三聚氰胺在凡纳滨对虾中的残留消除规律研究

在室温(23~29℃)条件下,凡纳滨对虾用普通饲料驯化7d后再用含有不同剂量的三聚氰胺的饲料连续投喂25d,研究三聚氰胺在凡纳滨对虾血液、肌肉和肝胰腺组织中的残留消除规律。结果表明:凡纳滨对虾投喂含有三聚氰胺的饲料后,三聚氰胺在对虾血液、肌肉和肝胰腺组织中均有残留,当饲料三聚氰胺含量为800mg/kg时,对虾中三聚氰胺残留量最高部位是肝胰腺,其残留量达到6.10mg/kg;停喂含有三聚氰胺的饲料后,三聚氰胺在对虾血液、肌肉和肝胰腺组织中消除时间分别为1、4、6d;三聚氰胺在凡纳滨对虾体内可代谢为三聚氰酸,当饲料中三聚氰胺含量为200~800mg/kg时,三聚氰酸只在肝胰腺组织中检出,在血液和肌肉中均未检出,在肝胰腺组织中消除时间为3d。因此,肝胰腺可作为凡纳滨对虾体内三聚氰胺残留监控的靶器官。     

大豆肽产品替代鱼粉对凡纳滨对虾生长性能、消化酶活力及肠道组织结构的影响

本实验研究大豆肽替代凡纳滨对虾饲料中的鱼粉对其生长性能、消化酶活力及肠道组织结构的影响。配制大豆肽替代鱼粉量分别为0%(FM),10% (FSM10),20% (FSM20),30% (FSM30),40% (FSM40),100% (FSM100)的6种等氮等能饲料。挑选健康凡纳滨对虾(初重为1.53±0.36 g)在网箱中养殖50d,实验共6组,每组3个重复。结果表明：(1)大豆肽替代鱼粉量小于20%时,凡纳滨对虾的增重率、特定生长率和饲料系数与对照组均无显著差异(P>0.05),但替代量超过20%时成活率显著低于对照组(P＜0.05)。(2)大豆肽显著降低凡纳滨对虾肝胰腺中淀粉酶活力,FM组显著高于其他各实验组(P＜0.05),但各组间胰蛋白酶和脂肪酶活力差异并不显著(P＞0.05);(3)大豆肽对凡纳滨对虾肠组织中淀粉酶活力影响不显著(P＞0.05),但胰蛋白酶和脂肪酶活力随大豆肽替代量的增加呈先上升后下降的趋势。(4)大豆肽对凡纳滨对虾肠组织结构影响显著,肠绒毛高度、宽度随着鱼粉替代量的增加呈现出先上升后下降的趋势,且FSM100组会损伤肠组织绒毛,导致绒毛长度最低(P＜0.05)。综上所述,本实验条件下大豆肽替代20%以内的鱼粉对凡纳滨对虾生长性能、消化酶活力和肠组织圴无不良影响,但替代100%鱼粉会损伤小肠组织。     

膨化制粒和环模制粒工艺对饲料制粒加工质量和凡纳滨对虾生长性能的影响

本次研究比较了膨化制粒和环模制粒工艺对饲料制粒加工质量和凡纳滨对虾生长性能、饲料利用、肝胰腺和肠道组织学的影响。设计鱼粉质量分数为20%的基础饲料，分别采用环模制粒和膨化制粒的方式，生产硬颗粒饲料和沉性膨化颗粒饲料，在检测饲料制粒加工质量指标后，饲喂初重为7.72 g的凡纳滨对虾6周。和硬颗粒饲料相比，沉性膨化颗粒饲料的容重、耐久性指数和淀粉糊化度显著增加（P<0.05），硬度和含粉率显著降低（P<0.05）， 但二者在溶失率上没有显著差异（P>0.05）。经过6周养殖后，沉性膨化颗粒饲料组的饲料系数显著低于硬颗粒饲料组（P<0.05），虾体增重率在数值上高于硬颗粒饲料组（P>0.05）；二者在摄食量、成活率、含肉率、全虾组成和肝胰腺消化酶、糖代谢相关酶活性方面均无显著差异（P>0.05）；在肝胰腺和肠道组织学方面，摄食沉性膨化颗粒饲料和硬颗粒饲料的凡纳滨对虾均表现为组织结构清晰完整，未见明显的损伤。综上，沉性膨化颗粒饲料较硬颗粒饲料具有更优的加工性能和更高的饲料利用效率（更低的饲料系数），二者对于凡纳滨对虾肝胰腺消化酶、糖代谢相关酶活性和肝胰腺、肠道组织学方面具有基本一致的影响。     

