)同时测定小麦粉中10种真菌毒素的方法.方法检出限在0.1～5.3 ng/mL之间,2个浓度水平加标回收率在60.5%～86.1%之间,相对标准偏差在7.9%～14.8%之间.对深圳市出售的小麦粉中10种真菌毒素的含量水平进行调查.在28个小麦粉样品中,检出3种交链孢霉毒素,其中交链孢酚单甲醚(AME)的阳性率达71.4%,交链孢酚(AOH)的阳性率28.6%,细交链孢霉酮酸(TA)的阳性率为21.4%.     

一株降解呕吐毒素枯草芽孢杆菌的鉴定与降解效果研究

从被污染的玉米中分离、纯化得到一株白色菌株,命名为NHIBC 006D,通过形态学观察和16S r DNA序列分析比对,初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。通过发酵培养和呕吐毒素(Deoxynivalenol,DON)添加实验,发现该菌分泌了一种可有效降解呕吐毒素的胞外蛋白,最高降解率可达73.5%。同时,该菌株发酵液对玉米浆中的呕吐毒素降解率也达到80%左右,为该菌在发酵食品及饲料中呕吐毒素生物降解的应用提供了可能。     

液相色谱法测定小麦粉中拟虫菊酯类农药残留

建立了高效液相色谱法(HPLC)同时测定小麦粉中7种拟虫菊酯类农药残留的方法。样品经乙腈和丙酮(V∶V/90∶10)的混合溶液提取,固相萃取柱净化,采用光化学衍生技术结合荧光检测器测定,外标法定量。7种拟虫菊酯类农药得到很好的分离,回收率为84%～118%,相对标准偏差(RSD)为2.81%～6.44%,检出限为0.002～0.010 mg/kg。实验结果表明,该方法简单、快速、重现性好,满足小麦粉中拟虫菊酯类农药残留测定要求,适用于一般实验室开展日常检测。     

UPLC法测定广西莪术、醋莪术及其水提药渣中莪术烯醇含量

采用Waters ACQUITY UPLC BEH Shield RP C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液(44∶56,体积比)为流动相,等度洗脱,流速0.3 mL·min~(-1),柱温35℃,检测波长262 nm,建立了莪术烯醇含量测定的UPLC法,比较了广西莪术、醋莪术及其水提药渣中莪术烯醇含量的差异性。结果表明,广西莪术和醋莪术水提药渣中莪术烯醇含量分别是广西莪术和醋莪术饮片中莪术烯醇含量的50%、44%,水提药渣中莪术烯醇含量仍然很高,具有较大利用价值,可根据需求进行二次开发与利用;不同干燥温度对水提药渣中莪术烯醇含量的影响较小。莪术烯醇含量测定的UPLC法稳定、准确、灵敏,可用于莪术及炮制品的质量控制,为水提药渣的资源化利用提供科学依据。     

银柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量测定的方法学研究

建立银柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量测定的方法。采用薄层扫描法,以525 nm为测定波长,700 nm为参比波长,α-菠甾醇(α-spinasterol)和豆甾-7-烯醇(stigmast-7-enol)的混合物(1:3)为对照品,测定银柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的含量。α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量在21.46~107.30μg/μL范围内呈良好的线性关系(r=0.991 1),平均回收率为99.5%(RSD=4.8%)。结论该方法简单、省时、损失小,可用于测定银柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的含量。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定小麦粉中福美双残留量

建立一种超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定小麦粉中福美双残留量的快速检测方法。小麦粉经甲醇超声提取,采用C_(18)色谱柱分离,以乙腈+0.05%甲酸水体系进行梯度洗脱,质谱采用电喷雾正离子模式离子化,多反应监测模式,标准曲线外标法定量。福美双在5~100 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数大于0.999,定量限为0.02 mg/kg。小麦粉中福美双添加量为0.02、0.05、0.10 mg/kg时,福美双的平均加标回收率为70.52%~85.20%,相对标准偏差为8.74%~9.42%。该方法前处理过程简单,分析时间短,灵敏度和准确度高,适用于小麦粉中福美双残留量的批量快速检测。     

二氧化钛光催化对小麦呕吐毒素降解效果的研究

以未固化加工的纳米级试剂二氧化钛(TiO_2)为研究对象,对小麦中呕吐毒素(DON)的降解情况进行研究。通过在小麦粉和籽粒中添加TiO_2,进行一系列的正交试验,观察小麦DON的降解效果,最后再验证添加TiO_2对小麦的出粉率、色泽、气味、脂肪酸值、粗蛋白等相关品质指标的影响。研究结果表明光照2 h,小麦粉和籽粒实验组降解率提升最快,相对降解率最高,紫外照射6 h,紫外光催化TiO_2与紫外光协同作用使DON降解率可分别达到40.0%和32.8%,说明粉状未加工的纳米级TiO_2对小麦DON有较明显的降解效果。     

