绿原酸在小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化进程中的作用

目的:探讨绿原酸(CGA)对小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。方法:培养小鼠3T3-L1前脂肪细胞,分别设置空白对照组(CG)、阳性对照组罗格列酮组(RG)、阴性对照组GW9662组(GG)和绿原酸组(CGA)。油红O染色观察小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化后的细胞形态变化以及脂滴形成情况;组织细胞甘油三酯(TAG)酶法测定各组分化后的细胞TAG积累量;实时荧光定量PCR技术(q PCR)检测小鼠3T3-L1前脂肪细胞在分化过程中关键基因PPARγ2 mRNA表达水平。结果:CGA组被油红O染色的区域大于CG组和GG组,但CGA组颜色没有RG组鲜艳,且脂滴形状也与RG组存在差异。CGA组TAG积累量低于CG组和RG组,与CG组比较无显著性差异(P0.05),但与RG组比较有显著性差异(P0.05)。在分化过程中,CGA组和RG组PPARγ2 mRNA的表达量高于CG组和GG组,有显著性差异(P0.01),GG组PPARγ2 mRNA的表达量自细胞分化第4d起低于CG组,有显著性差异(P0.01)。结论:CGA可以促进小鼠3T3-L1前脂肪细胞的分化,同时降低分化后成熟脂肪细胞中TAG的积累量,其机制与分化相关因子PPARγ2的表达有关。     

发酵大麦提取物对3T3-L1前脂肪细胞分化及脂代谢的影响

研究乳酸菌发酵大麦提取物(LFBE)对3T3-L1前脂肪细胞分化及其脂代谢的影响与作用途径。利用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum dy-1)发酵大麦获得LFBE,采用Folin-Ciocalteu法测定总酚含量;凯氏定氮法测定蛋白质含量与苯酚硫酸法测定多糖含量;采用CCK-8法检测细胞增殖能力和油红O染色法分析前脂肪细胞的分化程度;采用Realtime PCR法检测LFBE对脂代谢关键基因转录水平的调控作用。结果表明,与未发酵大麦提取物相比,LFBE中总酚含量增加了20.88%;LFBE中蛋白质含量从发酵前的13.93%增加至34.94%;多糖含量从未发酵时的64.94%下降至35.43%。与未发酵大麦提取物组相比,LFBE能够有效地抑制3T3-L1前脂肪细胞的生长,其IC_(50)约为560μg/mL;与模型组和未发酵大麦提取物组相比,400μg/mL LFBE能够显著抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,抑制率达到58.85%。与模型组相比,LFBE能显著抑制脂代谢关键基因C/EBPα、PPAR-γ、SREBP-1c、PTP1B和aP2的mRNA表达水平,上调GLUT4的mRNA表达水平(p0.05)。LFBE可有效抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖,并通过调节脂代谢相关基因的转录水平抑制其分化,表明其可能具有预防肥胖的作用。     

双酚S影响3T3-L1前脂肪细胞分化及其作用机制的研究

双酚A(BPA)的内分泌干扰作用以及对人体产生的不良影响,使双酚S(BPS)作为替代品在食品包装材料中应用更加广泛。BPS在大规模应用之前,并没有对其安全性进行充分研究。本文以3T3-L1前脂肪细胞为体外模型,探究BPS对3T3-L1前细胞分化的影响及作用途径,评价BPS安全性的同时,也为肥胖等慢性代谢疾病的预防提供参考。研究结果表明:BPS能促进3T3-L1前脂肪细胞生长,当浓度超过400μmol/L时,才能显著抑制细胞的增殖;BPS能显著诱导分化的3T3-L1细胞内脂质的积累,并呈现非剂量依赖关系;与模型组相比,BPA上调PPARγ、C/EBR和aP2基因的表达,而BPS只作用PPARγ基因的过表达,BPS和BPA都能使GLUT4基因的表达显著下降(p0.01)。总之BPS和BPA作用脂肪细胞分化的途径不完全一样,可能是在多种转录因子的共同作用下完成的。     