呋喃西林代谢物在凡纳滨对虾体内代谢及残留

为研究呋喃西林代谢物氨基脲(semicarbazide,SEM)在凡纳滨对虾体内代谢及残留消除.在试验水温(28±2)℃下,以30 mg/kg的剂量对凡纳滨对虾多次药饵给药后,采用高效液相色谱-串联质谱法测定血淋巴和组织中药物浓度,并通过WinNonlin 5.2药代动力学软件及Excel 2010软件进行数据分析.经房室模型分析,SEM在血淋巴中吸收、分布、消除半衰期(t1/2K01、t1/2α、t1/2β)分别为0.695,2.567,47.603 h.经非房室模型的统计矩原理分析,SEM在血淋巴、肌肉、鳃、肝胰腺和肠的平均驻留时间MRT分别为34.424,49.281,39.178,32.390,35.170 h.停药2d后药-时曲线经Excel拟合,SEM在血淋巴、肌肉、鳃、肝胰腺和肠的消除半衰期t1/2β大小为肌肉11.75 d＞血淋巴8.88 d＞鳃8.66 d＞肝胰腺5.37 d＞肠线4.71d.结果表明,SEM在凡纳滨对虾体内吸收快、分布广,但消除缓慢.     

山梨醇对凡纳滨对虾无水运输中呼吸和能量代谢的影响

将驯化后体质量(12.86±0.80)g的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)随机分为两组,分别在13℃的3.5%山梨醇溶液或清水(对照)中浸泡3 min,至全部对虾侧卧水底呈休眠状态后,取30只一组装入聚氯乙烯(polyvinyl chloride,PVC)袋(220 mm×320 mm),充纯氧后密封,置于15℃的恒温箱中无水运输。10小时后将全部对虾转移至的清水(20℃～25℃)中复苏。测定休眠5、10 h和复苏1 h状态下凡纳滨对虾血清血蓝蛋白、乳酸、葡萄糖浓度、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肝胰腺琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)活力和肝糖原含量的变化,以探究山梨醇对凡纳滨对虾无水运输存活率的影响及其作用机理。结果发现,模拟无水运输10小时后,山梨醇组对虾存活率为88.89%,显著高于对照组(71.11%)(P <0.05);休眠状态下,山梨醇组血蓝蛋白、乳酸、血糖浓度和SDH、LDH活力显著高于对照组(P <0.05),肝糖原浓度显著低于对照组(P <0.05);复苏1小时后,两组对虾的乳酸、血糖浓度及对照组SDH活力仍与新鲜状态差异显著(P <0.05),其他参数恢复正常水平。结果表明,3.5%山梨醇可提高对虾有氧和无氧呼吸强度及存活率,缓解低、缺氧和能量不足的胁迫。     

发酵豆粕替代鱼粉对凡纳滨对虾的作用效果研究

本试验旨在研究发酵豆粕替代鱼粉对凡纳滨对虾生长、营养物质利用、肝胰腺消化酶活性和血淋巴非特异性免疫指标的影响。以豆粕(负对照组)、发酵豆粕T468、P839、B356和Y918等蛋白质替代正对照饲料中6%鱼粉(正对照饲料含21%鱼粉),另以发酵豆粕B356等蛋白质替代正对照饲料中9%鱼粉(B356-2),配制成7纽等氮饲料,饲喂平均质量4.0 g的凡纳滨对虾42 d。结果表明:发酵可部分降解豆粕中胰蛋白酶抑制因子、抗原蛋白质及大分子蛋白质,提高粗蛋白质和小肽含量;与负对照组相比,发酵豆粕T468、P839、B356、Y918替代6%鱼粉后,提高凡纳滨对虾增重率16.7%、12.0%、9.9%、11.9%,降低饲料系数18.1%、13.7%、12.6%、14.8%(P0.05),到达和正对照组基本一致的生长性能,同时显著提高了蛋白质效率、蛋白质沉积率、干物质消化率和蛋白质消化率(P0.05);各发酵豆粕组均较负对照组显著提高了肝胰腺淀粉酶活性和血淋巴SOD活性(P0.05),P839组的蛋白酶活性和血淋巴PO活性显著高于负对照组(P0.05)。发酵可改善豆粕的可利用性,在不影响凡纳滨对虾生长和饲料利用的前提下,发酵豆粕可替代饲料中6%鱼粉。     

