矢车菊素-3-葡萄糖苷对人巨核细胞株Dami增殖分化的影响

目的：研究植物花色苷单体矢车菊素-3-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-β-glucoside,Cy-3-g）对人巨核细胞株Dami的增殖、分化作用。方法：不同浓度的花色苷Cy-3-g（0.05、0.50、5.00、50.00、100.00 mmol/L）与人巨核细胞株Dami细胞共同培养,并将用完全培养基培养的细胞设为对照组。培养结束后,用台盼蓝染色法检测巨核细胞活性、噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）染色法检测细胞增殖能力,软琼脂细胞集落培养法观察巨核细胞集落生成情况。采用Giemsa染色法观察细胞形态、流式细胞术检测巨核细胞DNA多倍体的生成及细胞表面CD41阳性表达率。结果：与对照组相比,50.00、100.00 mmol/L的Cy-3-g可增强Dami细胞活性,差异具有统计学意义（P＜0.05）;各Cy-3-g剂量组与对照组相比,均可明显增强Dami细胞增殖能力（P＜0.01）;Dami细胞集落数目、DNA多倍体数目以及CD41的阳性表达率在50.00、100.00 mmol/L Cy-3-g作用下明显升高,且与对照组相比均具有统计学差异（P＜0.01）。结论：Cy-3-g能够明显促进人巨核细胞株Dami的增殖、分化,这可以为花色苷促进血小板生成提供可能的理论依据。     

水提紫甘薯色素废渣中花色苷及总黄酮生物活性的研究

本研究对水提紫甘薯色素剩余废渣中的花色苷和总黄酮进行生物活性研究和评价。采用滤纸片扩散法研究两种组分对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用;选取DPPH·体系评价抗氧化活性;采用MTT法检测两种组分对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用。结果显示:水提紫甘薯色素废渣中花色苷和总黄酮均具有明显抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌生长、清除DPPH自由基及抵抗人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的作用。花色苷和总黄酮对两种供试菌的最小抑菌浓度分别为400μg/m L和4.0 mg/m L;花色苷对DPPH自由基的半数清除浓度(IC50)为42.32μg/m L,其对照Vc标准品IC50为44.65μg/m L;总黄酮对DPPH自由基的IC50为0.023μg/m L,其对照Vc标准品IC50为0.011μg/m L;花色苷作用于MDA-MB-231细胞24、48、72 h的IC50值分别为202.12、58.01、0.232μg/m L;总黄酮作用于MDA-MB-231细胞24、48、72 h的IC50值分别为0.42、12.05、12.11 mg/m L;本研究为水提紫甘薯色素废渣的综合利用提供了科学依据。     

蓝莓花色苷提取物干预人肝癌细胞对葡萄糖消耗的作用研究

探究蓝莓花色苷提取物对胰岛素抵抗的人肝癌细胞HepG2细胞对葡萄糖消耗的干预作用。利用MTT实验筛选得到3个品种蓝莓花色苷提取物的最适作用浓度;筛选胰岛素和葡萄糖诱导HepG2细胞产生胰岛素抵抗的最佳浓度;以MTT矫正细胞数量,用葡萄糖氧化酶法检测细胞培养基中葡萄糖的变化来研究蓝莓花色苷提取物的对细胞胰岛素抵抗的干预作用。北陆花色苷提取物在低于200μg/m L的浓度时,灿烂和园蓝花色苷提取物在低于100μg/m L的浓度时,对HepG2细胞活力无明显影响;以诱导剂胰岛素的浓度为1×10-8mol/L,孵育24h作为诱导条件,其模型效果较佳、对细胞活力改变小且稳定性好;3个品种的蓝莓花色苷提取物在7.8125～31.25μg/m L浓度时,可不同程度促进正常HepG2细胞和胰岛素抵抗的HepG2细胞对葡萄糖的消耗量,且与剂量成正比关系,在31.25μg/m L达到促进最大值,与模型组比较均有极显著差异,糖消耗量分别增加了60%、65%和88%。三个品种的蓝莓花色苷提取物均能较好的预防和改善胰岛素抵抗HepG2细胞对葡萄糖的利用。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷对骨骼肌细胞脂蛋白脂肪酶活性的影响

