细胞凋亡检测剂125,131I-Annexin Ⅴ的制备和初步评价

利用国内基因工程制备的Annexin Ⅴ,采用Iodo-Gen标记方法,研究了125,131I-Annexin Ⅴ的标记条件.在每管加入50 μg Iodo-Gen、pH=6～7.8、Annexin Ⅴ的质量浓度大于25 μg/mL的条件下,反应10 min,标记物的标记率大于80%.经PD-10色谱柱纯化后,标记物的放化纯度大于95%,室温下,标记物能稳定40 h.在正常小鼠体内的生物分布实验表明,碘标记的Annexin Ⅴ主要浓聚于肝、脾、肾,在体内清除很快.凋亡细胞结合分析表明,碘标记的Annexin Ⅴ保持了较好的生物活性,对PS的解离常数K为8.53 nmol/L,结合容量RT为1.23×106结合位点数/个细胞.所制备的细胞凋亡检测剂125,131I-Annexin Ⅴ可以用于进一步的动物模型或人体实验.     

细胞凋亡检测剂~(125,131)I-Annexin Ⅴ的制备和初步评价

利用国内基因工程制备的Annexin Ⅴ,采用Iodo-Gen标记方法,研究了125,131I-Annexin Ⅴ的标记条件.在每管加入50 μg Iodo-Gen、pH=6～7.8、Annexin Ⅴ的质量浓度大于25 μg/mL的条件下,反应10 min,标记物的标记率大于80%.经PD-10色谱柱纯化后,标记物的放化纯度大于95%,室温下,标记物能稳定40 h.在正常小鼠体内的生物分布实验表明,碘标记的Annexin Ⅴ主要浓聚于肝、脾、肾,在体内清除很快.凋亡细胞结合分析表明,碘标记的Annexin Ⅴ保持了较好的生物活性,对PS的解离常数K为8.53 nmol/L,结合容量RT为1.23×106结合位点数/个细胞.所制备的细胞凋亡检测剂125,131I-Annexin Ⅴ可以用于进一步的动物模型或人体实验.     

正电子核素标记Annexin V的研究进展

Annexin V是一种磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合,因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指针.利用正电子核素对Annexin V进行标记后,通过与PS的结合可检测细胞凋亡,实现活体无创正电子发射计算机断层显像(PET),从而进行人体细胞凋亡研究,达到疾病早期诊断的目的.本文就正电子核素标记Annexin V用于凋亡显像的研究现状进行综述.     

放射性Annexin V活体检测细胞凋亡的研究进展

概述了放射性Annexin V活体检测细胞凋亡的研究状况，介绍了这类显像剂在医学临床研究上的优越性，并对放射性标记Annexin V显像剂的研究方法和进展进行了评述。     

Annexin V的125I标记及其在正常小鼠体内的分布

采用Iodogen法对Annexin V进行了^125I标记,并观察了其在正常小鼠体内的分布情况.标记结果显示,^125I-Annexin V 标记率达94.9%,纯化后放化纯度达99%;室温放置72 h后,放化纯度仍保持在92%以上,表明其体外稳定性较好.生物分布结果显示,^125I-Annexin V在肾脏中放射活性最高,其次为血液、肝脏、心、肺、脾;脑不吸收^125I-Annexin V;肌肉、骨骼组织摄取亦较少;各组织、器官放射性摄取在1 h内除血液下降稍慢外,其余均有明显下降.表明^125I-Annexin V 适合用作核医学诊断试剂.     

正电子核素标记AnnexinⅤ的研究进展

AnnexinⅤ是一种磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（PS）特异性结合,因此AnnexinⅤ是检测细胞早期凋亡的灵敏指针。利用正电子核素对AnnexinⅤ进行标记后,通过与PS的结合可检测细胞凋亡,实现活体无创正电子发射计算机断层显像（PET）,从而进行人体细胞凋亡研究,达到疾病早期诊断的目的。本文就正电子核素标记AnnexinⅤ用于凋亡显像的研究现状进行综述。     

