产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件优化

以羧甲基纤维素钠培养基和液体发酵培养基筛选菌株,经初筛和复筛筛选出目的菌株后,通过观察菌落形态、颜色和孢子形态等方法初步鉴定目的菌株。结果表明,本研究筛选出的2株目的菌株均为黑曲霉。菌株的最佳碳源和氮源分别为1.0%CMC-Na和0.3%酵母膏,最佳培养起始p H值和最适宜温度分别为4和40℃。在此条件下培养7d后菌株1和菌株2的CMCase酶活分别达到0.504 IU/m L和0.277 IU/m L。     

产柚苷酶菌株的初步筛选

柚苷酶作为沙田柚和柑桔果实中主要苦味物质的分解酶有望在深加工生产中得到应用。本研究在沙田柚树林下土壤和沙田柚皮腐烂液中分离了多株产柚苷酶菌株,其中A09产酶最高,摇瓶产酶达263U／mL,初步确定为黑曲霉。研究发现菌株A09的产酶过程需要柚苷诱导,该菌株具有较好的选育潜力。     

卡拉胶酶高产菌株YDK-6的筛选、产酶条件优化及酶学性质研究

从腐烂的角叉菜中筛选出卡拉胶酶高产菌株YDK-6,通过形态观察及16S rDNA序列分析对其进行鉴定,采用正交实验对其产酶条件进行了优化,并对其所产卡拉胶酶的酶学性质进行了研究。结果表明,菌株YDK-6为假单胞菌(Pseudomonas sp.);在葡萄糖加量为15 g·L^-1、酵母粉加量为10 g·L^-1、卡拉胶加量为2 g·L^-1、NaNO₃加量为2 g·L^-1、NaCl加量为15 g·L^-1、K₂HPO₄加量为1.00 g·L^-1、MgSO₄加量为0.05 g·L^-1、FePO₄加量为0.01 g·L^-1、CaCl₂加量为0.01 g·L^-1、起始pH值为7.5的条件下,于28℃摇床培养72 h,所产卡拉胶酶的活力达到111.33 U·mL^-1<...     

沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株的筛选及其酶学性质

目的从海洋生物双齿围沙蚕消化道筛选产蛋白酶菌株,并对其胞外蛋白酶的性质进行分析。方法用脱脂奶粉平板溶圈法及改良Lowry法进行产蛋白酶菌株的筛选和蛋白酶活力测定;Bradford法测定蛋白含量;UVP GDS8000型凝胶成像系统和VisionWorks、Bandscan4·03软件进行相对分子质量和纯度分析,并对酶的各项性质进行检测。结果筛选出高蛋白水解活性菌株D2,其胞外蛋白酶比活性为156·0U/mg,相对分子质量约为42000,纯度大于97%,最适作用温度60℃,最适pH为9,在pH6～10及0～55℃具有较好的稳定性。结论D2株分泌的胞外蛋白酶有望成为一种新型的海洋微生物蛋白酶资源。     

产D-氨基酰化酶菌株的筛选及活性菌株A55的初步研究

从氨基酸类化工厂附近土样中筛选产D-氨基酰化酶的菌株,并对活性较高的菌株进行了菌种鉴定及培养条件的初步优化。利用N-乙酰基甲硫氨酸作为分离培养基中的唯一碳氮源,从8份土样中筛选了约500株菌,其中菌株A55酶活力及稳定性均较高。通过形态学观察、生理生化特征测定及16SrDNA系统发育分析对菌株A55进行菌种鉴定,并采用单因素法考察了影响D-氨基酰化酶合成的因素。结果表明,菌株A55属于耐寒短杆菌,其最佳产酶发酵条件为:培养温度30℃,培养基初始pH值7,摇床转速200r·min-1,摇瓶装样量15%,培养时间48h。另外,碳氮源的添加虽然有利于菌体的生长,但是不利于D-氨基酰化酶的合成。     