富含矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-g)的花色苷提取物可抑制肥胖,但其作用机制不明。骨骼肌细胞脂蛋白脂肪酶(LPL)活性与肥胖相关,LPL使骨骼肌中的β-脂肪酸氧化增强,从而加速清除体内循环的甘油三酯(TG),抑制TG流向脂肪组织积聚而导致肥胖。本实验建立稳定的骨骼肌细胞分离培养方法,通过花色苷Cy-3-g干预骨骼肌细胞,研究Cy-3-g对细胞LPL活性的影响及其作用机制。结果表明：Cy-3-g通过激活一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)上调骨骼肌细胞LPL活性,提示Cy-3-g具有潜在的调节机体脂代谢作用,与含Cy-3-g的花色苷提取物的肥胖抑制作用密切相关。     

紫色马铃薯花色苷改善HepG2细胞胰岛素抵抗模型糖代谢的机制

目的:观察紫色马铃薯花色苷对HepG2细胞胰岛素抵抗模型糖代谢的作用并对其机制进行初探。方法:以高浓度葡萄糖培养基为诱导因素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗细胞模型,通过葡萄糖氧化酶法、四唑盐比色实验(MTT)和蛋白质印迹法(Western blot)检测紫色马铃薯花色苷对胰岛素抵抗细胞模型的葡萄糖消耗量、细胞存活率和胰岛素信号通路的蛋白表达的影响。结果:与空白对照组相比,当诱导培养基中葡萄糖浓度为50 mmol/L时吸光度的差值最大,所以选50 mmol/L的葡萄糖培养基来建立胰岛素抵抗细胞模型;花色苷的处理胰岛素抵抗细胞的浓度为40~100 μg/mL时,葡萄糖消耗量可高达19.55 mmol/L显著(p<0.05)高于模型对照组;花色苷浓度为40~100 μg/mL时细胞存活率基本上可以保持在80%,细胞毒性较小;花色苷可以调节因高浓度葡萄糖诱导而导致的IR、IRS-1、IRS-2水平下降的情况,降低p-IRS-1的表达水平,还可以阻止GLUT-2水平的降低。结论:紫色马铃薯花色苷可以改善HepG2细胞胰岛素抵抗模型的胰岛素信号通路抑制的情况,改善胰岛素抵抗模型的糖代谢。     

黑米花色苷矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞炎症损伤的保护作用

单核细胞介导的炎症反应在动脉粥样硬化发生和发展过程中起关键作用。花色苷是一种具有多种生物学活性的多酚类黄酮化合物,富含于各种深色的蔬菜、水果及谷类中,其中矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-β-glucoside,Cy-3-g）是花色苷中重要的单体,本研究旨在探讨黑米来源的Cy-3-g对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人单核白血病细胞（Tohoku hospital pediatrics-1,THP-1）炎症损伤的作用及可能的分子机制。采用乙醇-盐酸溶液浸提、大孔树脂吸附洗脱等步骤得到黑米花色苷粗提物,然后用中压液相层析联合紫外检测提取得到纯化的Cy-3-g（纯度>96.5%）。用不同质量浓度（0、0.10、0.25μg/mL和0.50μg/mL）Cy-3-g与THP-1细胞共孵育4 h,然后加入LPS（质量浓度50 ng/mL）与细胞继续孵育48 h,用酶联免疫吸附试验法测定培养液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、IL-10和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fac...     

矢车菊素-3-葡萄糖苷通过AMPK抑制成熟脂肪细胞脂蛋白脂酶活性

通过矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-g)干预成熟脂肪细胞,研究Cy-3-g对细胞脂蛋白脂酶(LPL)活性的影响及其作用机制。结果表明:Cy-3-g通过激活一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)抑制成熟脂肪细胞的LPL活性,提示Cy-3-g具有潜在的调节机体脂代谢作用,与含Cy-3-g的花色苷提取物的肥胖抑制作用密切相关。     

矢车菊-3-葡萄糖苷对环氧丙酰胺诱导的MDA-MB-231细胞氧化应激的保护作用

从干预细胞氧化应激的角度,采用比色法、荧光检测及免疫分析的方法,考察不同浓度的矢车菊-3-葡萄糖苷对环氧丙酰胺引起的人类乳癌细胞MDA-MB-231毒性的影响。试验结果表明,与环氧丙酰胺单独处理的细胞相比,矢车菊-3-葡萄糖苷预处理后能明显提高细胞存活率,显著降低细胞内活性氧和丙二醛的生成量,而且抑制细胞内还原型谷胱甘肽含量的下降,提高γ-GCS蛋白表达量。矢车菊-3-葡萄糖苷能够保护MDA-MB-231细胞免受环氧丙酰胺引起的氧化应激。     

