采用发光菌法评价果汁中亚硝酸钠生物毒性

在研究亚硝酸钠与费氏弧菌发光抑制率存在相关性的基础上,建立了评价亚硝酸钠生物毒性的方法,并将其应用于果汁中亚硝酸钠综合毒性的检验。结果显示,发光强度抑制率与亚硝酸钠溶液质量浓度呈正相关,相关系数在0.953 3～0.957 3,最佳检测平衡时间为15 min,误差限范围在0.615 0～2.346 6;发光强度抑制率与果汁中亚硝酸钠质量浓度同样呈正相关,相关系数在0.955 5～0.997 0,最佳检测平衡时间为15 min,误差限范围在0.085 2～2.448 3。     

发光费氏弧菌对常用色素的生物毒性评价

在探寻出色素与费氏弧菌发光抑制率存在相关性的基础上,初步建立起评价色素生物毒性的方法,并将其应用于果汁中色素产生的综合毒性的检验.结果:色素溶液质量浓度与发光抑制率呈正相关,相关系数在0.8760～0.9873之间,EC50范围在0.72～2.86mg/L之间;果汁中色素质量浓度与发光抑制率同样呈正相关,相关系数在0.9136～0.9951之间,FC50值在1.02～2.96mg/L之间.柠檬黄毒性较小,苋菜红毒性较大.果汁对人工合成色素的生物毒性具有一定影响.色素在果汁中对费氏弧菌发光抑制率随浓度增加而上升的幅度明显大于在水溶液中.本研究为食品急性生物毒性监测的研究提供初步参考.     

青海弧菌Q67荧光素酶基因luxAB与luxCDABE在大肠杆菌中表达与发光特性比较

目的对比淡水发光细菌——青海弧菌Q67荧光素酶基因luxAB和luxCDABE在新的表达体系中的表达,为构建特异性检测毒性的重组菌提供基础。方法设计引物扩增得到青海弧菌Q67荧光素酶基因luxAB和luxCDABE,将其分别与表达载体pET-22b连接,转化大肠杆菌DH5α测序,阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达。检测两种重组菌的发光特性及重金属离子对其毒性影响。结果通过测定重组菌的相对发光强度(RLU)和OD600值可知:luxAB和luxCDABE重组菌在癸醛和IPTG浓度均为1μL/mL培养基里培养第1小时后达到最大RLU,值分别为750618.5和140901.5。检测重金属离子Cd~(2+)、Hg~(2+)、Cr~(6+)对重组菌的毒性,EC_(50)(半有效浓度)值分别为:luxAB重组菌:5.160、5.129、7.097 mg/L;luxCDABE重组菌:6.137、7.643、7.736mg/L。结论在相同培养条件下,luxAB重组菌比luxCDABE重组菌获得了更大的RLU,说明lux AB表达效果更好。重金属对重组菌的毒性影响检测,luxAB重组菌得到了更低的EC_(50)值,进一步论证了这个观点。     

发光菌冻干粉保护剂及贮藏效果的研究

探究脱脂乳类复合保护剂在冷冻干燥过程中对青海弧菌Q67(V.qinghaiensis sp.-Q67)和明亮发光杆菌T3(P.phosphoreum sp.-T3)相对发光率的影响,并对保护剂进行优化;-20、4℃以及室温(16～25℃)条件下对两种发光菌冻干粉的贮藏效果进行比较研究。结果表明:明亮发光杆菌T3对冷冻干燥的抗性要高于青海弧菌Q67;3种保护剂中,以脱脂乳、蔗糖、壳聚糖混合物为保护剂的两种发光菌粉复苏30min后的发光度最高;以脱脂乳、蔗糖、壳聚糖、谷氨酸钠混合物为保护剂的青海弧菌Q67菌粉在-20℃条件下长期贮藏效果最好;而对明亮发光杆菌T3菌粉长期贮藏而言,3种保护剂在-20、4℃和室温条件下的效果均较好。这两种菌粉在30min内快速反应,表明它们在毒性物质快速检测中有着较好的应用价值。     