凡纳滨对虾组织蛋白酶L性质分析及其对肌肉蛋白的降解

本研究从凡纳滨对虾肝胰腺中纯化获得一种组织蛋白酶L,其分子质量约为31 k D,肽质量指纹图谱分析得到8个片段共112个氨基酸残基,与报道的凡纳滨对虾组织蛋白酶L序列完全一致。该酶的最适温度和最适pH值分别为35℃和5.5,且在0~40℃以及pH 5.5~6.5之间酶活力稳定。该酶仅对底物Z-Phe-Arg-MCA特异分解。半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64和Leupeptin对其有明显的抑制作用,而金属蛋白酶抑制剂乙二胺四乙酸和乙二醇二乙醚二胺四乙酸对其有少量的激活作用。扫描电子显微镜观察结果显示,随着低温贮藏时间的延长,对虾肌肉纤维的断裂程度不断增加。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示,组织蛋白酶L可使肌肉蛋白发生分解,推测其可能参与对虾低温贮藏过程中肌肉的降解。     

凡纳滨对虾肌肉蛋白质组成及分子量分布研究

为了合理利用凡纳滨对虾蛋白质,对凡纳滨对虾肌肉进行蛋白分离,利用氨基酸自动分析仪检测蛋白的氨基酸组成及用SDS-聚丙烯酰胺电泳测定分子量分布。实验结果表明:总蛋白为(19.72±0.08)g/100g湿重,其中盐溶蛋白64.30%、水溶性蛋白25.00%、基质蛋白5.78%、非蛋白氮4.92%;凡纳滨对虾各蛋白氨基酸比例存在一定差异,但它们的第一限制氨基酸类似;SDS-PAGE电泳显示,凡纳滨对虾基质蛋白分子量分布范围较宽,集中在200~19ku,盐溶蛋白分子量集中在200~45ku,水溶性蛋白分子量集中在80~27ku。     

基于高通量测序技术分析凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)冷藏过程菌群结构变化

目的揭示凡纳滨对虾(4±1)℃条件下贮藏过程中菌群结构的变化规律,为其贮运保鲜提供参考。方法采用高通量测序技术对不同冷藏期凡纳滨对虾中的细菌种类及其丰度迚行分析。结果凡纳滨对虾初始菌群以鞘脂杆菌属(Sphingobacterium)、金黄杆菌属(Chryseobacterium)和寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)为主;冷藏过程中,Sphingobacterium、Chryseobacterium、Stenotrophomonas比例迅速减少,系统迚化关系上比较接近的交替假单胞菌属(Pseudoalteromonas)、希瓦氏菌属(Shewanella)和别弧菌属(Aliivibrio)成为优势菌,其中Aliivibrio的比例相对稳定,Shewanella比例呈先增加后减少的趋势,Pseudoalteromonas比例不断增加,可能在凡纳滨对虾腐败过程中起重要作用。结论高通量测序可以更加全面反映凡纳滨对虾中菌群的组成及其丰度信息,Pseudoalteromonas是凡纳滨对虾冷藏过程的优势腐败菌。     

超微浒苔对凡纳滨对虾消化酶活力的影响

目的研究超微浒苔的不同添加量对凡纳滨对虾消化酶活力的影响。方法取凡纳滨对虾幼虾450尾,采用简单随机抽样的方法分成18个组放入18个相同规格的养殖水箱中。对照组不添加浒苔,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组浒苔添加量分别为1%、2%、3%、4%、5%,各组饲粮营养水平除代谢能有微小差异外均完全一致。试验期42 d,于42日龄进行凡纳滨对虾胃肠道消化酶活性的测定。结果 2%、3%、4%的浒苔添加量可显著提高凡纳滨对虾的胃蛋白酶、胃脂肪酶、胰肠蛋白酶和胰肠脂肪酶的活性。各浒苔添加水平对胃、肠淀粉酶的活性影响均不显著。结论本试验条件下,以凡纳滨对虾饲料中超微浒苔添加量为3%最好。     