三种紫色作物花色苷对ST细胞单层生长的影响

为揭示花色苷对猪睾丸细胞(ST)单层生长的影响,实验以黑加仑、黑豆皮、笃斯越桔三种作物花色苷为研究试材,处理ST细胞,光学显微镜观察不同花色苷处理后ST细胞生长情况,探索花色苷对细胞生长的最适浓度。结果表明:不同浓度的花色苷对ST细胞生长的影响不同,低浓度促进细胞生长,高浓度对细胞具有毒性。不同作物花色苷对ST细胞生长的影响也不同,笃斯越桔的最终安全浓度为100μg/mL,黑加仑、黑豆皮分别为30、40μg/mL。研究结果可进一步拓展花色苷功能性研究,为抑制病毒作用的细胞模型建立提供理论基础。      

垫状卷柏总黄酮的抗氧化和抗肿瘤活性

目的:研究垫状卷柏总黄酮的抗氧化能力,以及对人宫颈癌细胞Hela、人乳腺癌细胞MDA-MB-231、人前列腺癌细胞PC-3M的生长抑制作用。方法:采用Fenton法、邻苯三酚自氧化法、DPPH法和还原力测定法评价垫状卷柏总黄酮的体外抗氧化能力。CCK-8法检测垫状卷柏总黄酮的抗肿瘤细胞增殖活性。结果:在总黄酮质量浓度为20¹00μg/m L之间,垫状卷柏总黄酮对羟基自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基的清除率随总黄酮质量浓度升高而增高,半数清除率EC₅₀分别为111.86、89.24、26.51μg/m L;对Hela、PC-3M和MDA-MB-231细胞的抑制作用在总黄酮质量浓度为6.59⁷9.02μg/m L范围内均呈剂量依赖性,作用时间为72 h的抑制率高于48 h的抑制率。结论:垫状卷柏总黄酮抗氧化活性作用能力强,对Hela、PC-3M和MDA-MB-231细胞具有显著的增殖抑制作用。      

基于Gluconobacter oxydans膜结合脱氢酶的静息细胞催化合成2-酮基-D-葡萄糖酸

基于G.oxydans DSM2003膜结合葡萄糖酸-2-脱氢酶（GA-2-DH）的催化特性,利用静息细胞催化技术合成D-异抗坏血酸（EA）的主要前体2-酮基-D-葡萄糖酸（2-KGA）。利用高浓度底物自适应筛选技术,筛选到高产2-KGA菌株并对其摇瓶催化进行优化,优化后最适条件为:温度30℃,pH6.0,细胞浓度20g/L,底物浓度1100mmol/L,摇床转速250rmin,此时时空产率为24.68mmol/L/h;摇瓶优化工艺基础上在7L发酵罐中对重点影响参数（转速与底物浓度）进行了进一步优化,优化后2-KGA的时空产率提高到74mmol/L/h,并且催化细胞可有效重复利用3次。      

紫甘薯花色苷制备及其抑制3T3-L1前脂肪细胞生长增殖研究

目的:制备紫甘薯花色苷提取物并分析其主要成分,研究其对3T3-L1前脂肪细胞生长增殖的抑制作用。方法:应用响应曲面法优化提取条件;用高效液相色谱法(HPLC)分析其主要成分;以3T3-L1前脂肪细胞为体外模型,利用MTT法得到最佳铺板密度,得到细胞生长曲线,从而在最佳密度和对数生长期检测不同浓度紫甘薯花色苷提取物对3T3-L1前脂肪细胞的增殖的影响。结果:花色苷提取物总量达到39.79 mg/g;选择细胞接板密度为5×103 cfu/mL,细胞铺板12h之后继续培养24 h,紫甘薯花色苷从最低质量浓度15.625μg/mL时即相对于空白组能显著抑制3T3-L1前脂肪细胞生长增殖的作用(P0.05)且具有剂量效应关系,紫甘薯花色苷半数抑制浓度IC50为(413.853±2.617)μg/mL。结论:体外细胞实验显示紫甘薯花色苷具有抑制脂肪细胞生长增殖,提示紫甘薯花色苷具有预防肥胖的作用。     