1株发光细菌的分离、鉴定及对霉菌毒素毒性的评价

为了用发光细菌评价霉菌毒素毒性,从深海鱼中分离、纯化到1株发光细菌SRU-2,以形态学特征、培养特性、生理生化特征以及分子生物学等方法对其进行分类鉴定,并利用该菌对黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒性进行评价。结果表明:该菌为革兰氏阴性菌,最适生长温度为15℃,16S rRNA基因序列分析表明该菌与Ribosomal Database Project数据库中明亮发光杆菌Photobacterium phosphoreum AK6的同源性水平达100%,结合菌株的形态学和生化特性,鉴定其为明亮发光杆菌。随着霉菌毒素浓度的增加,该菌相对发光强度并非线性降低,而且发光强度并非都受到抑制。     

DMSO胁迫提高发光细菌毒性实验敏感度的研究

利用二甲基亚砜(DMSO)胁迫,以发光细菌青海弧菌Q67种为实验菌种,通过与标准物质作用测定相对发光值确定其生物毒性效价,对多种食品中可能存在的污染物进行毒性对比研究。结果表明,DMSO浓度在0.1%~1.0%之间不影响发光细菌正常生理反应,同时可以有效的提高其对毒性物质作用毒性。DMSO能明显提高发光细菌的检测敏感度,有效降低半数致死量EC50。对受试重金属汞、铜、镉和锌,其提高效率为43.28%~58.50%;四环类抗生素中盐酸金霉素、盐酸四环素和土霉素的提高效率在8.2%~11.6%之间;抗菌类农药二氰蒽醌、溴菌腈、甲霜灵和异菌氟腚胺的提高效率为10.49%~38.32%。DMSO的胁迫促进效果适用于多种毒性物质,并且能够在短时间内提高作用效果(30 min以内),为食品领域应用生物毒性检测方面提供了一种新的分析方法。     

薄层色谱-生物自显影联用检测残留抗生素的研究

建立利用薄层色谱-生物自显影联用原位技术检测农副产品中的抗生素残留方法。采用饱和的EDTA-2Na溶液活化的硅胶薄层层析板,展开溶剂系统为乙酸乙酯-氯仿-甲醇-氨水(40∶40∶20∶5),于紫外灯下记录薄层色谱图,以发光细菌费氏弧菌(V.fi scheri)为检定菌,薄层板表面均匀涂布处于最强发光周期的费氏弧菌(V.fi scheri)发酵液,放入生物发光检测仪中,拍照记录。结果表明,100份样品中的72份被检出有残留抗菌物质存在,并对残留抗生素进行初步推定。该方法操作简便、快捷、结果准确,可进一步研究用于抗生素残留定性与定量检测。     

近红外光谱技术检测液态奶中微量三聚氰胺的可行性研究

为了快速检测液态奶中违法添加的三聚氰胺量,利用近红外光谱技术进行可行性研究分析。对采集的54组添加不同三聚氰胺含量的液态奶样本的近红外漫反射光谱进行小波变换(wavelet transform,WT)结合主成分分析(principal component analysis,PCA)后,提取得到特征信号,利用广义回归神经网络(general regression neural network,GRNN)建模进行三聚氰胺的定量分析,结果显示当三聚氰胺浓度低于0.05%时,模型预测能力较差,预测集模型R2仅为0.654。进一步利用支持向量机(support vector machine,SVM)建模对液态奶中是否添加三聚氰胺进行定性判别,结果显示测试集准确率为94.44%。因此,通过近红外光谱结合适当的化学计量学方法,对液态奶中添加三聚氰胺虽无法精确定量,但可准确对其进行定性判别。     

青海弧菌发光检测法可快速检测饮用水中的有害物质

发光菌检测法是以一种非致病的明亮发光杆菌作指示生物,以其发光强度的变化为指标,测定环境中有害有毒物质的生物毒性的一种方法。     

三聚氰胺ELISA检测试剂盒评价研究

选取一种市售三聚氰胺ELISA检测试剂盒,从灵敏度、特异性、准确度、可重复性、检出限、耐变性、批间变异等方面进行了技术评价,结果表明该试剂盒在测试范围内线性回归良好,相关系数R2为0.9864,与三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺、头孢曲松钠、土霉素的交叉反应率均低于0.1%,液态奶和乳粉的基体交叉反应率分别为89.09%和110.86%,液态奶和乳粉的平均回收率分别为102.4%和72.2%,液态奶和乳粉的检测限分别为7.93、20.77μg/L,可以满足国家相关限量标准检测要求。耐变性的变异系数为18%,液态奶和乳粉的批间变异系数分别在11.71%~16.13%和9.13%~13.26%。该试剂盒有较好的准确性、特异性与重复性,耐变性与批间变异均在可接受范围内,可用于液态奶、乳粉样品中的三聚氰胺残留检测。     

