miR-140靶向LRP4基因对甲状腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨miR-140对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及潜在的作用机制。方法:运用qRT-PCR检测甲状腺癌TPC-1细胞和正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-140和LRP4的表达水平;将miR-con组(转染miR-con)、miR-140组(转染miR-140 mimics)、si-con组(转染si-con)、si-LRP4组(转染pcDNA-LRP4)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-140组(转染anti-miR-140)、miR-con+WT-LRP4组(转染miR-con和WT-LRP4)、miR-con+MUT-LRP4组(转染miR-con和MUT-LRP4)、miR-140+WT-LRP4组(转染miR-140 mimics和WT-LRP4)、miR-140+MUT-LRP4组(转染miR-140 mimics和MUT-LRP4)、miR-140+pcDNA组(转染miR-140 mimics和pcDNA)、miR-140+pcDNA-LRP4组(转染miR-140 mimics和pcDNA-LRP4)均用脂质体法转染至TPC-1细胞;采用CCK-8法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果:甲状腺癌TPC-1细胞在正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1、miR-140的表达水平显著降低,LRP4 mRNA和蛋白质的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-140、抑制表达LRP4均可抑制TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭;miR-140可靶向负调控LRP4的表达。过表达LRP4可逆转miR-140过表达对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:miR-140可抑制甲状腺癌TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向LRP4有关,将可为甲状腺癌的诊断、治疗提供新靶点。     

miR-219-5p,miR-19b-1和miR-25在骨肉瘤患者血清中的表达以及与肺转移的关系

目的 探索骨肉瘤(osteosarcoma, OS)肺转移的外周血清miRNA的表达差异以及与肺转移的相关性。方法 选取2017年4月至2018年4月西安交通大学医学院附属红会医院肿瘤外科、西安交通大学第一附属医院肿瘤外科和西安交通大学第二附属医院肿瘤外科的88例骨肉瘤患者(其中41例发生肺转移)外周血样本,使用miRNA微矩阵芯片预筛选6例患者中与OS肺转移相关的miRNA分子;使用q PCR检测OS肺转移相关的差异miRNA分子的表达;使用单因素Logistic回归分析6个差异miRNA分子与OS肺转移的相关性。结果 肺转移与未转移OS患者的血清miRNA差异有统计学意义;Logistic回归分析显示,miR-219-5p、miR-19b-1和miR-25与肺转移关系密切(P<0.05)。结论OS患者肺转移前后血清miRNA有明显差异;血清miR-219-5p, miR-19b-1和miR-25与肺转移相关性密切,可提示OS肺转移的发生并作为潜在的预测OS肺转移生物学指标。     

斑马鱼miR-30e对血细胞生成的作用机制研究

microRNA(简写为miRNA)是一类内源基因编码的单链RNA分子,参与转录后基因的表达调控,在血液生成过程中起着重要作用。为研究miR-30e对鱼类血液生成的作用机制,以斑马鱼Danio rerio作为模式生物,针对青藏高原裂腹鱼血液组织中高表达的miR-30e,利用生物信息软件预测斑马鱼miR-30e的靶基因,构建含斑马鱼ALAS2-3′UTR序列的双荧光素酶报告质粒与斑马鱼miR-30e进行共转染,检测细胞双荧光素酶活性的变化;同时构建含斑马鱼ALAS2-3′UTR序列的绿色荧光蛋白质粒,与miR-30e共同显微注射斑马鱼胚胎,观察GFP荧光强度与蛋白表达量的变化。结果表明:斑马鱼胚胎在注射miR-30e模拟体48 h后,其血红蛋白表达明显减少;转染miR-30e的293T细胞双荧光素酶活性显著降低(P<0.05);斑马鱼胚胎注射miR-30e模拟体24 h后,其GFP荧光强度明显降低,且GFP蛋白表达量明显减少。研究表明,ALAS2基因是miR-30e的一个靶基因,miR-30e通过抑制ALAS2表达而抑制血红细胞的生成。     

miR-124通过靶向调控DNMT3B抑制胃癌细胞增殖

目的明确miR-124是否通过靶向调控DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)表达而抑制胃癌细胞增殖能力,从而揭示miR-124的抑瘤分子机制。方法采用MTT检测miR-124对人胃癌MKN-45细胞的增殖能力;构建DNMT3B 3'UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-124对DNMT3B3'UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-124 mimics转染胃癌细胞MKN-45,采用Western blot检测DNMT3B表达水平。结果 MTT结果显示,在转染miR-124 mimics 24、48和72 h后OD值(0.264±0.023、0.377±0.041、0.524±0.029)分别与对照组(0.414±0.051、0.619±0.065、0.898±0.072)比较,差异均有显著性(均P<0.05),且具有时间依赖性;荧光素报告载体系统证实DNMT3B是miR-124直接调控的靶基因。Western blot结果显示,miR-124可抑制DNMT3B蛋白的表达。结论 miR-124通过靶向调控DNMT3B的表达而抑制胃癌细胞增殖能力。     