放射性核素凋亡显像检测细胞凋亡研究进展

放射性核素细胞凋亡显像具有直观、无创伤和实时在体观察细胞凋亡等特点,在脑及心肌细胞缺血再灌注损伤的观察、器官移植后排斥反应的检测、肿瘤放疗和化疗效果的评估和多巴胺能神经元早期凋亡的检测等方面具有较好的应用前景,但仍有许多问题有待于进一步探讨。     

细胞凋亡显像剂99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ的制备及其生物评价

合成了双功能螯合剂琥珀酰亚胺-6-肼基吡啶-3-甲酸(HYNIC)。并将HYNIC成功地应用于AnnexinⅤ的偶连和标记中。结果表明:每个AnnexinⅤ的蛋白分子能偶连2个HYNIC,标记率为98%,标记物的放化纯度在6 h后仍然>95%;99Tcm-HYNIC-AnnexinⅤ在动物模型中能有效检测细胞凋亡。因此,99Tcm-HYNIC-AnnexinⅤ有望成为检测肿瘤治疗效果的显像剂。     

微波辐射诱导HeLa细胞凋亡机制的初步研究

采用2.5、5、10、15和20 mW/cm2强度微波辐射HeLa细胞20 min,观察了不同强度微波辐射对HeLa细胞增殖、细胞周期的影响。结果表明,受微波辐射的细胞生长受到抑制,数量明显减少,细胞皱缩变形,体积缩小。随着微波辐射强度的增加,细胞增殖受到明显抑制,呈现剂量依赖性。5、10和20 mW/cm2微波辐射的HeLa细胞培养24 h后,G2/M期的比例分别为11.6%、14.5%和18.2%,与对照组相比有显著性差异(p<0.05),由此可见微波辐射可将细胞阻滞于G2/M期。微波辐射后,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达水平下降,Bax和Caspase-3表达水平逐渐升高,证明其作用机制可能与Bcl-2表达水平下调,Bax和Caspase-3表达水平升高相关。     

射线诱导的细胞凋亡过程中端粒酶表达及其活性

利用原位端粒酶-凋亡双染色法检测A549细胞和L02细胞hTERT和凋亡双表达，端粒序列扩增检测(TRAP)方法检测群体细胞端粒酶活性，研究γ射线照射人肿瘤细胞和正常细胞后端粒酶的表达变化与凋亡-发生的关系。结果表明，1—SGy照射后24—72h，A549细胞和L02细胞内hTERT表达增强，端粒酶和凋亡双染色阳性细胞随照射剂量的提高而增多；在凋亡发生的过程中，群体细胞端粒酶活性呈剂量依赖性增强，提示放射线诱导人肿瘤和正常细胞凋亡可能不是通过直接抑制端粒酶活性的机制；而辐射诱导端粒酶活性增高可能是细胞修复辐射损伤的机制之一。     

Annexin V的~(125)I标记及其在正常小鼠体内的分布

采用Iodogen法对Annexin V进行了125I标记,并观察了其在正常小鼠体内的分布情况。标记结果显示,125I-Annexin V标记率达94.9%,纯化后放化纯度达99%;室温放置72 h后,放化纯度仍保持在92%以上,表明其体外稳定性较好。生物分布结果显示,125I-Annexin V在肾脏中放射活性最高,其次为血液、肝脏、心、肺、脾;脑不吸收125I-Annexin V;肌肉、骨骼组织摄取亦较少;各组织、器官放射性摄取在1 h内除血液下降稍慢外,其余均有明显下降。表明125I-Annexin V适合用作核医学诊断试剂。     