生物膜降解酶对304不锈钢上副溶血弧菌生物膜形成的抑制作用

以副溶血弧菌生物膜基质为靶点,采用96孔板结晶紫染色法筛选出纤维素酶、脂肪酶、蛋白酶k为单酶,将单酶组合为复合酶,在单因素实验的基础上,采用响应面分析法优化组合酶浓度。通过结晶紫染色、菌落计数、扫描电镜等,评价组合酶对304不锈钢上副溶血弧菌生物膜的抑制作用。响应面优化得到的组合酶中纤维素酶浓度为1.00 mg/mL,脂肪酶浓度为1.10 mg/mL,蛋白酶k浓度为1.50μg/mL时生物膜抑制率最大,为89.73%,比优化之前的各单酶相比,对副溶血弧菌生物膜的抑制率有显著性提高,与预测基本相符,说明模型拟合良好,组合酶中各单酶浓度准确可行。优化得到的组合酶有效抑制了304不锈钢上副溶血弧菌生物膜的生长,抑制率为59.35%,扫描电镜图也证实了复合酶的抑制效果。生物膜降解酶复合有效提升了对生物膜的抑制率,为致病菌生物膜的降解及消除提供了新的思路。     

壳聚糖盐酸盐对几种水产致病菌的抑菌性研究

目前,对虾疾病仍然是困扰对虾养殖业的一大难题,由弧菌属（Vibrio）细菌引起的弧菌病（Vibriosis）是其中危害最大的细菌性疾病,给水产养殖业造成了严重的经济损失。本实验以副溶血弧菌、哈维氏弧菌和鳗弧菌为供试菌种,采用滤纸片扩散法对壳聚糖盐酸盐进行抑菌实验研究。在此基础上进一步采用96孔板法测定了壳聚糖盐酸盐对副溶血弧菌、哈维氏弧菌和鳗弧菌的最小抑菌浓度（MIC）,结果表明：壳聚糖盐酸盐对3种供试菌株均具有抑菌作用,最小抑菌质量浓度因供试菌的不同而不同,副溶血弧菌为2.5 mg/mL,哈维氏弧菌和鳗弧菌为3.25 mg/mL。     

Toxicity increases in ice containing monochlorophenols upon photolysis: environmental consequences

The toxic effects of photoproducts formed upon the photolysis of 2- and 4-chlorophenol (CP) frozen solutions in polycrystalline ice phase were determined with a bacterial luminescence test (Vibrio fisheri), and in vitro biomarker assay for dioxin-like effects (inductions of AhR-dependent luciferase in H4IIE-luc cells) and compared to the toxic effects of products of the same photoreaction in aquatic phase. Coupling photoproducts formed in ice samples (3'-chlorobiphenyl-2,4'-diol and 3-chlorobiphenyl-2,2'-diol from 2-CP photolysis and 5-chlorobiphenyl-2,4'-diol from 4-CP photolysis) were found to be more toxic to V. fisheri than parent CPs and elicited significant inductions of dioxin-like effects (the effective concentrations EC50 approximately 3 x 10(-5) mol L(-1) corresponded to known weaker ligands of AhR, such as nonplanar polychlorinated biphenyls or polycyclic aromatic hydrocarbons). To complete the picture, a photoproduct formed from 4-CP (5-chlorobiphenyl-2,4'-diol) was synthesized, and a detailed toxicity assessment with purified compound confirmed the results obtained with irradiated samples. Our findings support a recently proposed model according to which solar radiation can trigger the formation of new types of organic pollutants in polar ice or tropospheric ice cloud particles, presenting possibly greater risk to the environment than the parent compounds.     