刺葡萄花色苷自聚合条件及水合动力学特性的研究

花色苷自聚合是实现其稳定化的重要途径。研究了花色苷浓度、pH、温度、时间、纯度、溶剂体系等对刺葡萄花色苷自聚合效应的影响。结果表明:刺葡萄花色苷粗提液适宜的自聚合条件为:pH3,时间60min,温度20℃,浓度超过0.24mmo/L。在此条件下,聚合度达到50.5433以上。对于3种不同纯度的刺葡萄花色苷溶液,纯度越高,自聚合效应越强,且更易发生自聚合,提示刺葡萄花色苷分子间共色及辅色效应可能存在制约机制。模拟葡萄酒、葡萄汁的体系条件,发现刺葡萄花色苷在醇系中自聚合作用的强度大于在水系中,两者发生自聚合作用的初始浓度分别为0.03mmol/L和0.06mmol/L。通过对花色苷溶液水合动力学分析,发现花色苷浓度增大,其表观水合系数K减小,解离常数pK增大,说明花色苷的自聚合加强了其疏水性,使解离更加困难,稳定性提高。     

丙烯酰胺对睾丸间质细胞R2C活性及孕酮合成功能的影响

目的：研究丙烯酰胺（acrylamide,AA）对体外培养的睾丸间质细胞R2C生长及孕酮合成功能的影响。方法：用浓度为0.25、0.5、0.75、1、2、4、6 mmol/L的AA作用于R2C细胞24 h,四甲基偶氮唑蓝（methylthiazolyl tetrazolium,MTT）法获得IC25、IC50及IC75的AA作用浓度。用以上3 种浓度的AA处理R2C细胞24 h,观察细胞形态。AA作用于R2C细胞4 h后,通过彗星实验（Comet assay）检测细胞DNA的损伤程度;放射免疫法（radioimmunoassay,RIA）测定AA处理R2C细胞4 h和24 h后的孕酮合成量。结果：AA能抑制R2C细胞活性,其IC25、IC50、IC75分别为1.140、1.925、3.250 mmol/L;3 种浓度的AA能不同程度地影响R2C细胞生长形态;作用4 h对R2C细胞DNA有损伤作用;各浓度组作用24 h后均能降低R2C细胞的孕酮合成量。结论：AA能影响R2C细胞增殖及孕酮合成能力。     

叔丁基对苯二酚对人正常肝细胞的毒性

目的:研究叔丁基对苯二酚在大鼠体内代谢后的浓度及在该浓度范围内的体外细胞毒性。方法:大鼠高剂量(700mg/kg)灌胃后,运用液相色谱/质谱联用法检测血清中叔丁基对苯二酚的浓度。以人正常肝细胞HL7702为研究对象,采用MTT法检测叔丁基对苯二酚的细胞毒性,采用倒置显微镜观察细胞形态变化,并评估叔丁基对苯二酚在体内浓度范围内的体外细胞毒性。结果:叔丁基对苯二酚抑制细胞生长,并使细胞形态学特征改变;随着浓度升高(0.01～1.2mmol/L)和细胞培养时间延长(12～48h),其对细胞的毒性作用加剧(细胞毒性等级0～4);细胞培养时间为12、24、48h时,半致死浓度分别为0.63、0.34、0.16mmol/L;大鼠血清中叔丁基对苯二酚的浓度≤0.12mmol/L,细胞毒性等级0～2级。结论:经口进入体内的叔丁基对苯二酚,代谢后的体内浓度不会引起高细胞毒性反应。     

L-氨基酸氧化酶的诱导表达及生物催化合成5-氨基戊酸的研究

L-氨基酸氧化酶可以催化L-氨基酸生成酮酸等化学品,具有重要的应用前景。本研究成功将来源于红球菌（Rhodococcus opacus）的氨基酸氧化酶在大肠杆菌中表达,并首次用于生物催化合成5-氨基戊酸。结果表明:L-氨基酸氧化酶诱导表达最适温度为25℃,最适诱导剂浓度0.5 mmol/L,最适诱导时间为7 h,诱导时最佳细胞量为0.246 g/L。催化合成5-氨基戊酸时,最适底物L-赖氨酸（Lys）浓度17 mmol/L,最适p H为7.0,最适温度为37℃,最适时间为24 h,最适补加0.5%H₂O₂,添加酶与黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）的最适摩尔比为1∶1,最终5-氨基戊酸产量达到16.71 mmol/L。本研究成功的实现了单酶（LAAO）合成5-氨基戊酸,为简便生物合成5-氨基戊酸奠定基础。      