产脱卤酶菌株的筛选及其应用

以氯乙酸作为唯一碳源,从土壤样本中筛选获得了高产脱卤酶菌株17#,具有将β-溴对硝基苯乙醇转化为对硝基环氧苯乙烯的活性,优化了发酵培养基和转化条件。确定最适培养基组成(g.L-1)为:乳糖8,胰蛋白6,氯乙酸4,Na2HPO43.2,KH2PO41.5,MgSO498 mg,CaCl210 mg,FeSO41 mg,ZnSO40.1 mg,pH值6.50;最适培养条件为30℃培养35 h。最佳转化条件为35℃下转化β-溴对硝基苯乙醇12 h。菌株17#在最适培养条件下,酶活力达到最高值132.80 U.mg-1,在最佳转化条件下的转化率为90.6%。菌株17#可以高效地将β-溴对硝基苯乙醇转化为对硝基环氧苯乙烯。     

菠萝蛋白酶酶活力影响因素及测定酶活力方法的研究进展

文章阐述了湿度、温度、pH、糖类、金属离子、聚乙二醇、有机溶剂和抗氧化剂等各种因素对菠萝蛋白酶酶活力的影响;以及测定菠萝蛋白酶酶活力的方法:福林法、C.D.U法、紫外分光光度法和G.D.U法。其中某些因素具有提高酶活力的作用,某些因素则会抑制酶活力。几种酶活力测定方法在试剂的繁简,操作的复杂性,以及测定灵敏度上均有优劣。     

黑毛茶中产单宁酶真菌的筛选及产酶条件研究

采用富含单宁酸的平板培养基对黑毛茶中产单宁酶的真菌进行筛选,经纯化后初步鉴定该菌为黑曲霉,并对其中一株黑曲霉WC-2产单宁酶的发酵条件以及发酵培养基的组成进行了优化。优化后的条件为:五倍子渣含量80%,外加碳源为α-乳糖、添加量1%,外加氮源为硝酸铵、添加量0.5%,发酵温度37℃,发酵时间72h。在此条件下,单宁酶活力最高达到27.06U·g-1。     

产碱性脂肪酶菌株的筛选和培养

以Rodamine B平板筛选法获得了一株高活力碱性脂肪酶产生菌Pseudomonas sp. ZJU-02.摇瓶产酶实验表明，适宜产酶培养基为(%)：玉米浆3，植物油1, K2HPO4 0.1, KCl 0.05, MgSO4 0.05, Tween80 0.05；最佳培养条件为温度26℃、初始pH 6.5. 脂肪酶活力可高达86 IU/ml. 该酶在70℃以下、pH 7.0~10.5范围内稳定；酶反应的适宜温度为40℃，适宜pH为9.5. 该酶制剂在洗涤剂和制革工业中有良好的应用前景.     

土壤中产壳聚糖酶霉菌的筛选及产酶条件优化

为筛选壳聚糖酶的高产菌株,利用壳聚糖水解圈作为筛选模型,从沈阳化工学院附近农田土壤中筛选得到了产壳聚糖酶能力较高的霉菌M19。对其产酶条件进行优化,最终得到培养基中最佳碳源为1．0％壳聚糖胶体,最佳氮源为1．0％（NH4）2SO4加1．0％蛋白胨,最适初始pH为6．0,最适溶氧量为50mL摇瓶装20mL培养基,最适接种量为7．5％,且发酵72h时该菌产酶能力最强。该方法简便、直观,很适合大量、快速筛选。     

产壳聚糖酶菌株的筛选及其发酵产酶条件的研究

从采集的土样中分离得到一株产壳聚糖酶的菌株,对该菌株发酵产酶条件进行了初步研究.确定其最适的产酶培养基为(%):壳聚糖1.0,葡萄糖0.1,酵母提取物0.5,(NH4)2SO4 1.0,K2HPO4 0.07,KH2PO4 0.03,NaCl 0.5,MgSO4·7H2O 0.05,起始pH值6.0;最适产酶培养条件为:装液量为70 mL/250 mL,接种量3%,30℃、150 r·min-1培养72 h.在最适产酶条件下,该菌株发酵液中壳聚糖酶活力最高达到1.96 U·mL-1.     

葡糖酸苷酶生产菌株的筛选及其酶学特性的研究

以生物合成单葡糖苷酸基甘草次酸为目的,建立了一种合成单葡糖苷酸基甘草次酸生物催化剂的筛选方法,并筛选到一株青霉菌属真菌,表达的葡糖酸苷酶具有高度底物特异性,能定向水解甘草酸生成单葡糖苷酸基甘草次酸,且研究了其酶学特质.结果表明:该催化反应的活化能E0为116.072 kJ·mol-1,反应动力学常数Km为0.328 mmol·L-1,最大反应速度Vmax为3.53×10-3 mmol·L-1·min-1.催化体系的最适反应温度为50℃,最适反应pH为4.2.该催化剂在45℃以下较稳定,pH稳定性维持在4.6～5.8,Mg2 对催化活力有一定促进作用,而Cu2 、Fe2 、Fe3、Ag 有较大抑制作用.     