鸡蛋膜荧光传感器光谱信息表征及三聚氰胺检测方法的构建

为了实现奶制品中三聚氰胺的快速准确检测,基于溶液中三聚氰胺能使荧光素的荧光强度在一定浓度范围内线性增强的特点,利用天然食品分析物鸡蛋膜作为生物膜基质,建立一种固定荧光素到鸡蛋膜上的生物传感器并用于三聚氰胺检测的方法,优化传感器体系中的荧光素浓度及戊二醛质量分数。该鸡蛋膜传感器的线性工作范围为1～500?μg/L,检出限为0.47?μg/L。相比溶液中三聚氰胺的检测方法鸡蛋膜固相传感器检测方法特异性强,稳定性好,具有更高的选择性和低检出限。该种鸡蛋膜荧光传感器能成功应用于市售奶制品中三聚氰胺的检测。     

花椒籽提取物对副溶血弧菌抑菌作用的研究

目的研究花椒籽提取物对副溶血弧菌的抑制效果。方法采用无水乙醇提取花椒籽,采用牛津杯法,比较不同提取条件下花椒籽提取物对副溶血弧菌的抑制作用。结果 100%的花椒籽提取物抑制副溶血弧菌效果最好;最小抑菌浓度和最小杀菌浓度均为12.50 mg/m L。温度升高不利于花椒籽提取物抑菌效果的发挥,适宜温度范围为20~40℃;酸性及中性环境中抑菌效果明显,p H为7.0时,花椒籽提取物抑菌作用最强;紫外照射可使花椒籽提取物菌能力减弱。结论花椒籽提取物对副溶血弧菌有明显抑制效果,抑菌效果随提取条件的改变而改变。     

奶及乳制品中三聚氰胺的检测研究

用高效液相色谱法测定奶及乳制品中三聚氰胺的含量。色谱条件为：色谱柱：C18 柱(150mm × 4.6mm,5μm);流动相：乙腈:0.202% 庚烷磺酸钠-0.210% 柠檬酸水溶液(10:90,V/V);检测波长：235.8nm;柱温：30℃。结果表明：在0.1～1.6μg/ml 范围内三聚氰胺与峰面积呈良好线性关系,相关系数为0.9973,回归方程为A ＝ 59746C＋ 183.48,回收率为98.3%～99.2%,相对标准偏差小于1.52%。     

三聚氰胺单克隆抗体制备与鉴定

目的制备高度特异的三聚氰胺单克隆抗体,经酶联免疫吸附试验鉴定并制备胶体金试剂盒。方法以牛血清白蛋白交联的三聚氰胺为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤融合和筛选技术制备抗三聚氰胺单克隆抗体,经纯化制备腹水,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immune sorbent assay, ELISA)对抗体进行效价测定、亚类测定、交叉鉴定和蛋白质免疫印迹试验(westernblot)特异性鉴定后制备胶体金试剂盒。结果筛选出1株抗三聚氰胺单抗,制备的三聚氰胺胶体金试剂盒敏感值能达到30μg/L。结论获得了高度特异的且能稳定分泌三聚氰胺抗体的细胞株。     

利用发光细菌进行褐牙鲆中氯霉素残留快速检测的研究

从青岛近海分离鉴定出1株鳆发光杆菌(Photobacterium leiognathi)YL,发光性质及其发光规律曲线的测定表明,鳆发光杆菌发光规律稳定,持续发光时间长,发光强度大。各种抗生素的抑菌圈试验得出,鳆发光杆菌YL对氨零素最敏感。在浓度0～1.0μg/L,氯霉素的浓度与鳆发光杆菌的抑制发光率有良好的线性关系。采用乙酸乙酯提取氯霉素的方法可以有效降低它族抗生素的干扰。褐牙鲆加标回收试验中,鳆发光杆菌检测氯霉素残留的方法检出限为0.14μg/kg。     

Determination of melamine concentrations in dairy samples

Melamine, a basic organic chemical intermediate, can cause renal failure because of the formation of insoluble melamine cyanurate crystals in the kidneys. This study examined a novel fluorescence spectrometry for the determination of trace melamine in dairy. The method was based on the inhibitory effect of melamine on the decolorizing reaction of the uncatalytic oxidation of acridine red by potassium permanganate in a sulfuric acid medium. The calibration graph was linear for melamine concentrations of 2.1 × 10^?4–1.6 mg/L, and a detection limit of 61.5 ng/L was obtained. The melamine was determined in dairy samples by the proposed method after liquid–liquid and solid phase extraction. The results correlated with the high-performance liquid chromatography. The recoveries were within the range of 99.6–103.3% for liquid milk and 98.5–111.1% for milk powder. The possible mechanism of the reaction was also investigated by ultraviolet spectra.