凡纳滨对虾在冰箱-18℃、-40℃冷冻条件的冻藏品质变化研究

通过感官评定、菌落总数、挥发性盐基氮TVB-N、质构弹性参数、丙二醛MDA、微观结构的测定,探究了凡纳滨对虾在冰箱-18℃、-40℃冷冻条件下储藏56 d的品质变化。结果表明,低温可以延缓凡纳滨对虾的黑变及质构劣化;-40℃冻藏可以更好抑制微生物的繁殖,延缓TVB-N的增加及脂质的氧化程度,较好地维持肌肉的结构。可见,-40℃冻藏有利于保持凡纳滨对虾的品质。     

凡纳滨对虾肌肉蛋白质双向电泳分离技术的建立及优化

建立凡纳滨对虾肌肉组织双向电泳分离技术并对其进行优化。通过液氮研磨和液氮研磨+超声破碎的方式提取对虾肌肉组织蛋白质。采用7 cm的IPG胶条进行双向电泳,凝胶染色后进行图谱分析,并对裂解液配方、胶条p H值、蛋白质上样量、凝胶染色进行优化。结果显示,以液氮研磨+超声破碎,裂解液Ⅱ提取对虾肌肉蛋白质;采用p H 4~7 IPG胶条,180μg蛋白质上样量,并用考马斯亮蓝G-250胶体考染(蓝银)染色,成功得到背景清晰,分辨率较高的凡纳滨对虾肌肉蛋白质双向电泳图谱,这为凡纳滨对虾肌肉蛋白质组学分析及肌肉品质变化的分子标记识别提供基础。     

天然植物复合提取物对凡纳滨对虾生长及抗病力的影响

为研究在饲料中添加天然植物复合提取物对凡纳滨对虾生长、饲料利用、体组成成分以及对虾非特异性免疫指标的影响,设计了5个天然植物复合提取物浓度梯度的等氮等能饲料,饲料中天然植物复合提取物的添加量分别为0、0.05%、0.1%、0.2%和0.3%.实验用对虾初始体重为0.57g,经过8周的投喂实验.结果表明,饲料中添加天然植物复合提取物对凡纳滨对虾的增重率和成活率的影响显著,其中以添加天然植物复合提取物0.2%组的增重率最高,成活率则随着饲料中天然植物复合提取物添加浓度的提高而显著上升.天然植物复合提取物对凡纳滨对虾饲料系数和蛋白质效率的影响显著,其中以添加0.2%组饲料系数最低,蛋白质效率最高.对凡纳滨对虾全虾蛋白质、脂肪、灰分和水分的分析表明,饲料中添加天然植物复合提取物对凡纳滨对虾全虾组成成分的影响不显著.对虾血清溶菌酶活力、酚氧化酶活力以及血浆中红细胞总数受饲料中添加天然植物复合提取物的影响显著,然而血清超氧化物歧化酶活力不受饲料中天然植物复合提取物添加水平的影响.以对虾生长、成活率以及血清中酚氧化酶活力为指标,凡纳滨对虾饲料中天然植物复合提取物的适宜添加量为0.1%～0.2%.     