白藜芦醇通过降低LYRM1 mRNA表达抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖

目的：观察白藜芦醇（resveratrol,Res）对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性的影响,并探讨其机制。方法：对3T3-L1前脂肪细胞进行培养,分别设置对照组以及25、50、75、100 μmol/L的Res干预组,噻唑蓝比色法观察不同剂量干预对细胞增殖活性的影响;实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞中LYR Motif containing 1（LYRM1）基因mRNA的表达情况;Western blotting实验检测细胞中促凋亡蛋白Bak和抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。结果：Res干预可使3T3-L1前脂肪细胞增殖活性降低;细胞中LYRM1 mRNA水平降低,Bak蛋白表达含量升高,Bcl-2蛋白表达含量降低,均具有剂量依赖效应。结论：Res可以抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,这可能与Res降低细胞内LYRM1 mRNA表达,影响线粒体功能并启动凋亡程序有关。     

芹菜素对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化作用研究

目的：研究芹菜素(apigenin,AP)对3T3-L1 前脂肪细胞增殖及分化的影响。方法：采用3T3-L1 前脂肪细胞,利用MTT 比色分析法检测不同质量浓度芹菜素对3T3-L1 前脂肪细胞增殖的影响;采用传统的鸡尾酒诱导剂诱导分化3T3-L1 前脂肪细胞,利用油红O 染色检测,通过比色分析法检测不同质量浓度芹菜素对3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响。结果：30、50μg/mL 芹菜素相对于空白组和阳性对照组能够显著抑制3T3-L1 前脂肪细胞增殖和分化,提示其可能具有预防肥胖的作用。     

染料木黄酮抑制3T3-L1细胞成脂分化机制

目的：研究染料木黄酮是否通过雌激素受体介导影响3T3-L1前脂肪细胞成脂分化,并探讨其可能的机制。方法：以不同浓度染料木黄酮处理3T3-L1细胞,四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法测定细胞存活率;在3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中分别加入不同浓度染料木黄酮、染料木黄酮和ICI182780（一种雌激素受体抑制剂）混合物及不同浓度雌二醇,油红染色观察分化结果,测定细胞甘油三酯（triglyceride,TG）含量;染料木黄酮、染料木黄酮和ICI182780混合物及不同浓度雌二醇处理诱导成熟后的脂肪细胞,测定培养液甘油含量;分别用染料木黄酮（30 μmol/L）、染料木黄酮（30 μmol/L）和ICI182780混合物干预细胞成脂分化,Western blotting法检测细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）、p-ERK、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK）、p-AMPK、激素敏感性脂肪酶（hormone sensitive lipase,HSL）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）蛋白表达量。结果：3T3-L1细胞存活率随染料木黄酮浓度的升高而降低,50～200 μmol/L染料木黄酮能抑制细胞生长（P＜0.01）;染料木黄酮能负向调节成脂分化后细胞胞浆内TG含量,在0～50 μmol/L浓度范围内呈剂量依赖关系,高剂量雌二醇（100 nmol/L）能下调TG含量;染料木黄酮能促进成熟脂肪细胞脂解,提高细胞培养液甘油浓度;染料木黄酮（30 μmol/L）能上调p-AMPK、HSL蛋白表达,下调FAS蛋白表达（P＜0.01）,对ERK、p-ERK、AMPK表达量无明显影响（P＞0.05）。ICI182780（1 μmol/L）能部分阻断染料木黄酮（30 μmol/L）对p-AMPK的调节作用（P＜0.05）。结论：染料木黄酮能抑制3T3-L1细胞成脂分化,其机制可能是染料木黄酮一方面下调FAS蛋白表达,抑制脂肪合成,另一方面激活AMPK-HSL途径促进脂肪分解;染料木黄酮还可能通过非雌激素受体途径抑制3T3-L1细胞成脂分化。     