姜黄素对高氧诱导肺泡II型上皮细胞损伤的保护作用及机制

目的 探讨姜黄素对高氧诱导肺泡II型上皮细胞(AEC2)损伤的保护作用,以及β-catenin/p300相互作用与姜黄素保护AEC2的关系。方法 采用分离培养的AEC2建立高氧诱导的细胞损伤模型。培养AEC2细胞随机分为对照组、高氧组、姜黄素组(分为高、中、低剂量3个亚组)、IQ-1(β-catenin/p300相互作用抑制剂)组、p300 si RNA组、siRNA阴性对照组。药物处理24 h后,CCK-8法和细胞计数板检测AEC2细胞增殖活力和细胞总数,定量PCR检测AEC2、肺泡I型上皮细胞(AEC1)的标记基因SP-C和AQP5 mRNA表达量,流式细胞仪检测AQP5、SP-C阳性细胞百分比,Western blot检测β-catenin、p300蛋白表达量。结果 与对照组比较,高氧组AEC2细胞增殖活力、细胞计数、SP-Cm RNA表达以及AEC2百分比均明显减少(P<0.01),而AEC1标记基因AQP5m RNA表达、AEC1百分比、AEC2向AEC1转分化的中间型细胞百分比则明显增大(P<0.01),β-catenin、p300蛋白表达量明显增加(P<0.01)。相反,姜黄素组、IQ-1组和p300 si RNA组AEC2细胞增殖活力、细胞计数、SP-C mRNA表达以及AEC2百分比均显著增加(P<0.01),而AQP5 mRNA表达、AEC1百分比、转分化中间型细胞百分比均减少(P<0.01),β-catenin、p300蛋白表达量明显减小(P<0.01)。结论 姜黄素对高氧诱导培养肺泡II型上皮细胞(AEC2)损伤具有保护作用,其机制与抑制β-catenin/p300相互作用有关。     

维吾尔族和汉族妇女宫颈癌与宫颈CINⅡ～Ⅲ级组织中miR-145的表达与意义

目的检测miR-145在新疆维吾尔族和汉族妇女宫颈癌与宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ～Ⅲ级组织中的表达情况,探讨其与宫颈癌病理特征的关系及意义。方法采用实时荧光定量qRT-PCR技术检测维吾尔族和汉族妇女宫颈石蜡组织标本(宫颈癌50例、CINⅡ～Ⅲ级48例、正常宫颈22例)中miR-145的表达,分析其在维吾尔族和汉族妇女不同宫颈病变中的表达差异及其与宫颈癌常见病理特征的关系,绘制受试者工作曲线(ROC)分析miR-145作为宫颈癌肿瘤标记物的诊断价值。结果 miR-145在维吾尔族(χ~2=12.531)和汉族(χ~2=13.619)妇女宫颈癌组织中的表达均显著低于CINⅡ～Ⅲ级组织和正常宫颈组织,差异有统计学意义(均P<0.05),同类宫颈病变组织维吾尔族和汉族妇女的表达差异无统计学意义(均P>0.05);miR-145的表达量与宫颈癌组织分化程度(Z=-2.816)、FIGO分期(χ~2=13.513)、淋巴结转移(Z=-2.210)表达有差异(均P<0.05),与病人年龄(Z=-0.586)、肿瘤直径(Z=-0.799)、病理类型(Z=-0.986)、肌层浸润(Z=-1.134)均无相关(均P>0.05);ROC曲线分析miR-145区分宫颈癌与正常者的曲线下面积为0.887(95%CI:0.811～0.964,P=0.000),灵敏度81.8%,特异度76.0%。结论 miR-145参与宫颈癌的发生发展,在宫颈癌组织中表达明显下调,且无民族表达差异,可能成为宫颈癌诊断、靶向治疗及病情预测的新型分子标记。     

MicroRNA-638在骨肉瘤中表达下调及对其细胞增殖的影响

目的探讨miR-638在人骨肉瘤(OS)细胞增殖行为中的影响。方法通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-638在人OS组织及癌旁组织、人OS细胞株(MG63、U2OS、HOS、SaOS2)和正常人成骨NHOst细胞株中的表达;用LipofectamineTM2000转染miR-638模拟物或抑制物,细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)检测转染后的吸光光度值,平板克隆形成实验检测菌落数量。结果 miR-638在各组细胞中均有表达;OS细胞株中miR-638的表达明显下调(P<0.05);高表达miR-638能抑制OS MG63和U2OS细胞的增殖(P<0.05)。结论miR-638高表达能抑制OS细胞的增殖。     