凡纳滨对虾几丁质酶的活性分布及其短波紫外线照射激活作用

为了解凡纳滨对虾中几丁质酶的分布及短波紫外线(ultraviolet-C,UV-C)照射对几丁质酶的作用,探究了凡纳滨对虾各组织部位几丁质酶活力、UV-C照射工艺及其对几丁质酶学性质影响。结果表明,凡纳滨对虾中肝脏、胃、肠、头壳、壳、尾几丁质酶比活力分别为(72.84±2.54)、(33.54±1.31)、(27.25±0.91)、(21.40±1.25)、(10.74±0.48)、(5.22±0.05)U/g原料。几丁质酶主要分布在虾头部位(含肝脏、胃、头壳),占比达84.83%。正交试验中UV-C照射几丁质酶的最佳工艺条件为：照射功率10 W,照射时间25 min,照射高度10 cm,此时几丁质酶比活力(27.06±0.10)U/g原料。在最优工艺下,各组织部位几丁质酶有不同程度的激活。照射前后虾头几丁质酶最适温度为40℃、最适pH由4变为5。Mn²⁺、Zn²⁺、Fe³⁺、Cu²⁺对照射前后几丁质酶抑制明显。综上可知,UV-C照射的几丁质酶具有生产壳聚糖潜能,为UV-C照射提高凡纳滨对虾副产物几...     

蛋白质组学技术研究凡纳滨对虾冰藏期间肌肉蛋白的变化

凡纳滨对虾是中国主要的对虾品种,深受消费者的欢迎,但对虾在运输销售过程中极易发生组织软化、肌肉自溶。为了揭示凡纳滨对虾在冰藏过程中的肌肉蛋白的变化规律,筛选出其鲜度的指示蛋白,作者将新鲜凡纳滨对虾依次冰藏0、2、4、6、8 d,采用蛋白质组学技术研究冰藏期间肌肉蛋白的变化。实验结果表明,肌球蛋白重链1和腺苷酸脱氨酶在冰藏期间生成的降解产物为差异蛋白I19和I14,两者的灰度值均随冰藏时间呈上升趋势。其中,差异蛋白肌球蛋白重链1的灰度值变化与冰藏时间呈良好的线性正相关,决定系数R~2为0.920;差异蛋白腺苷酸脱氨酶的灰度值与时间用二次多项式回归拟合效果较好,决定系数R~2达到0.986。因此,肌球蛋白重链1和腺苷酸脱氨酶对凡纳滨对虾新鲜度具有指示作用,有望成为对虾冰藏期间的新鲜度指示蛋白。     

低压静电场结合气调包装对凡纳滨对虾冰温贮藏期品质的影响

为了延长凡纳滨对虾冰藏（（－1±1）℃）货架期,并延缓贮藏期间的品质劣变,通过比较不同贮藏条件下凡纳滨对虾的菌落总数、挥发性盐基氮含量、pH值、K值、汁液流失率、白度、感官评分及流变学特性的变化,研究低压静电场（2.5 kV、50 Hz）结合气调包装（体积分数75% CO2＋25% N2）对冰温下凡纳滨对虾的保鲜效果。结果表明：冰温下低压静电场结合气调包装相较于仅冰温、低压静电场结合冰温和气调包装结合冰温贮藏,对凡纳滨对虾的保鲜效果最好,能明显抑制冰温贮藏期微生物引起的腐败变质,对不良感官特性有所改善,且能延缓核苷酸的降解,货架期可达14 d,比空白组（普通空气、低温贮藏）延长了8 d;该条件下凡纳滨对虾色泽和感官评分良好,汁液流失率在整个贮藏过程中均低于3%,虾肉的软化在贮藏后期也有所延缓。因此,低压静电场可作为一种新技术用于提升凡纳滨对虾的保鲜。     

凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶的质谱鉴定及其免疫交叉反应研究

目的：鉴定凡纳滨对虾分子质量40 kD过敏原,并分析其在有壳水产食物中的免疫交叉反应。方法：运用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪（matrix assisted laser desorption ionization/time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF/TOF-MS）鉴定凡纳滨对虾40 kD过敏原组分;使用软件BLAST、Clustal X2、MEGA 5.0分析该蛋白氨基酸序列的种间同源性;制备抗凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶的多克隆抗体,并与17 种常见有壳水生动物粗提液进行Western blotting,以分析该过敏原的免疫交叉反应。结果：凡纳滨对虾40 kD过敏原为精氨酸激酶（arginine kinase,AK）;其氨基酸序列同源性分析显示AK在虾类（96%～100%）、蟹类（91%～93%）、贝类（49%～52%）、蟑螂（83%）中具有很高的同源性;Western blotting结果显示抗AK多抗与17 种不同虾类、蟹类、贝类的AK均能发生反应。结论：精氨酸激酶在甲壳类动物、软体动物、甚至昆虫中具有高度保守性,且能引起强免疫交叉反应,是有壳水生动物中的一种泛过敏原。     