荷叶生物碱对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的:研究荷叶生物碱提取物对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响及其可能的作用机理。方法:采用MTT法检测荷叶生物碱提取物(LLAE)对前脂肪细胞生长的抑制效果并确定半抑制浓度(IC50);流式细胞仪技术测定细胞周期及凋亡情况;使用诱导剂对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色法分析荷叶生物碱提取物(LLAE)对前脂肪细胞分化程度的影响。结果:荷叶生物碱提取物(LLAE)能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖且呈剂量时间依赖性;在G0/G1期产生阻滞,有效诱导细胞凋亡;能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,降低细胞中脂肪滴的积累。结论:荷叶生物碱提取物(LLAE)能有效地抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖及分化,揭示其可能具有预防肥胖的功效。     

蜂胶及其提取物对3T3-L1前脂肪细胞增殖的作用

研究巴西蜂胶、中国蜂胶乙醇提取物,中国蜂胶乙酸乙酯及水提取物以及蜂胶中主要组分短叶松素、咖啡酸苄酯、咖啡酸苯乙酯、芹菜素、松属素、白杨素、高良姜素和木犀草素对3T3-L1前脂肪细胞的影响。采用正常培养的3T3-L1前脂肪细胞经不同浓度、不同提取方法得到的蜂胶及其主要组分分别处理24 h,倒置显微镜观察细胞形态,SRB法检测细胞存活率。蜂胶及其各种提取物抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖效果各不相同,中国蜂胶、中国蜂胶乙酸乙酯提取物、咖啡酸苯乙酯抑制增殖尤为明显。蜂胶及其主要组分抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖。     

苦瓜提取物抑制3T3-L1脂肪细胞脂肪沉积研究

研究表明苦瓜具有一定减肥效果,但其确切分子机理尚未阐明,因此本实验研究苦瓜正丁醇提取物抑制脂肪沉积活性及其作用机制。针对3T3-L1脂肪细胞,利用噻唑蓝法检测苦瓜正丁醇提取物对细胞活性影响;采用油红O染色检测苦瓜正丁醇提取物对细胞脂肪沉积的影响;利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测苦瓜提取物对脂肪沉积转录因子和脂肪酸代谢关键基因mRNA转录水平调控作用。结果表明：相对空白对照组,苦瓜提取物能明显减少3T3-L1细胞脂肪沉积,抑制转录因子C/EBPα、PPARγ和SREBP-1c的mRNA表达,对脂肪酸代谢基因GLUT4、ACC1、Fasn、AP2和LPL的mRNA表达抑制明显（P＜0.05）。总之,苦瓜正丁醇提取物对脂肪沉积具有一定抑制作用,可能通过下调脂肪沉积相关基因mRNA转录水平表达起作用。     

EGCG通过激活AMPK、抑制PPARγ调控3T3-L1脂肪细胞中脂滴蓄积

研究表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate,EGCG）对3T3-L1成熟脂肪细胞脂滴蓄积的影响。通过体外诱导分化培养3T3-L1前脂肪细胞,经EGCG处理后,脂肪细胞脂滴大小减小,并表现为时间和浓度依赖性;不会引起成熟脂肪细胞的凋亡。与对照组相比,EGCG处理组显著降低与脂代谢、转运和吸收相关基因的mRNA的表达水平;EGCG处理可以显著降低过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferators-activated receptor-γ,PPARγ）的表达并激活腺苷一磷酸（adenosine monophosphate,AMP)活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）。使用AMPK抑制剂Dorsomorphin处理成熟脂肪细胞,发现与单独抑制剂组相比,EGCG能提高磷酸化-AMPK的表达水平,并抑制PPARγ的表达。结论：EGCG可能通过激活AMPK从而抑制PPARγ的表达并显著降低与脂代谢、转运和吸收相关基因的mRNA的表达水平,从而减少3T3-L1成熟脂肪细胞的脂滴蓄积。     