微生物絮凝剂产生菌的筛选及其对含油废水的处理研究

采用吡啶筛选法得到微生物絮凝剂产生菌株B-6-1,其絮凝率达到92.5%;将其用于含油废水的处理,对微生物絮凝剂投加量、废水pH值、废水温度及辅助金属离子的类型等影响因素进行了研究。确定微生物絮凝剂的最佳絮凝条件为:微生物絮凝剂投加量0.33 mL.L-1,废水pH值9.0、废水温度35℃、添加辅助金属离子Ca2+。     

一株产聚乙烯醇降解酶的紫色杆菌的发酵条件研究

从聚乙烯醇(PVA)污染环境中筛选出一株产聚乙烯醇降解酶活力较高的菌株WSH04-01,该菌株能够利用聚乙烯醇作为唯一碳源进行生长.通过一系列生理生化试验和16S rDNA序列分析结果,鉴定该菌株属于紫色杆菌属(Janthinobacterium sp.),实验室编号WSH04-01.这是目前国内外有关紫色杆菌产生PVA降解酶的首例报道.首先对菌株合成PVA降解酶的营养条件进行了考察,通过单因素试验和正交试验确定了菌株最优培养条件为PVA10 g·L-1,葡萄糖3 g·L-1,酵母膏6 g·L-1,K2HPO4 2 g·L-1,KH2PO4 0 25 g·L-1,MgSO4 0.05 g·L-1,CaCl2 0.05 g·L-1,FeSO4·7H2O0.02 g·L-1,NaCl 0.02 g·L-1.最适发酵温度为30℃,培养基初始pH为7.2,装液量为30 mL培养基(250mL摇瓶)-1,接种量为8%.在最优条件下,PVA降解酶酶活可以达到4.94 U·mL-1,略高于正交试验中的最高酶活(4.83 U·mL-1).同时利用凝胶渗透色谱得到分子量分布图,对最优发酵条件下发酵过程中聚乙烯醇的降解进行了验证.     

一株产腈水合酶菌株酶活高效表达条件的研究

以抚顺腈纶厂废水中筛选的一株Nocardia sp为出发菌株,通过逐渐增加培养基中丙烯腈的体积浓度重复继代培养,得到1株酶活高效表达的Nocardia sp菌,酶活比出发菌株提高了15倍。确定了菌株培养的最优条件:葡萄糖(25 g/L),诱导剂脲(0.06 g/L)、Co2+(0.02 g/L)、丙烯酰胺(10%),反应条件pH(7)、温度(20℃),底物丙烯腈体积分数(<5%),产物丙烯酰胺的质量分数(<20%)。正交实验表明,反应温度和脲的加入量为反应过程中的显著因素。     

蛋白酶产生菌的筛选及发酵条件的优化

筛选了植物蛋白加工用蛋白酶产生菌,为酶的分子改造和植物蛋白加工提供材料基础。通过不同菌株筛选,获得了一株蛋白酶的高产菌株枯草芽孢杆菌X12。经过单因子实验,确立了产酶的最适培养基配方:蔗糖7.5 g/L,黄豆粉6.0 g/L,MnSO40.04 g/L,初始pH=7.0,装液量75 mL/250 mL。结论:按照所优化的产酶条件于37℃,180 r/min,经60 h培养,发酵液最终酶活达1 868.4 u/mL。     

甲壳素脱乙酰酶产生菌的选育研究

为获得甲壳素生物转化法制备壳聚糖的甲壳素脱乙酰酶菌株,利用平板变色圈法,从经过自然富集的土壤中筛选到一株产甲壳素脱乙酰酶的霉菌CR-3,产酶活力达到41.6 U/m L。通过形态学特征和18S r DNA序列分析,确定其为杂色曲霉(Aspergillus versicolor)。经过紫外诱变后,筛选到产酶活力提高的突变株SD-3,酶活力提高到78.3 U/m L。进一步对突变株的产酶培养基组成进行了优化,产酶活力提高到147.4 U/m L。研究的结果有良好的实际应用价值。