凡纳滨对虾肌肉蛋白质的热变性及其对品质的影响

以凡纳滨对虾为对象,利用拉曼光谱技术研究加热过程中肌肉蛋白二级结构变化对品质特征的影响。研究结果表明:在加热过程中凡纳滨对虾二级结构发生了较大变化,导致质构特性及失水率发生相应的变化。在加热初始阶段30s时,凡纳滨对虾虾肉失水率为0.72%。随着加热时间的延长,失水率快速增加,10 min时达14.8%;同时虾肉质构指标也发生明显变化,即:硬度由初始的991.7848 N增至2 167.7830 N,最后降至1 768.9260 N;弹性由1.1805增至1.3131,再减至1.3088;黏性由7.6197 Pa·s减至1.6068 Pa·s,又增至3.2155 Pa·s;而内聚性、胶黏性、回复性、耐咀性均呈先生高后略微降低的趋势。这可能与虾肉蛋白加热过程中二级结构发生构象变化密切相关,其中α螺旋由新鲜的23.14%降至18.64%,β-折叠含量由23.91%升至29.51%,无规卷曲结构由31.80%升至33.91%。     

腐败希瓦氏菌对凡纳滨对虾氨基酸及生物胺含量的影响

以凡纳滨对虾为研究对象,通过分析接种腐败希瓦氏菌的对虾在30℃和4℃贮藏条件下微生物生长情况、感官品质、氨基酸及生物胺含量的变化,比较不同温度下腐败希瓦氏菌生长代谢活性及凡纳滨对虾品质的变化。结果表明,与30℃条件相比,4℃条件下凡纳滨对虾的感官品质下降趋势较缓,且腐胺和尸胺含量都较低,腐败希瓦氏菌在低温下表现出较强的适应能力。在感官不可接受点时,4℃条件下接菌组样品中总氨基酸含量却较30℃条件下的低,分别为(168.25±1.86)mg/g和(174.16±0.89)mg/g,其中以总赖氨酸、总精氨酸和总酪氨酸下降幅度最为显著,同时游离氨基酸含量也明显较低。凡纳滨对虾贮藏期间,腐败希瓦氏菌在对数生长期时,对虾的总赖氨酸含量下降最快。低温虽然能够抑制腐败希瓦氏菌菌落数的增长和生物胺的累积,但是腐败希瓦氏菌在低温环境下生长代谢需要更多的氨基酸,以促进凡纳滨对虾蛋白质和氨基酸的降解,降低对虾的风味和营养品质。     

4-己基间苯二酚对凡纳滨对虾3种腐败菌的抑菌活性及虾品质的影响（英文）

为研究4-己基间苯二酚(4-hexylresorcinol,4-HR)的抑菌活性及对虾品质的影响,通过体外及接菌实验分别评价了其对来源于凡纳滨对虾的麦芽糖肉食杆菌(Carnobacterium maltaromaticum)、腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)和杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)的抑菌活性及其对凡纳滨对虾冷藏期间品质变化的影响。牛津杯法和抑菌生长曲线显示4-HR能够显著抑制这3种腐败菌的生长。通过对比处理前后腐败希瓦氏菌的电导率和流式细胞术分析,发现其抑菌机理可能与增强细菌膜通透性有关。将0.25 mg/m L的4-HR溶液涂膜于凡纳滨对虾上,发现在冷藏期间(4℃)凡纳滨对虾的黑变程度较低而白度值较高,表明0.25 mg/m L 4-HR能有效抑制凡纳滨对虾的黑变。但涂膜4-HR的凡纳滨对虾适冷菌总数和挥发性盐基氮值仅在贮藏的前4 d低于未涂膜的对照组;而到贮藏终点时,涂膜4-HR的凡纳滨对虾适冷菌总数较对照组高0.14(lg(CFU/g))。结果表明尽管4-HR对3种腐败菌具有良好的体外抑菌活性,但在凡纳滨对虾贮藏过程中4-HR优先作为防黑变剂抑制对虾黑变。