多不饱和脂肪酸对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

本文利用MTS比色分析法、细胞形态学分析法及诱导分化法结合油红染色比色分析法研究了α-亚麻酸(alpha-linolenic acid,ALA)、亚油酸(linoleic acid,LA)对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响。MTS结果显示,在一定浓度范围内ALA、LA均能呈剂量依赖关系和时间依赖关系的抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖,且ALA抑制增殖作用强于LA;细胞形态学分析结果显示,ALA、LA在高浓度时均显示出细胞毒性作用;倒置显微镜观察和油红染色检测结果显示,ALA、LA、ALA/LA混合脂肪酸(1:1,n/n)在12.5~200μmol/L浓度范围内均能浓度依赖式的抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,且ALA抑制分化作用强于LA,但当浓度100μmol/L时,ALA/LA混合脂肪酸(1:1,n/n)的抑制分化作用强于同浓度的ALA,当浓度为200μmol/L时,比较ALA/LA摩尔比为1:4、1:2、1:1的混合脂肪酸抑制分化效果发现,比值为1:1的略强但相互之间效果差异不明显。     

紫马铃薯花色苷对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的:研究紫马铃薯花色苷提取物对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响及其机理。方法:采用MTT法检测紫马铃薯花色苷提取物(PPAE)对细胞生长的抑制效果,确定半抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡情况;对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色比色分析紫马铃薯花色苷提取物(PPAE)对其分化程度的影响。结果:紫马铃薯花色苷提取物(PPAE)能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖且呈剂量时间依赖性;能有效诱导细胞凋亡,同时在G2/M期产生阻滞;紫马铃薯花色苷提取物能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,减少细胞中脂质的沉积。结论:紫马铃薯花色苷提取物能有效抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖与分化,提示其可能具有预防肥胖的功效。     

紫甘薯花色苷制备及其抑制3T3-L1前脂肪细胞生长增殖研究

目的:制备紫甘薯花色苷提取物并分析其主要成分,研究其对3T3-L1前脂肪细胞生长增殖的抑制作用。方法:应用响应曲面法优化提取条件;用高效液相色谱法(HPLC)分析其主要成分;以3T3-L1前脂肪细胞为体外模型,利用MTT法得到最佳铺板密度,得到细胞生长曲线,从而在最佳密度和对数生长期检测不同浓度紫甘薯花色苷提取物对3T3-L1前脂肪细胞的增殖的影响。结果:花色苷提取物总量达到39.79 mg/g;选择细胞接板密度为5×103 cfu/mL,细胞铺板12h之后继续培养24 h,紫甘薯花色苷从最低质量浓度15.625μg/mL时即相对于空白组能显著抑制3T3-L1前脂肪细胞生长增殖的作用(P0.05)且具有剂量效应关系,紫甘薯花色苷半数抑制浓度IC50为(413.853±2.617)μg/mL。结论:体外细胞实验显示紫甘薯花色苷具有抑制脂肪细胞生长增殖,提示紫甘薯花色苷具有预防肥胖的作用。     

苦丁茶、决明子、山楂中功能成分抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的协同作用

研究了常被用于降脂减肥的苦丁茶、决明子和山楂中主要功能成分熊果酸、大黄素和槲皮素在抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化方面的作用关系。将熊果酸和槲皮素分别和大黄素复配,用等效线图解法分析其在抑制3T3-L1细胞增殖方面的作用。结果表明,熊果酸和大黄素在大黄素所占比例为1/10,1/4和1/2时具有协同作用,而当大黄素比例升高,二者的协同作用消失,变成拮抗作用。槲皮素和大黄素所有比例的复配都无协同作用。此外,大黄素具有增强熊果酸抑制3T3-L1前脂肪细胞分化成成熟脂肪细胞的能力,提示熊果酸和大黄素在一定比例的复配可被应用到减肥药物及饮食的设计中。     