黑花生衣花色苷含量测定及稳定性研究

从黑花生衣中提取花色苷,并测定其含量;测定不同温度、酸碱度、光照及金属离子（Cu2+、Mn2+、Mg2+、Fe3+）对黑花生衣花色苷稳定性的影响。在提取条件为料液比1∶50、乙醇浓度60%且为酸性、温度60℃、提取时间60min时,黑花生衣色素中花色苷含量为10.3mg/g;加热对花色苷有增色作用;pH小于5.0时随着pH增大花色苷的吸光度降低,pH大于5.0时随pH增大花色苷的吸光度增加,并朝蓝色趋势渐变;pH越接近7.0,光照后花色苷保存率越高;在Mn2+、Mg2+浓度为2.00mmol/L时,花色苷吸光度最高;随Fe3+、Cu2+浓度增加花色苷的吸光度随之增加,铁离子对黑花生衣花色苷无絮凝作用。      

大孔树脂纯化蓝莓果中花色苷的研究

比较了10种大孔树脂对蓝莓花色苷的吸附和解吸效果,研究了AB-8型大孔树脂对蓝莓花色苷的吸附与解吸条件.结果表明,AB-8型大孔树脂是纯化蓝莓花色苷效果较好的树脂;蓝莓花色苷在AB-8型树脂上的吸附平衡时间为4 h,解吸平衡时间为2 h,吸附的最适质量浓度为750 mg/L;30 ℃,pH 3.0时吸附能力比较强,解吸时宜选用体积分数60 %乙醇溶液.该工艺生产的花色苷产品为紫黑色粉末,色价为54.10,回收率为88.20 %.     

L-氨基酸氧化酶的诱导表达及生物催化合成5-氨基戊酸的研究

L-氨基酸氧化酶可以催化L-氨基酸生成酮酸等化学品,具有重要的应用前景。本研究成功将来源于红球菌(Rhodococcus opacus)的氨基酸氧化酶在大肠杆菌中表达,并首次用于生物催化合成5-氨基戊酸。结果表明:L-氨基酸氧化酶诱导表达最适温度为25℃,最适诱导剂浓度0.5 mmol/L,最适诱导时间为7 h,诱导时最佳细胞量为0.246 g/L。催化合成5-氨基戊酸时,最适底物L-赖氨酸(Lys)浓度17 mmol/L,最适p H为7.0,最适温度为37℃,最适时间为24 h,最适补加0.5%H_2O_2,添加酶与黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)的最适摩尔比为1∶1,最终5-氨基戊酸产量达到16.71 mmol/L。本研究成功的实现了单酶(LAAO)合成5-氨基戊酸,为简便生物合成5-氨基戊酸奠定基础。     

外源添加物质对黑莓清汁花色苷稳定性和抗氧化活性的影响

本文研究了咖啡酸、阿魏酸、单宁酸、黄芩素、茶多酚、没食子酸、原儿茶酸、芦丁等8种外源辅色素对黑莓清汁花色苷辅色效果、热稳定性、光稳定性和体外抗氧化活性的影响。结果表明:咖啡酸、原儿茶酸、茶多酚、没食子酸、单宁酸对黑莓清汁花色苷的辅色效果影响较显著(p<0.05),最适浓度为0.1 mmol/L,而芦丁的最佳辅色浓度为0.4 mmol/L;实验所选辅色素能够在一定程度上提高黑莓清汁花色苷的热稳定性,其中没食子酸、阿魏酸、咖啡酸对其影响效果显著(p<0.05),分别使黑莓清汁花色苷的热降解半衰期延长了6.06、2.07和1.39倍。此外,原儿茶酸、阿魏酸、芦丁能够显著提高黑莓清汁花色苷的光稳定性、DPPH自由基清除能力和总还原力(p<0.05);没食子酸和单宁酸的辅色作用降低了黑莓清汁花色苷的光稳定性。黄芩素、阿魏酸、咖啡酸、芦丁等外源物质可作为黑莓清汁花色苷有效的辅色素。