12种杀菌剂对三线镰刀菌的室内毒力测定

采用菌丝生长速率法,选择9种化学杀菌剂,3种生物药剂进行毒力测定。化学杀菌剂毒力由强到弱依次为吡唑醚菌脂、溴菌腈、氟硅唑、菌核净、腐霉利、异菌脲、嘧霉胺、噻呋酰胺和啶酰菌胺,EC_(50)值分别为1.73、2.24、2.51、6.24、11.18、19.51、52.62、111.13和598.58 mg/L,生物杀菌剂毒力由强到弱依次为丁子香酚、中生菌素和多抗霉素,EC_(50)值分别为2.33、4.91和674.39 mg/L。结果表明,三线镰刀菌对药剂敏感性差别很大,为增强杀菌剂效果、延长使用时间,应根据杀菌剂持效期及作用类型科学确定药剂间的合理轮用或混用。为防治三线镰刀菌导致茶叶病提供了科学指导。     

适乐时悬浮种衣剂防治冬小麦雪腐雪霉病

冬小麦雪腐雪霉病是伊犁地区冬小麦苗期主要病害 ,发病轻则分蘖死亡 ,严重减产 ,重则造成全田毁灭 ,以致翻耕改种。多年来一直没有理想的药剂能够解决这一难题。 2 0 0 0年冬播前 ,受瑞士先正达公司所托 ,使用适乐时悬浮种衣剂以验证其防治雪腐雪霉病和促进幼苗生长、增加产量等作用 ,为大面积生产应用提供理论依据。1　试验材料及方法1.1　供试品种伊农 16号1.2　供试药剂2 .5 %适乐时悬浮种衣剂 (有效成分 :氟咯菌腈 ,由瑞士先正达公司提供 )3%敌萎丹悬浮种衣剂 (有效成分 :恶醚唑ｄｉｆｅｎｏｃｏｎａｚｏｌｅ ,由瑞士先正达公司提供 )5 …     

GPC净化联合GC-MS/MS测定番石榴中2种杀菌剂残留

建立同时测定番石榴中三唑酮和腐霉利的气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)分析方法。番石榴样品经乙腈提取,凝胶渗透色谱净化,GC-MS/MS检测,外标法定量。结果表明:三唑酮和腐霉利在0.05~0.50 mg/kg范围内,回收率在77.4%~100.7%之间,相对标准偏差为5.0%~9.6%(n=5)。三唑酮、腐霉利定量限分别为0.01和0.005 mg/kg。该方法灵敏、准确,适用于番石榴中2种杀菌剂的残留检测分析。     

减少镰刀霉菌毒素污染的分子生物学和生物技术

坏死性植物病原体禾谷镰刀霉和黄色镰孢可引起镰刀霉枯萎病（FHB）,它是小麦、大麦和玉米的破坏性病害。病原体侵入宿主植物的早期小穗能导致谷粒发育不正常。除了引起产量的下降外,被真菌毒素污染的谷物严重地威胁着健康。由FHB病原体产生的真菌毒素是单端孢霉烯[如脱氧瓜萎镰菌醇（DON）和3-乙酰脱氧瓜萎镰菌醇（3-ADON）]和玉米赤霉烯酮（ZEN）。DON经常在谷物中存在,并可引起中毒症状,如呕吐、皮炎、免疫抑制和出血性败血病。ZEN是雌激素类二羟基苯甲酸内酯,它可引起家畜生殖器官形态和功能的异常。     

高效液相色谱法测定小麦粉和大米粉中的氯啶菌酯

[目的]建立小麦粉和大米粉中氯啶菌酯的液相色谱检测方法。[方法]样品经乙腈提取,过滤,C18柱净化。采用高效液相色谱检测,色谱柱:SunFire C18柱;流动相:乙腈-水(体积比70:30);流速:1.0 mL/min;检测波长:234 nm;进样量:10μL。[结果]该方法在小麦粉和大米粉中添加0.05、0.1、0.5 mg/kg三个不同水平,回收率分别为77.6%～103%和92.2%～99.6%。[结论]该方法满足农药残留检测的要求。     

辣椒根腐型疫病的有效防治药剂

在我国山东、辽宁、北京、河北等北方辣椒主产区，普遍发生根腐症状，且与传统镰刀菌引起的根腐病症状相似。当地菜农在技术人员的指导下，按传统的镰刀菌引起的根腐病进行防治，收效甚微，已成为当地辣椒生产的“癌症”。中国农科院蔬菜花卉研究所近期对不同辣椒产区的该病病源菌进行了分离鉴定，从而明确了该病的病源，并筛选出了防治该病的有效药剂，并将这种造成根腐症状的病害定名为辣椒根腐型疫病。