类黄酮化合物抑制NDM-1活性的构效关系

选择食物来源相对丰富且分子结构具有一定差异的3种类黄酮化合物(槲皮素、木犀草素、染料木黄酮),通过碘量法比较它们对新德里金属β内酰胺酶-1(NDM-1)的抑制活性。通过分子对接软件分析化合物对NDM-1的理论结合能力,建立类黄酮化合物抑制NDM-1活性的构效关系。碘量法分析结果表明,3种类黄酮化合物对NDM-1抑制活性差异表现为染料木黄酮木犀草素槲皮素,这一结果与分子对接理论分析结果一致。由此,3种化合物抑制NDM-1的构效关系为:B环处于C环3位(染料木黄酮),是抑制NDM-1的相对优势结构;而C环3位羟基(槲皮素)对抑制NDM-1活性具有一定削弱作用。     

中长链脂肪酸对3T3-L1脂肪细胞凋亡和脂肪生成的作用

为了探究不同种类、不同浓度脂肪酸对3T3-L1脂肪细胞凋亡和脂肪生成的影响,以3T3-L1脂肪细胞为研究对象,用不同种类、不同浓度的中长链脂肪酸处理细胞,观察细胞凋亡和脂肪生成情况。结果发现:中长链脂肪酸可以抑制3T3-L1脂肪细胞增殖,并且存在剂量依赖性,C16∶0、C18∶0、C18∶3c6,9,12、EPA处理组与对照组相比,具有显著性差异,而DHA处理组与对照组相比具有极显著性差异;C18∶3c6,9,12和EPA处理后,剪切形式PARP增加,说明C18∶3c6,9,12和EPA能诱导细胞凋亡;油红O染色结果表明两种浓度(150μmol/L和180μmol/L)的EPA和DHA均能显著促进脂肪细胞的脂肪生成。综上可知,不同脂肪酸对细胞生长、增殖和凋亡有不同作用,特别是EPA能诱导细胞凋亡,EPA和DHA可显著促进细胞的脂肪生成。     

3T3-L1前脂肪细胞在功能性成分评价中的应用

脂肪细胞的增殖与分化异常是导致人类肥胖、心血管疾病和Ⅱ型糖尿病等的发生的主要原因,而3T3-L1前脂肪细胞是国际上公认的研究脂肪代谢的细胞模型,因此脂肪细胞的增殖与分化已成为研究的热点。本文主要论述3T3-L1前脂肪细胞的体外培养、增殖与分化及调控及其在功能性成分的评价中的应用,以期为预防和治疗肥胖及糖尿病等并发症提供一定的理论参考。     

异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用

目的：考察异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,探究其作用机制。方法：采用3T3-L1前脂肪细胞,利用磺酰罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）法检测异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响,采用传统的鸡尾酒法诱导3T3-L1细胞分化为脂肪细胞,利用油红O染色法检测分化细胞脂滴形成;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应方法,检测细胞CCAAT增强子结合蛋白（CCAAT-enhancer-binding proteins,C/EBP）亚型C/EBPα、C/EBPβ、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）、脂肪分化相关蛋白adipophilin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators activated receptor γ,PPARγ）、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphateactivated protein kinase,AMPK）的mRNA表达水平,Western blotting法检测AMPK蛋白磷酸化水平。结果：异甘草素可浓度依赖性地抑制3T3-L1细胞增殖,并明显抑制分化细胞内脂滴形成,同时抑制了细胞分化相关基因C/EBPα、C/EBPβ、FAS、adipophilin、PPARγ mRNA的表达,AMPK mRNA的表达未受影响,但异甘草素处理明显上调了AMPK蛋白的磷酸化水平。结论：异甘草素可抑制3T3-L1前脂肪细胞向脂肪细胞分化,其机制可能与活化AMPK信号通路相关。