新型乏氧显像剂99Tcm-N4IPA的制备及小鼠体内外乏氧选择性研究

目的 探求结构简单、易于标记、性能优良的新型乏氧显像剂。方法 用锝标记新型乏氧配体N4IPA（1-（4-硝基咪唑-1-）丙醛羟氨基化合物）,用TLC及HPLC法对标记物进行质控,并检测标记物的体外稳定性、脂水分配系数、血液清除情况,最后通过体外细胞摄取实验及荷瘤动物体内分布研究了解标记物在乏氧细胞和肿瘤组织中的聚集情况。结果 标记物的放化纯度>90%,脂水分配系数2.71±0.05（n=3）,为亲脂性;在室温、37℃及37℃+人血白蛋白3种情况下均较稳定。体外细胞摄取实验表明：加入标记物后1-4h,乏氧体系中CHO细胞对标记物的摄取百分数均高于相应的非乏氧体系（p<0.05）,且乏氧体系中CHO的摄取百分数随时间延长而逐渐增高。血液清除实验表明：99Tcm-N4IPA在正常小鼠体内的血液清除符合二室代谢模型,其分布相半衰期为15 min,消除相半衰期为10.2 h。荷脑胶质瘤U87裸鼠显像及体内分布数据表明：标记物主要经肾脏排泄,还有部分经肝肠途径排泄。标记物在肿瘤内有一定聚集,其2 h及4 h的瘤/血分别为1.57±0.31和1.98±0.25,而瘤/肌肉分别为11.89±1.64和13.11±1.47。结论 99Tcm－N4IPA具有乏氧选择性,可使肿瘤清晰显影,有望成为一种新的肿瘤乏氧显像剂,但尚有待于进一步研究。     

Preparation of 99mTc-HYNIC-Annexin V

1 Introduction Apoptosis or programmed cell death plays an important role in homeostasis and embryogenesis.[1,2] Apoptosis is an intimate component of normal organ function. On the other hand, excessive or deficient apoptosis is a major cause of diseases.[3] Although the importance of apoptosis in disease is well appreciated, laboratory tests for apoptosis are not ordered routinely for diagnosis or to plan therapy, because of the com-plexity of making these measurements. Annexin V, a 36kD hu…     

90Y标记的不同氨基酸序列的RGD环肽的制备及在荷人神经胶质瘤动物模型中的评价

制备⁹⁰Y-DTPA-Bz-NH-SA-c(KRGDf) 和⁹⁰Y-DTPA-Bz-NH-c(ERGDf),并对其体内外性质进行比较。ITLC和HPLC分析结果表明,在pH=5.5和80 ℃条件下反应20 min, 2种标记物的标记率均大于99%,并且2种标记物均具有良好的体外稳定性。荷人神经胶质瘤裸鼠生物分布实验数据表明,2种标记物在各组织的摄取没有显著性差异,且均具有良好的肿瘤靶向性和体内稳定性。2种标记物主要通过肾脏排泄,同时也有一部分标记物通过肝胆系统排泄。良好的体内外性质证明,KRGDf环肽和ERGDf环肽均可进一步用于聚合物多肽药物的开发。     

SPECT V/Q断层显像半定量分析联合测定血浆D-二聚体诊断肺栓塞的价值

研究V/Q断层显像半定量分析联合测定血浆D-二聚体早期、准确诊断肺栓塞的价值,尤其在小面积肺栓塞诊断中的应用优势。疑诊肺栓塞来核医学科行V/Q断层显像患者共156例,以CT肺血管造影（computed tomographic pulmonary angiography, CTPA）检查及临床诊断为分组标准,肺栓塞组患者101例,非肺栓塞组患者55例。比较SPECT V/Q断层显像、血浆D-二聚体测定以及SPECT V/Q断层显像联合血浆D-二聚体测定三种方法对肺栓塞的诊断效能。应用Philips公司Oasis图像后处理软件对栓塞面积进行半定量分析,进一步评估对于肺栓塞面积占双肺容积≤15%的小面积肺栓塞的诊断价值。结果显示,血浆D-二聚体测定对于肺栓塞的诊断有较高的灵敏度（70.3%）,但是特异性（61.8%）差;SPECT V/Q断层显像半定量分析对于肺栓塞的诊断具有较高的灵敏度和特异性,分别为85.1%、90.9%;而二者联合应用,诊断肺栓塞效能最高,灵敏度和特异性分别为91.1%、98.2%。 其中SPECT V/Q断层显像半定量分析对于肺栓塞面积小于15%的小面积肺栓塞诊断有优势。放射性核素SPECT V/Q断层显像联合测定血浆D-二聚体能显著提高肺栓塞的诊断效能,是临床实用、安全有效的肺栓塞疑诊患者诊断策略。