HBx与microRNA-21在肝细胞肝癌中的相互作用及其机制研究

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因编码的X蛋白(HBx)与micro RNA21(mi R-21)在肝细胞癌Hep G2细胞中的作用。方法:选取人肝癌细胞株Hep G2细胞,随机分为Hep G2细胞组、GFP腺病毒组和HBx腺病毒组,其中GFP腺病毒组和HBx腺病毒组细胞分别感染GFP腺病毒和HBx腺病毒,采用流式细胞仪检测各组细胞周期,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot检测ER蛋白表达,RT-PCR检测HBx m RNA和mi R-21表达。结果:HBx腺病毒组HBx m RNA相对表达量为(0.805±0.030),明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P<0.05);HBx腺病毒组细胞G1期比例为(34.24±2.10)%,明显低于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P<0.05),而S期细胞比例为(56.80±2.09)%,明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P<0.05);HBx腺病毒组mi R-21表达为(1.892±0.038),明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P<0.05),而ERα蛋白表达为(0.21±0.03),明显低于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P<0.05);HBx腺病毒组穿膜细胞数为(78.12±8.78),明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P<0.05)。结论:HBx可促进肝癌细胞增殖及侵袭能力,其机制可能与上调mi R-21表达和下调ER表达有关。     

miR-381-3p靶向SP1抑制mTOR/p70s6k信号通路调控食管癌细胞的增殖和凋亡

目的 探讨miR-381-3p靶向特异性蛋白1（specificity protein 1，SP1）抑制mTOR/p70s6k信号通路对食管癌细胞的增殖和凋亡调控作用。方法 RT-qPCR检测正常食管细胞和食管癌细胞中miR-381-3p与SP1 mRNA的表达，利用Lipofectamine 2000将miR-381-3p mimic 质粒、miR-control质粒、SP1质粒分别或联合转染进入EC9706细胞，基因预测软件预测miR-381-3p的靶基因，双荧光素酶报告检测靶向关系，MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡，蛋白质印迹分析检测Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、B淋巴细胞瘤2（B-celllymphoma，Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein， Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cysteine aspartic acid protease 3，Caspase-3）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）、p-mTOR、p70s6激酶(The p70s6 kinase，p70s6k)、p-p70s6k和SP1蛋白表达水平。结果 miR-381-3p在食管癌细胞EC9706中低表达（P < 0.01），而SP1高表达（P < 0.01）；miR-381-3p与SP1 3’UTR区存在结合位点，且miR-381-3p直接靶向抑制SP1表达；过表达miR-381-3p后，食管癌细胞增殖明显降低（P < 0.01）、Ki67和PCNA蛋白表达明显下调（P < 0.01），细胞凋亡率明显降升高（P < 0.01）、Bax/Bcl-2和Cleaved caspase-3蛋白表达明显上调（P < 0.01），mTOR和p70s6k磷酸化明显减少（P < 0.01）；而高表达SP1可以逆转miR-381-3p对食管癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。抑制mTOR/p70s6k信号通路后，食管癌细胞增殖明显降低（P < 0.01），细胞凋亡率明显增加（P < 0.01），增殖标记蛋白Ki67表达明显下调（P < 0.01），凋亡标记蛋白Cleaved caspase-3表达明显上调（P < 0.01），而SP1蛋白表达无明显变化。结论 miR-381-3p可能通过靶向SP1抑制mTOR/p70s6k信号通路来抑制食管癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡。     

miR-34a抑制人鼻咽癌细胞生长与侵袭

目的探讨miR-34a在人鼻咽癌CNE2细胞中的生物学功能。方法采用MTT、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验分别检测过表达miR-34a对人鼻咽癌CNE2细胞的生长与侵袭作用。结果 MTT检测发现,过表达miR-34a可抑制人鼻咽癌CNE2细胞的生长增殖;细胞划痕和Transwell侵袭实验显示,在鼻咽癌CNE2细胞中过表达miR-34a 48 h后划痕愈合率为40.3%±9.0%,与对照组(76.3%±6.8%)比较,能明显减缓CNE2细胞划痕的愈合,转染miR-34a mimics 48 h后穿过基底膜的细胞数为71±10,与对照组(147±5)比较,能明显减缓CNE2细胞侵袭能力(P<0.01)。结论 miR-34a可抑制鼻咽癌CNE2细胞生长与侵袭。